야생 설치류인 청서 뇌의 줄무늬체에서 neuropeptide Y(NPY) 면역반응신경세포의 분포상태를 관찰하기 위하여 뇌를 4% paraformaldehyde로 관류고정한 전뇌를 $40{\mu}m$의 냉동연속관상절편으로 작성한 후 cresyl violet로 염색하여 전뇌의 각 부분을 구분하고 NPY항체에 대한 면역염색을 실시하였다. 줄무늬체는 속섬유막(internal capsule)보다 앞쪽에서는 꼬리핵(caudate nucleus)과 조가비핵(putamen)이 꼬리-조가 비핵(caudate-putamen)의 한부분으로 구성되어 있는 반면, 속섬유막이 관통하는 부분에서는 꼬리핵, 조가비핵 및 창백핵(globus pallidus)의 세부분으로 구분되었다. 줄무늬체의 NPY면역반응신경세포는 대부분이 중간크기($12-18{\mu}m$)의 세포였다. NPY세포체의 분포는 꼬리-조가비핵과 꼬리핵의 경우에 내측 및 배쪽부분에서 다수 존재하였으며, 조가비핵의 경우는 전체적으로 불규칙하였는데 그중 중심부분이 더욱 적은 수로 관찰되었다. NPY면역반응신경섬유의 밀집도는 전체적으로 낮았으나 반응신경세포체가 많은 부분에서 높은 밀집도를 보였다. 꼬리-조가비핵과 꼬리핵의 경우 내측과 배쪽부분에서 높은 밀집도를 나타내었고 조가비핵의 경우는 불규칙한 밀집도를 보였다. 창백핵에서는 매우 적은 수의 반응섬유들만 관찰되었다. 따라서 청서의 줄무늬체는 꼬리핵, 조가비핵 및 창백핵으로 구분되어 비교적 발달된 구조를 가졌으며, NPY함유 신경세포의 분포형태도 이질성을 나타내는 것으로 보아 줄무늬체의 신경환로가 복잡함을 암시하였다.
Sympathomimetic amines, especially ephedrine, are a major ingredient in proprietary medications for symptomatic treatment of upper respiratory infections. Their frequent uses can lead to occasional instances of abuse and habituation. The clinical symptoms of ephedrine abuse are similar to that of amphetamine psychosis and resemble closely that of schizophrenia. Because both amphetamine psychosis and schizophrenia are thought to be mediated primarily through the action on catecholamines, ephedrine-induced changes of the biogenic amines can be suspected. However, there were few studies about the central effects of ephedrine because of the milder central action than peripheral. Therefore, the present investigation was undertaken to elucidate the relations between the effects of single or repeated administration of ephedrine on the regional levels of biogenic amines in rat brain and ephedrine-induced CNS stimulation. The male Sprague-Dawley rats weighing $100{\sim}200\;g$ were used. After single or repeated administrations of ephedrine, blocks of tissue were obtained from frontal cortex, corpus striatum, hippocampus, thalamus, hypothalamus, substantia nigra and cerebellum. The concentration of biogenic amines(norepinephrine, epinephrine, dopamine, 5-hydroxytryptamine(5-HT)) and their metabolites (3,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC), homovanillic acid(HVA), 5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA)) were measured by means of high performance liquid chromatography-electrochemical detector(HPLC-ECD). The results obtained were as follows: 1) In the normal rat, the concentration of norepinephrine was the highest in hypothalamus. Dopamine, DOPAC and HVA were highest in corpus striatum, and 5-HT and 5-HIAA were highest in substantia nigra. Epinephrine was not detectable in any part of the brain tissue. 2) In a single administration of ephedrine, the concentration of DOPAC was decreased in corpus striatum. However, the other biogenic amines and their metabolites were not changed. 3) In repeated administration of ephedrine, the concentration of norepinephrine was decreased in all brain region checked. Dopamine was decreased in corpus striatum and substantia nigra and, increased in hypothalamus, and HVA was decreased in corpus striatum. 5-HT was decreased in all brain region except cerebellum and, 5-HIAA was decreased only in frontal cortex. The ratio of 5-HIAA/5-HT was increased in corpus striatum, thalamus, hypothalamus and substantia nigra. These data indicated that, although a single administration of ephedrine did not change the central neurotransmitters, repeated administration of ephedrine caused the decreases of norepinephrine and 5-HT in the most regions of brain, which may be responsible for the emergence of abnormal behavioral effect after ephedrine abuse.
