Interneuron diversity is one of the key factors to hinder understanding the mechanism of cortical neural network functions even with their important roles. We characterized inhibitory interneurons in layer II/III of the rat primary visual cortex, using patch-clamp recording and confocal reconstruction, and classified inhibitory interneurons into fast spiking (FS), late spiking (LS), burst spiking (BS), and regular spiking non-pyramidal (RSNP) neurons according to their electrophysiological characteristics. Global parameters to identify inhibitory interneurons were resting membrane potential (>-70 mV) and action potential (AP) width (<0.9 msec at half amplitude). FS could be differentiated from LS, based on smaller amplitude of the AP (<∼50 mV) and shorter peak-to-trough time (P-T time) of the afterhyperpolarization (<4 msec). In addition to the shorter AP width, RSNP had the higher input resistance (>200 $M{Omega}$) and the shorter P-T time (<20 msec) than those of regular spiking pyramidal neurons. Confocal reconstruction of recorded cells revealed characteristic morphology of each subtype of inhibitory interneurons. Thus, our results provide at least four subtypes of inhibitory interneurons in layer II/III of the rat primary visual cortex and a classification scheme of inhibitory interneurons.
아프리카 왕달팽이 (Achatina fulica)의 내장신경절(visceral ganglion)과 우 체 벽신경절(right parietal ganglion)을 투과전자현미경을 통해 관찰한 결과 5종류(type-A, B, C, D 그리고 E)의 신경분비세포(neurosecretory cell)와 그 주위를 둘러싸고 있는 신경망 등이 관찰되었다. A형 세포(직경 $35{\mu}m$)는 두 신경절의 피질부에서 가장 많이 관찰된 삼각형 또는 불규칙한 세포로서, 세포질에는 직경 $1{\mu}m$인 큰 과립과 $0.1{\mu}m$정도인 작은 둥근과립들이 관찰되었다. 또한 작은 과립들은 전자밀도가 높은 과립과 전자밀도가 중등도인 과립 등 두 종류로 구분되었다. B형 세포(직경 $19\times12{\mu}m$)는 두 신경절의 피질부와 수질부의 여러 부위에서 고르게 관찰된 세포로서 A형 신경분비세포와 그 형태가 비슷하였다. 세포질 내에는 $0.1{\mu}m$정도 크기의 전자밀도가 높은 과립들로 가득찬 반면 둥글고 큰 과립(직경 $0.7{\mu}m$정도)들은 드물게 관찰되었다. C형 세포는 크기가 $8\times6{\mu}m$정도인 가장 작은 세포로서, $6\times5{\mu}m$정도인 큰 핵을 소지하고 있었다. 세포질에는 $0.23{\mu}m$정도인 전자밀도가 높은 과립들로 가득차 있었는데, 이들은 $0.03{\mu}m$정도 크기의 작은 과립들이 둥글게 모여 있는 특이한 형태였다. D형 세포는 $28\times20{\mu}m$정도 크기의 중형세포서, 타원형 또는 불규칙한 형태를 보였다. 이들은 두 신경절의 수질부와 피질부 중, 피질부에서 가장 많은 수가 관찰되었다. 세포질은 전자밀도가 높아 어둡게 관찰되고 직경 $1.6{\mu}m$와 $0.6{\mu}m$인 두 종의 둥근 과립들이 관찰되었다. E형 세포는 크기가 $100\times50{\mu}m$정도인 대형세포로서 두 신경절의 상단부와 중앙부위에서 드물게 나타났다. 핵은 $70\times30{\mu}m$정도로 세포질 대비 매우 컸다. 이들은 다양한 크기의 전자밀도가 높은 둥근 과립(직경 $1\sim0.2{\mu}m$)을 소지하고 있었으며, 세포의 표면은 여러 형태의 사상족(filopodia)들을 뻗어 노쇠한 세포들을 포식하였다. 신경망(neuropiles)들은 신경분비세포를 둘러싸고 있었으며, 신경섬유 속에서 다양한 종류의 연접소포들(synaptic vesicles)이 관찰되었는데, 전자밀도, 크기 그리고 모양에 따라 6종류로 분류되었다.
