There is a growing interest in the application of primary hepatocytes for treatment of liver diseases in humans and for drug development. Several studies have focused on long-term survival and di-differentiation blocking of primary hepatocytes in an in vitro culture system. Therefore, the present study also aimed to optimize an in vitro culture system using primary rat hepatocytes. Primary rat hepatocytes from 6-week-old male Crl:CD rats were isolated using a modified two-step collagenase perfusion. Healthy $3.5{\times}10^6$ primary rat hepatocytes were seeded into a 2 dimensional (2D) culture in a 25T culture flask coated with collagen type I or into a 3D culture in a 125-ml spinner flask for 7 days. Production of plasma protein (ALB and TF), apoptosis (BAX and BCL2), and CYP (CYP3A1) related genes were compared between the 2D and 3D culture systems. The 3D culture system had an advantage over the 2D system because of the relatively high expression of ALB and low expression of BAX in the 3D system. However, the level of CYP3A1 did not improve in the 3D culture with and without the presence of a dexamethasone inducer. Therefore, 3D culture has an advantage for albumin production and primary rat hepatocyte survivability, but a low expression of CYP3A1 indicated that primary rat hepatocytes require a high-density culture for stress reduction by continuous flow.
Boron doping on an n-type Si wafer is requisite process for IBC (Interdigitated Back Contact) solar cells. Fiber laser annealing is one of boron doping methods. For the boron doping, uniformly coated or deposited film is highly required. Plasma enhanced chemical vapor deposition (PECVD) method provides a uniform dopant film or layer which can facilitate doping. Because amorphous silicon layer absorption range for the wavelength of fiber laser does not match well for the direct annealing. In this study, to enhance thermal affection on the existing p-a-Si:H layer, a ${\mu}c$-Si:H intrinsic layer was deposited on the p-a-Si:H layer additionally by PECVD. To improve heat transfer rate to the amorphous silicon layer, and as heating both sides and protecting boron eliminating from the amorphous silicon layer. For p-a-Si:H layer with the ratio of $SiH_4$ : $B_2H_6$ : $H_2$ = 30 : 30 : 120, at $200^{\circ}C$, 50 W, 0.2 Torr for 30 minutes, and for ${\mu}c$-Si:H intrinsic layer, $SiH_4$ : $H_2$ = 10 : 300, at $200^{\circ}C$, 30 W, 0.5 Torr for 60 minutes, 2 cm $\times$ 2 cm size wafers were used. In consequence of comparing the results of lifetime measurement and sheet resistance relation, the laser condition set of 20 ~ 27 % of power, 150 ~ 160 kHz, 20 ~ 50 mm/s of marking speed, and $10\;{\sim}\;50 {\mu}m$ spacing with continuous wave mode of scanner lens showed the correlation between lifetime and sheet resistance as $100\;{\Omega}/sq$ and $11.8\;{\mu}s$ vs. $17\;{\Omega}/sq$ and $8.2\;{\mu}s$. Comparing to the singly deposited p-a-Si:H layer case, the additional ${\mu}c$-Si:H layer for doping resulted in no trade-offs, but showed slight improvement of both lifetime and sheet resistance, however sheet resistance might be confined by the additional intrinsic layer. This might come from the ineffective crystallization of amorphous silicon layer. For the additional layer case, lifetime and sheet resistance were measured as $84.8\;{\Omega}/sq$ and $11.09\;{\mu}s$ vs. $79.8\;{\Omega}/sq$ and $11.93\;{\mu}s$. The co-existence of $n^+$layeronthesamesurfaceandeliminating the laser damage should be taken into account for an IBC solar cell structure. Heavily doped uniform boron layer by fiber laser brings not only basic and essential conditions for the beginning step of IBC solar cell fabrication processes, but also the controllable doping concentration and depth that can be established according to the deposition conditions of layers.
