Coriolus hirsutus LD-1 균주의 리그닌분해효소 활성과 몇몇 염료의 탈색능을 조사하였다. 백색부후균인 LD-1 균주는 laccase(16,388.9 U/L)와 manganese- dependent peroxidase (19.81 U/L)는 생산하였으나 lignin peroxidase를 생산하지 않았다. 균주를 염료와 함께 8일간 배양했을때 염료 RBBR과 염료 BB의 탈색율은 각각 70.2%와 98%로 나타났다. Manganese-dependent peroxidase는 8일간 배양 중 효소 활성은 매우 낮은 반면 laccase는 지속적으로 생산되어 대단히 높은 활성을 나타내었다. 백색부후균인 Coriolus hirsutus LD-1에 의한 염료의 탈색은 주로 laccase에 의한 것으로 사료되었다.
담자균류 백색부후균의 일종인 흰구름버섯(Coriolus hirsutus)을 실험균주로 하여 수종의 난분해성 방향족염료의 분해능을 측정하였다. 사용된 4종류의 염료 중, triphenyl methane 염료인 bromophenol blue가 탈색율 95% 이상으로 가장 잘 탈색되었으며, Congo red와 Poly R-478은 이보다는 낮은 57%, 55%가 탈색되었다. 그러나, heterocyclic 염료인 methylene blue는 본 균주에 의해 거의 탈색되지 않았으며, UV-visible spectrum상에서의 심색성 이동만 관찰되었다. 세포외 laccase와 peroxidase의 활성은 각 염료의 탈색율과 비례하여 나타났으며, 최대 활성 또한 최대 탈색시기에 관찰되었다. 효소의 활성 염색시 모든 염료의 탈색배지에서 공통적인 laccase와 peroxidase의 활성 띠가 관찰되었다. 이러한 결과로 볼 때, 세포외 laccase와 peroxidase가 난분해성 염료의 탈색에 중요한 역할을 할 것으로 판단된다.
Laccase produced by Coriolus hirsutus was purified to electrophoretic homogeneity by acetone precipitation, Sephacryl S-2000 HR chromatography, DEAE Sepharose CL-6B chromatography, and Mono Q HR 5/5 chromatography. The purification of laccase was 46.6-fold with an overall yield of 23.7%. Laccase from this fungus was a monomeric glycoprotein with 16% carbohydrate content, and has an isoelectric point of 4.2, and molecular mass of 78 kDa, respectively. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme showed significant homology to hoste of laccases from Coriolus versicolor, Pycnoporus cinnabarius, and an unidentified basidiomycete, PM1. The highest rate of 2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) (ABTS) oxidation by laccase was reached at 45$^{\circ}C$, and te pH optima of the enzyme varied depending on the substrate in the range of 2.0 to 4.5. The enzyme was stable at 60$^{\circ}C$ for 5 h and lost 80% activity at 80$^{\circ}C$ in 30 min. The enzyme oxidized a variety of usual laccase substrates including lignin-related phenol, and had the highest affinity toward ABTS. Under standard assay conditions, the apparent Km value of the enzyme toward ABTS was 8.1 ${\mu}$M. The enzyme was completely inhibited by L-cysteine and sodium azide, but not by potassium cyanide, SDS, ad thiourea.
이상의 결과를 종합하면, 평가대상 토양을 증류수로 20배 희석하여 200rpm 으로 30분간 진탕한 후 PDA (감자추출배지)와 혼합하여 $121^{\circ}C$에서 20분간 살균한 후 Coriolus hirsutus (MKACC 50560) 균을 접종한다. 접종완료 후 $25^{\circ}C$에서 5일간 배양한 후 균사 생장을 측정하여 담자균의 균사 생장률 (목적토양에서의 균사생장/PDA 에서의 균사생장${\times}100$)을 계산한다. 이 기준에 따라 균사생장률이 60%이상이 되면 대상 토양은 작물 생육에 적합한 토양이라고 추정할 수 있다. 이러한 방법은 토양의 건전성 평가를 위한 신속한 간이검사를 통하여 소량의 시료를 가지고 단기간 내 대량 분석을 가능하게 하여 토양 건정성 평가의 기초 자료로 사용될 수 있다고 사료된다.