This study was aimed to examine relaxing effects of Acanthopanacis cortex(AC) through nitric oxide(NO) production and phosphodiesterase type 5(PDE-5) inhibition in corpus cavernosum. In order to define the relaxation effects of AC extract, rabbit corpus cavernous tissues were prepared in $2{\times}2{\times}8mm$ sized strip. AC extract ($0.01-3.0mg/m{\ell}$) were treated in contracted strips induced by phenylephrine(PE) and $N{\omega}$-nitro-L-arginine (L-NNA) was treated before AC extract-treated. And calcium chloride($Ca^{2+}$) 1 mM was infused into precontracted strips after pretreatment of AC extract in $Ca^{2+}-free$ krebs-ringer solution. When AC extract was applied to human umbilical vein endothelial cell(HUVEC), cell viability was measured by MTT assay, and NO concentration was measured by Griess reagent system. Ratio of smooth muscles to collagen fibers and eNOS, PDE-5 positive reaction were measured by histochemical and immunohistochemical process on mice corpus cavernosum. AC extract significantly affected relaxion of the cavernous strips, and the pretreatment of L-NNA inhibited AC extract-induced relaxation. Contraction induced by the addition of $Ca^{2+}$ was inhibited by treatment with the AC extract in $Ca^{2+}-free$ solution. In AC group, NO concentration, ratio of smooth muscle to collagen fibers, and eNOS positive reaction were increased, PDE-5 positive reaction was decreased compared to PE group. As a result of the above experiment, it was thought that AC extract inhibits the inflow of extracellular $Ca^{2+}$ by activating cGMP through the increase of eNOS / NO and the decrease of PDE-5 which inhibits cGMP activity, in the corpus cavernosum.
Objectives : Recently, natural bioactive components catch a major attention for their potent anticarcinogenic activity. In this study, the inhibitory effect of Cinnamomi Cortex (CC) was examined in PC3 prostate cancer cells. Methods : The toxicity of CC extract was evaluated with cell viability and cell morphology. The activity of Yes associated protein (YAP) was tested with qRT-PCR for the target gene expression such as CTGF and AMOTL2. Western blotting was performed for the evaluation of phospho-YAP level. For cell motility analysis, cellular motility was imaged by live imaging system for 6 hr. Successive images were used for the generation of movie file. Using this movie file, cellular migration was manually tracked and analyzed using time-lapse microscope and Fiji software. Results : Cytotoxicity of CC extract was not detected at $500{\mu}g/m{\ell}$ or below concentration. Although $500{\mu}g/m{\ell}$ of CC extract reduced CTGF and AMOTL2 gene expression as YAP target genes, it was not statistically significant (CTGF expression P=0.0605, AMOTL2 expression P=0.4478). However, phosphorylated YAP was highly enhanced by CC extract treatment, when normalized with total YAP protein expression, suggesting YAP activation was inhibited. Finally prostate cancer cell motility was markedly reduced by $500{\mu}g/m{\ell}$ of CC extract. Conclusions : CC extract suppresses cancer cell motility and migration ability through inhibiting YAP activation without prostate cancer cell death, suggesting that this herb might be effective therapeutic drug for prostate cancer metastasis.