Ischemia, the leading cause of strokes, is known to be deeply related to synaptic plasticity and apoptosis in tissue damage due to ischemic conditions or trauma. The purpose of this study was to research the effects of NEES(needle electrode electrical stimulation) in brain cells of ischemia-induced rat, more specifically the effects of Poly[ADP-ribose] polymerase(PARP) on the corpus striatum. Ischemia was induced in SD mice by occluding the common carotid artery for 5 minutes, after which blood was re-perfused. NEES was applied to acupuncture points, at 12, 24, and 48 hours post-ischemia on the joksamri, and at 24 hours post-ischemia on the hapgok. Protein expression was investigated through PARP antibody immuno-reactive cells in the cerebral nerve cells and western blotting. The number of PARP reactive cells in the corpus striatum 24 hours post-ischemia was significantly(p<.05) smaller in the NEES group compared to the global ischemia(GI) group. PARP expression 24 hours post-ischemia was very significantly smaller in the NEES group compared to the GI group. Results show that ischemia increases PARP expression and stimulates necrosis, making it a leading cause of death of nerve cells. NEES can decrease protein expression related to cell death, protecting neurons and preventing neuronal apoptosis.
Sprague-Dawley rats were given freely with 15% ethanol (control) and 15% ethanol containing (1) 0.1% ginseng saponin, (2) 0.02% ginsenoside $Rb_1$, and (3) $Rg_1$ (tests) instead of water for 7 days and aldehyde dehydrogenase (ALDH) and monoamine oxidase (MAO) activity in different regions of brain were examined. In control group, total ALDH activity with indoleacetaldehyde and acetaldehyde as substrate in all different regions was lower than that of normal group except in the hippocampus. The inhibitory effect on the activity was prominent in the corpus striatum and was not in the hippocampus. However, low-$K_m$ ALDH activity in all different regions was much lower than that of normal group. A considerable decrease in mitochondria ALDH activity in cerebellum and striatum was also observed in control group. In test groups total, low-$K_m$, and mitochondria AkDH activities in all different regions were higher than those in control group. Although ALDH activity in the striatum of test group was higher than control group, it was relatively depressed as compared with normal. There was not found a remarkable difference in extent of stimulating effect on the AkDH activity according to the ginseng saponin components. When biogenic aldehydes were used as substrate, ALDH activity with 3,4-dihydroxy-phenylacetaldehyde (DOPAL) in all brain regions of control group was lower than that using 5-hydroxy-indoleacetaldehyde (HIAL) and 3,4-dihydroxyphenylglycolaldehyde (NORAL) as substrate. In control group, ALDH activity with biogenic aldehydes above mentioned was markedly inhibited in the striatum contrary to other regions. The higher ALDH activity with biogenic aldehydes in test group than in control was found in the striatum, cerebrum, and cerebellum. MAO activity in the cerebellum was inhibited in control group and slightly increased in test group. The results of present study suggest that the corpus striatum is significantly affected by ethanol exposure while the hippocampus is not and that ginseng saponin fraction and ginsenosid es might have a preventive effect against depression of brain ALDH activity by chronic administration of ethanol.
Male Sprague-Dawley rats were exposed to the toluene at 3,000${\pm}$200ppm via inhalation for two hours (single inhalation group), three weeks by two hours per day, six days per wee k (repeated inhalation group). We examined the level of excitatory amino acids of the extracellular neurotransmitter within the corpus striatum of rats by using in vivo microdialysis. Aspartate (Asp) and glutamate (Glu) of excitatory amino acid neurotransmitters were generally decreased in the inhalation groups compared with the control group, and more significantly decreased in the repeated inhalation group than in the single inhalation group except that Asp was increased from 60 min after the beginning of the inhalation to 30 min after the termination.