고리형 증폭 공진기를 이용하여 $LiIO_3$ 결정에서 최대 출력 35mW의 연속발진 레이저 다이오우드에 대한, 제2조화파(파장 397 nm)를 발생시켰다. 사용된 비선형 결정은 두께 5mm, 10mm의 $LiIO_3$로 광축에 대해 $43.21^{\circ}$ 각도로 절단된 것이며, 양면은 파장 794nm에 대해 AR코팅(anti-reflection coating)을 하였다. 공진기 안에 결정이 들어갔을 경우, 펌핑광에 대해 최적의 모드매칭(mode matching)이 이루어지는 곡률 거울간 거리의 적정조건을 찾아내었다. 고리형 증폭 공진기에 의한 펑핑광의 공진증폭(resonant enchancement)으로 제2조화파 변화효율을 향상시킬 수 있었으며, 결정으로부터의 산란광에 의한 역진모드(counter-propagation mode)를 이용하여 레이저 다이오드의 주파수를 고리형 증폭 공진기의 공진 주파수에 locking 시켰다. 공진증폭율은 결정이 없을 때 약 45배, 결정이 있을 때에는 결정의 투과 손실로 인하여 약 14배이었다. 펌프 레이저 출력에 대한 제2조화파의 출력을 측정하였고, 28mW의 입사 출력에 대해 두께 5mm와 10mm에서 각각 $1.5{\mu}W$와 $6.6{\mu}W$ 이상의 출력을 얻을 수 있었으며, 그에 해당하는 변환효율(conversion efficiency)은 각각 $(6.584{\pm}0.56){\times}10^{-3}$%, $(2.6{\pm}0.21){\times}10%{-2}$%이었다.
Rodrigues, Maria Elisa;Costa, Ana Rita;Fernandes, Pedro;Henriques, Mariana;Cunnah, Philip;Melton, David W.;Azeredo, Joana;Oliveira, Rosario
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권9호
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pp.1308-1321
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2013
The emergence of microcarrier technology has brought a renewed interest in anchorage-dependent cell culture for high-yield processes. Well-known in vaccine production, microcarrier culture also has potential for application in other fields. In this work, two types of microcarriers were evaluated for small-scale monoclonal antibody (mAb) production by CHO-K1 cells. Cultures (5 ml) of microporous Cytodex 3 and macroporous CultiSpher-S carriers were performed in vented conical tubes and subsequently scaled-up (20 ml) to shake-flasks, testing combinations of different culture conditions (cell concentration, microcarrier concentration, rocking methodology, rocking speed, and initial culture volume). Culture performance was evaluated by considering the mAb production and cell growth at the phases of initial adhesion and proliferation. The best culture performances were obtained with Cytodex 3, regarding cell proliferation (average $1.85{\pm}0.11{\times}10^6$ cells/ml against $0.60{\pm}0.08{\times}10^6$ cells/ml for CultiSpher-S), mAb production ($2.04{\pm}0.41{\mu}g/ml$ against $0.99{\pm}0.35{\mu}g/ml$ for CultiSpher-S), and culture longevity (30 days against 10-15 days for CultiSpher-S), probably due to the collagen-coated dextran matrix that potentiates adhesion and prevents detachment. The culture conditions of greater influence were rocking mechanism (Cytodex 3, pulse followed by continuous) and initial cell concentration (CultiSpher-S, $4{\times}10^5$ cells/ml). Microcarriers proved to be a viable and favorable alternative to standard adherent and suspended cultures for mAb production by CHO-K1 cells, with simple operation, easy scale-up, and significantly higher levels of mAb production. However, variations of microcarrier culture performance in different vessels reiterate the need for optimization at each step of the scale-up process.