본 연구는 미라 모발에 존재하는 멜라닌과립의 보존 상태와 모양을 규명하기 위해서 1250kV의 초고압전자현미경(high voltage electron microscope: HVEM)을 사용하여 3차 구조를 분석하였다. 미라 모발에서 피질에 분포하고 있는 멜라닌과립은 큐티클층에 인접한 바깥쪽 피질에 집중적으로 분포하고 있다. 이들 부위에는 다량의 멜라닌과립들이 무리를 지어 존재하고 있어서 현대인의 정상 모발에 있는 멜라닌과립의 분포양상과 뚜렷한 차이점을 나타내었다. 초고압전자현미경으로 ${\pm}60$도의 범위에서 1도 간격으로 촬영한 결과 멜라닌과립은 길쭉한 타원형의 형태로 크기가 다양하게 관찰되었다. 과립의 크기는 단축 직경이 $0.3-0.6{\mu}m$이고, 장축 직경은 $0.5-1{\mu}m$로 측정되었다. 결론적으로 초고압전자현미경은 일반 투과전자현미경보다 높은 해상도와 투과력을 가져서 두꺼운 절편의 생물 시료 구조분석에 용이하다.
Thirty six essential oils from herb drugs entered in Korean official formulary, which are frequently used in oriental region, were tested for antibiotic resistance inhibition. When the oils were combined with ampicillin (Am) or amoxicillin (Amx) they showed significant inhibitory effects on the growth of multi-drug resistant Staphylococcus aureus SA2 in considerably low concentration. The most effective combinations were oils from Acanthopanacis Cortex ($0.49{\mu}g/mL$) with Am and Cnidii Rhizoma and Lonicerae Flos (2.77 and $2.79{\mu}g/mL$, respectively) with Amx as shown in minimum resistance inhibitory concentrations.
목단피의 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 함량 분석 및 원료의 표준화를 위하여 분석법의 개발 및 검증을 실시하였다. 기존의 보고된 분석법을 개선하여 분석법을 개발하고 확립된 분석법에 대한 분석법 검증을 실시하였다. 분석법 검증은 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 검출한계 및 정량한계를 통하여 분석법의 신뢰성을 검증하였다. HPLC를 이용한 분석방법에서 표준용액의 머무름 시간과 목단피 추출물의 머무름 시간이 일치하였으며, 동일한 spectrum을 나타내는 것을 확인하여 분석법의 특이성을 검증하였다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 검량선은 상관계수 값이 각각 1.0000, 0.9998로 나타나 우수한 직선성을 보여주어 분석에 적합함을 확인하였다. 농도를 아는 시료에 인위적으로 저농도, 중간농도, 고농도의 표준물질을 첨가하여 정밀성 및 정확성을 계산하였다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 정밀성은 일간 정밀성, 일내 정밀성으로 확인하였으며, oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 일간 정밀성은 각각 0.70~3.19%, 1.74~2.43% 수준으로 확인되었으며, 일내 정밀성은 0.32~0.92%, 0.62~2.28% 수준으로 5% 이하의 우수한 정밀성을 보였다. 정확성 측정 결과 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 일간 정확성은 98.33~102.11%, 97.72~118.12%를 나타내었으며, 일내 정확성은 98.44~101.56%, 97.10~112.00% 수준으로 우수한 정확성을 나타내었다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 검출한계는 각각 $0.23{\mu}g/mL$, $0.25{\mu}g/mL$였고 정량한계는 $0.71{\mu}g/mL$, $0.77{\mu}g/mL$로 나타내어, 저농도에서도 검출이 가능함을 확인하였다. 분석법 검증 결과, 확립된 분석법은 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계 및 정량한계가 모두 우수한 분석법임을 검증하였다. 또한, 검증된 분석법을 이용하여 목단피 추출물 시료 중 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 함량을 분석한 결과 oxypaeoniflorin $6.43{\pm}0.20mg/dry\;weight\;g$, paeoniflorin $20.25{\pm}0.37mg/dry\;weigh\; g$의 함량을 가지고 있는 것으로 확인되었다. 본 연구 결과 목단피의 지표성분인 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 HPLC를 이용한 동시분석방법이 적합한 분석방법임이 검증되었다.