한국응용약물학회 1998년도 Proceedings of UNESCO-internetwork Cooperative Regional Seminar and Workshop on Bioassay Guided Isolation of Bioactive Substances from Natural Products and Microbial Products
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pp.197-197
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1998
Chronic electroconvulsive shock(ECS) was shown to Increase phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate(PIP$_2$) breakdown and the activity of PLC with the accumulation of inositol-1,4,5-triphosphate(IP3). The purpose of the present study was to determine the effect of ECS on the expression of phospholipase C(PLC) isotypes in rat brain. Two groups of animals were prepared: sham and ECS treated groups. Rats in ECS treated groups received maximal ECS(70mA, 0.5second, 60㎐) by constant current stimulator through ear-clip to induce tonic extension seizures for 12 consecutive days. The expression of PLC isotypes in rat brain was determined by immunohistochemical procedure using sagital section of rat brain. The immunoreactivity of PLC${\beta}$1 was observed in corpus striatum, hippocampus, thalamus and that of PLC${\gamma}$1 in corpus striatum, hippocampus, thalamus, frontal cortex, parietooccipital cortex, limbic forebrain, pons, medulla, superior colliculus, inferior colliculus, rest of midbrain. The amount of PLC was analyzed by Western blot using antibodies against PLC${\beta}$1 and PLC${\gamma}$1. Chronic ECS reduced the immunoreactivity of PLC${\beta}$1 in corpus striatum, hippocampus, thalamus but had little effect on PLC${\gamma}$1. To quantify this change, quantitative Western blot using antibodies against PLC${\beta}$1 and PLC${\gamma}$1 was conducted. The immunoreactivity of PLC${\beta}$1 in ECS treated rat whole brain was decreased by 40 % in cytosolic fraction and 26 % in membrane fraction. This different effect of ECS on PLC isotypes may results from the difference of their activation mechanisms and the different effects of ECS on them. The results from the present study suggest that chronic ECS primalily affects neurotransmitter receptors related IP$_3$ signaling in rat brain.
Objectives : Parkinson's disease is a well-known neurodegenerative disease characterized by dopaminergic cell death in the substantia nigra. The reactive gliosis by activated astrocytes and microglias is no more regarded as a simple sequel of neuronal cell death. Microglial activation takes place in a stereotypic pattern with graded morphologic and functional(resting, activated and phagocytic) changes. In Parkinson's disease animal model, the degree of microglial activation along the nigro-striatal dopaminergic tract has not been studied intensively. The purpose of this study was to elucidate the characteristics of microglial reaction and to grade its degree of activation at substantia nigra and corpus striatum using 6-hydroxydopamine induced rat model of Parkinson's disease. Methods : Using Sprague-Dawley rat, parkinsonian model was made by 6-hydroxydopamine(OHDA) induced destruction of medial and lateral substantia nigra(SN). The rat was sacrificed 3-, 5-, 7-, 14- and 21-day-after operation. For control group, we injected saline with same manner and sacrificed 3-day after operation. With immunohistochemistry, we examined dopaminergic neuronal cells and microglial expression using tyrosine hydroxylase (TH) and OX-42 antibodies, respectively. Also we performed in situ hybridization for osteopontin, a possible marker of subset in activated microglia. Results : 1) In lesioned side of substantia nigra and corpus striatum, the TH immunoreactivity was markedly decreased in whole experimental groups. 2) Using optical densitometry, microglia induced immunoreactivity of OX-42 was counted at SN and corpus striatum. At SN, it was increased significantly on the lesioned side in control and all time-dependent experimental groups. At striatum, it was increased significantly in post lesion 3-day group only(p <0.05). Compared to control group, immunoreactivity of OX-42 on lesioned side was increased in groups, except post lesion 21-day group, at SN. Only post lesion 3-day group showed significance at striatum(p <0.05). Compared to SN region, immunoreactivity of OX-42 was much weaker in striatum. 3) Microscopically, the microglias showed typically different activation pattern. At SN, numerous phagocytic microglias were found at pars compacta and reticularis of lesion side. At striatum, no phagocytic form was found and the intensity of staining was much weaker. 4) At SN, the immunoreactivity of osteopontin showed definite laterality and it was markedly increased at pars compacta of lesion side with relatively short duration time. At striatum, however, it was not detected by in situ hybridization technique. Conclusion : The nigral 6-OHDA induced rat model of Parkinson's disease revealed several characteristic patterns of microglial reaction. At SN, microglias was activated shortly after direct neuronal damage and maintained for about three weeks. In contrast, despite of sufficient dopaminergic insufficiency at striatum, activation of microglias was trivial, and distinguished 3 day later. Antegrade slow neuronal degeneration is major pathophysiology in striatal dopaminergic deficiency. So, the acuteness of neuronal damage and consequential degree of neuronal degeneration may be important factor for microglial activation in neurodegenerative diseases such as Parkinson's disease. Additionally, osteopontin may be a possible marker for several subsets of activated microglia, possibly the phagocytic form.