Batch culture system and continuous culture system were used to investigate the removal of disperse dye using several white rot fungi. White rot fungi used in the study were Coriolus hirsutus IFO 4917, Lenzites betulina IFO 6266, Coriolus versicolor IFO 30340 and Phanerochaete chrysosporium IFO 31249. The results of the batch culture experiment showed that white rot fungi used in this study had excellent dye removal abilities. Phanerochaete chrysosporium IFO 31249 was especially effective on the removal of disperse dyes. And continuous treatment of disperse red-60 was studied under bioreactor with vertical matrix using Phanerochaete chrysosporium IFO 31249. The removal efficiency of disperse red-60 were more than 95% in 0.20 ${\sim} 1.50 $hr^{-1}$ dilution rate and 90% in $1.83h^{-1}$ dilution rate.
Batch culture system and continuous culture systems were used to investigate the removal of disperse dye using white rot fungi. White rot fungi used in the study were Coriolus hirsutus IFO 4917, Lenzites betulina IFO 6266, Coriolus versicolor IFO 30340 and Phanerochaete chrysosporium IFO 31249. The results of the batch culture experiment showed that white rot fungi used in this study had excellent dye removal abilities. Phnerochete chrysosporium IFO 31249 was especially effective on the removal of disperse dyes. And continuous treatment of disperse red 60 was studied under two type of reactor using Phanerochaete chrysosporium IFO 31249. The removal efficiency of disperse red 60 for immobilized Phanerochaete chrysosporium IFO 31249 in continuous reactor with vertical matrix was increased 1.3 fold in $1.4\;hr^{-1}$ dilution rate when compared with continuous reactor without vertical matrix.
Seven white rot fungi (Irpex lactenis, Coriolus hirsutus, Lopharia mirabilis, Schizopora paradoxa, Ganoderma lucidum, Pleurotus ostreatus and Pycnoporus coccineus) native to Korea and two famous exotic lignin degradable white rot fungi (Coriolus versicolor and Phanerochaete chrysosporium) were investigated to clarify their physiological and physicochemical characteristics on white-rotted wood blocks. G. lucidum degraded wood blocks more seriously than those by exotic lignin-degrading fungi, C. versicolor and P. chrysosporium, but only slightly decreasecl the strength of wood which was compared to the weight loss, persumably on the account of its small use of cellulose when attacking wood. It is quite interesting to note that the holocellulose degradation rate of G. lucidum was also higher than any of the other tested fungi. The order of fungi, according to the lignin-decomposing rates, was G. lucidum>P. coccineus>C. versicolor>S. paradoxa>P. chrysosporium>L. mirabilis>P. ostreatus>C. hirsutus>I. lactenis. The lignin degradation of G. lucidum and P. coccineus which were collected in Korea was greater than that of C. versicolor and P. chrysosporium. If holocellulose degradation is not considered. G. lcidum has the merit of actual application in biomass conversion due to linin removal.
Lentinus edodes 에서 분비된 laccase 를 DEAE Sephadex A-50, Con A-Sepharose, Sephadex G-150 크로마토그래피를 통해서 순수분리하였다. 효소는 분자량이 87 KDa 정도인 하나의 소단위체로 되어 있고, 12.0% 의 당을 함유하고 있었다. 그리고 N-말단 아미노산 서열은 Pleurotus oxtreatus 와 Cloriolus hirsutus 의 laccase 와 유사하였다. 효소의 최적 pH 는 4.8 이고 최적 온도는 $40^{\circ}C$ 이었다. 그리고 본 효소는 pH 7-9 와 $30^{\circ}C$이하에서 비교적 안정하였다. Syringaldazine 에 대한 $K_{M}$ 은 $0.4\mu$ M 이었고 $k_{cat}$ 은$ 77 sec^{-1}$ 이었다. This layer chromatography 에 의한 본 효소의 반응 산물들의 분리양상이 Pleurotus ostreatus 의 laccase 의 경우와 유사하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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