This experiment was performed to investigate the acute and chronic effects of lead on cerebral cortex. In acute treatment, mouse were injected with lead acetate at dose of 0.3 mmole/kg body weight, and in chronic treatment, mouse were supplied 0.03 M lead acetate sol. in the place of water. After treatment, mouse were sacrificed at time intervals of 24, 48, 72, and 96 hours in acute treatment and at time intervals of 4 weeks and 8 weeks in chronic treatment. In acute treatment, acetylcholinesterase activity is reduced at 72 hours and recovered at 96 hours in homogenate, and reduced at 24 hours and recovered at 72 hours in crude synaptosomes. In chronic treatment, acetylcholinesterase activity is increased in young mouse but reduced in mother mouse. Ultrastructural changes were composed of swelling of Golgi apparatus, nerve terminals with diminished synaptic vesicles, and vacuolated myeline lamellae of myelinated axon.
가토 신피질에서 분리한 brush border membrane (BBM)과 basolateral membrane vesicle (BLM)에서 유기 음이온인 p-aminohippuric acid (PAH)와 유기 양이온인 tetraethylammonium (TEA)의 이동에 대한 동력학적 분석을 하였다. BLM에서 PAH에 대한 Km과 Vmax값은 각각 $0.34{\pm}0.02\;mM$과 $0.22{\pm}0.07\;nmol/mg\;protein/20s$였으며 BBM에서 각 값은 $8.46{\pm}0.57\;mM$과 $4.43{\pm}0.40\;nmol/mg\;protein/20s$였다. BLM에서 용액내 Na의 제거는 PAH에 대한 Km 값에는 영향없이 Vmax 값을 변화시켰다. BBM에서 TEA이동에 대한 Km과 Vmax 값은 각각 $0.55{\pm}0.15\;mM$과 $1.04{\pm}0.23\;nmol/mg\;protein/20s$였으며 BLM에서 각 값은 $0.46{\pm}0.04\;mM$과 $0.61{\pm}0.06\;nmol/mg\;protein/20s$였다. BLM에서 측정한 유기 이온들의 이동에 대한 Km 값이 신절편이나 분리된 tubule에서 보고된 값과 일치함을 보였으며 이러한 결과는 신세뇨관 세포막을 통한 유기 이온들의 이동 특성이 membrane vesicle을 분리하는 과정에서 변하지 않았음을 가르킨다.
For the development of feasible retinal prosthesis, one of the important elements is acquiring proper judging tool if electrical stimulus leads to patient's visual perception. If evoked potential to electrical stimulus is recorded in primary visual (V1) cortex, it means that the stimulus effectively evokes visual perception. Therefore, in this study, we established VEP recording system on V1 cortex using BioPAC modules as the judging tool. And the measuring system was evaluated by recording VEP of mice. After anesthesia, normal mice (C57BL/6J strain; n = 6) were secured to stereotaxic apparatus (Harvard Apparatus, USA). For the recording of VEP, the stainless steel needle electrode (impedance: $2-5k{\Omega}$) was positioned on the surface of the cortex through the burr hole at 2.5 mm lateral and 4.6 mm caudal to bregma. DA 100C and EEG 100C BioPAC modules were used for the trigger signal and VEP recording, respectively. When left eye was blocked by black cover and right eye was stimulated by flash light using HMsERG (RetVet Corp, USA), VEP response at left V1 cortex was detected, but there was no response at right V1 cortex. Amplitudes and latencies of P2, N3 peaks of VEP recording varied according to the depths of the electrodes on V1 cortex. From the surface upto $600{\mu}m$ depth, amplitudes of P2 and N3 increased, while deeper than $600{\mu}m$, those amplitudes decreased. The deeper the insertion depth of the electrode, the latency of N1 peaks tends to be delayed. However, there was no statistically significant difference among the latencies of P2 and N3 peaks (P > 0.05, ANOVA). Our VEP recording data such as the insertion depth and the latency and amplitudes of peaks might be used as guidelines for electrically-evoked potential (EEP) recording experiment in near future.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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