In this study, we examined the effects of dietary fatty acids on the fatty acid composition of phospholipid fractions in regions of the brain and on behavioral development in rats. The Sprague Dawley rats were fed the experimental diets 3~4 wks prior to the conception. Experimental diets consisted of 10% fat(wt/wt) which were from either safflower oil (SO, poor in $\omega$3 fatty acids), mixed oil MO, P/M/S ratio : 1:1.4:1, $\omega$6/$\omega$3 ratio = 6.3), or mixed oil supplemented with vitamin E (+500 mg/kg diet). At 3 and 9 weeks of age, frontal cortex (FC), corpus striatum (CS), hippocampus (H), and cerebellum (CB) were dissected from the whole brain. The fatty acid content was determined in the different phospholipid fractions: phosphatidylcholine (PC), phosphatidyl-serine (PS), and phosphatidylethanolamine (PE) in the rat brain regions. In the visual discrimination test, the order of the cumulative errors made in Y-water maze test were SO > MO > ME. This suggested that the balanced diet supplemented with vitamin I had the most beneficial effect on learning ability. The overall characteristics of correlation between fatty acids and behavior development were that the frequency of cumulative errors were negatively correlated significantly with monounsaturated fatty acids (MUFAs), ie., 18:1 $\omega$9 and 22:1 $\omega$9. Docosa-hexaenoic acid (22:6 $\omega$3) of PS in frontal cortex (FC) was negatively correlated with the number of errors made in the Y-water maze test.22:5 $\omega$6 PS in hippocampus (H), PC and PE in corpus striatum (CS), PC in cerebellum (CB) were positively correlated with cumulative errors. And these errors were negatively correlated with 20:4 $\omega$ 6 of PE in corpus striatum (CS) and PC in cerebellum (CB). Especially, O1eic acid (18:1 u 9) in all phospholipid fractions (PC, PS, PE) of hippocampus was negatively correlated with the number of errors. These findings demonstrate that the MUFAs were might be essential for proper brain development, especially in hippocampus which is generally thought to be the regions of memory and learning.
본 연구에서는 비방사능 값에 따른 소동물 in vivo실험에서 어느 정도의 비방사능에서부터 수용체-리간드의 결합능력의 변화와 선조체에서의 방사능 집적에 변화가 있는지를 규명하고자 실험을 진행하다. 18F-Fallypride을 3가지 값 ; 높은 비방사능 : 43.29~74 GBq/umol, 중간 비방사능 : 20.72~29.23 GBq/umol, 낮은 비방사능 : 6.29~8.51 GBq/umol)으로 나누어 순차적으로 혈관주사 후 Micro PET을 이용하여 90분 동적 스캔 하였다. 스캔 후 양쪽 선조체에서 Binding Potential(BP)을 구한 후 비교 분석하였다. 높은 비방사능과 낮은 비방사능, 중간 비방사능과 낮은 비방사능에서 유의한 차이가 나타났다. 또한 18F-Fallypride을 이용한 PET 영상비교에서는 높은 비방사능과 중간 비방사능에서는 선조체 에서 높은 방사능집적을 보여주었지만, 낮은 비방사능에서는 다른 두 비방사능에 비해 낮은 방사능 집적을 볼 수 있었다. 이는 18F-Fallypride의 약동학적 특성상 D2/D3에 대한 친화성이 좋기 때문에 비방사능 값이 어느 정도 떨어진 상태에서도 BP의 차이가 크지 않았다. 하지만 높은 비방사능에 비해 6.5배 낮은 비방사능 값 부터는 이미지 및 BP의 차이가 유의하게 나왔으므로 앞으로 18F-Fallyprdie을 이용한 선조체 PET연구에서는 이를 고려하여 실험 할 필요가 있을 것이다.
This study aimed to evaluate the anti-stress effects of soyosan and chyengansoyosan on the contents cold swimming stress.The experimental animals were forced cold swimming stress for 3 minutes, and administered 4㎎/10g of soyosan and chyengansoyosan extract for 7 days before stress. The monoamines contents were measured by HPLC method in various part of mouse brain. The following results were obtained :1. In frontal cortex, the contenrs of norepinephrine ans dopamine increased significantly in the group administered chyrngansoyosan compared with in the group administered non chyengansoyosan and soyosan(control group) of mice stressed by cold swiming.2. In hypothalamus, the content of norepinephrine increased with statistical significance in the group administered soyosan compared with control group of mice stressed by cold swimming. 3. The content of dopamine increased with statistical significance on the group administered chyenfansoyosan and compared with control group of mice stressed by cold swimming in hypothlaamus and hippocampus.4. The content of serotonin increased with statistical significance in the group administered soyosan and compared with control group of mice stressed by cold swimming in hippocampus and corpus striatum.5. In corpus striatum and hippocampus, the content of norepineohrine decreased with statistical significance in the group administered soyosan and chyengandoyosan compared with control group of mice stressed by cold swimming.Judgding from the above results, this sthdy reaches a conclusion that soyosan or chyengansoyosas has significant effects in reducing stress.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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