Objective : This study was to establish a reproducible differentiation system from the parthenogenetic mouse embryonic stem (P-mES02) cells into functional cardiomyocytes like as in vitro fertilization mouse embryonic stem (mES01) cells. Materials and Methods: To induce differentiation, P-mES02 cells were dissociated and aggregated in suspension culture environment for embryoid body (EB) formation. For differentiation into cardiomyocytes, day 4 EBs were treated with 0.75% dimethyl sulfoxide (DMSO) for another 4 days (4-/4+) and then were plated onto gelatin-coated dish. Cultured cells were observed daily using an inverted light microscope to determine the day of contraction onset and total duration of continuous contractile activity for each contracting focus. This frequency was compared with the results of DMSO not treated P-mES02 group (4-/4-) and mES01 groups (4-/4+ or 4-/4-). For confirm the generation of cardiomyocytes, beating cell masses were treated with trypsin-EDTA, dispersed cells were plated onto glass coverslips and incubated for 48 h. Attached cells were fixed using 4% paraformaldehyde and incubated with specific antibodies (Abs) to detect cardiomyocytes (anti-sarcomeric ? -actinin Ab, 1 : 100; anti-cardiac troponin I Ab, 1 : 2000) for 1 h. And the cells were finally treated with FITC or TRITC labelled 2nd Abs, respectively, then they were examined under fluorescence microscopy. Results: Rhythmically contracting areas in mES01 or P-mES02 cells were firstly appeared at 9 or 10 days after EBs plating, respectively. The highest cumulative frequency of beating EBs was not different in both treatment groups (mES01 and P-mES02, 4-/4+) with the results of 61.3 % at 13 days and 69.8% at 15 days, respectively. Also, the contracting duration of individual beating EBs was different from minimal 7 days to maximal 53 days. However, DMSO not treated groups (mES01 and P-mES02, 4-/4-) also had contracting characteristics although their frequency was a few compared to those of DMSO treated groups (6.0% and 4.0%). Cells recovered from the spontaneously contracting areas within EBs in both treated groups were stained positively with muscle specific anti-sarcomeric ? -actinin Ab and cardiac specific anti-cardiac troponin I Ab. Conclusion: This study demonstrated that the P-mES02 cell-derived cardiomyocytes displayed similarly structural properties to mES01 cell-derived cardiomyocytes and that the DMSO treatment enhanced the cardiomyocytes differentiation in vitro.
$Si_{3}N_{4}/SiO_{2}/Si_{3}N_{4}$(N/O/N) 다이아프램과 결합된 고감도의 광섬유 Fabry-Peort 압력센서를 개발하여 스트레인 및 그 응답특성을 조사하였다. 먼저, 44 wt% KOH 수용액을 이용한 실리콘 이방성식각기술로 600 nm 두께의 N/O/N 다이아프램을 제조하였으며, 제조된 다이아프램과 광섬유 Fabry-Perot 간섭계를 결합하여 광섬유 압력센서를 구성하였다. 단일모드 광섬유(SMF)내에 $TiO_{2}$ 유전체 박막을 용융접합하여 공극의 길이가 약 2 cm인 광섬유 Fabry-Perot 간섭계를 제작하였다. 광섬유 Fabry-Perot 간섭계의 한쪽 끝은 N/O/N 다이아프램과 결합하였으며, 나머지 한쪽을 3 dB 광결합기를 통해 광측정장치에 연결하였다. $2{\times}2\;mm^{2}$ 및 $8{\times}8\;mm^{2}$ 크기의 N/O/N 다이아프램에 대해 응답특성을 조사한 결과, 각각 약 0.11 rad/kPa과 1.57 rad/kPa의 압력감도를 나타내었으며, 선형오차는 0.2 %FS이내였다.
A new 5th generation adhesive system(ONE-STEP) has been supplied which operators can apply to conditioned tooth surfaces by one simplified step. The purpose of this study was to determine whether different methods of adhesive application and various air drying duration after applying adhesive affect the shear bond strength of composite resin to dentin, and to evaluate the adhesive pattern of composite resin and dentin under SEM. Seventy-seven extracted human molar teeth were cleaned and mounted in palstic test tubes. The occlusal dentin surfaces were exposed with Diamond Wheel Saw and smoothed with Lapping and Polishing Machine (South Bay Technology Co., U.S.A.). Teeth were randomly divided into 7 groups (n=11), In experimental A group, adhesive was applied to dentin with agitation for 20 sec. In experimental N-A group, adhesive were continuously applied to dentin for 20 sec. Also control and experimental 1, 2, 3, 4 groups were dried for 10, 0, 5, 20, 30 seconds after applying adhesive, respectively, Adhesives were light cured for 10 sec. A gelatin capsule 5mm in diameter was filled with Aelitefil$^{TM}$ composite resin, placed on the treated dentin surface and light cured for 40 see, from three sides, All specimens were stored in distilled water at room temperature for 24 hours. The shear bond strengths were measured using a universal testing machine(AGS-1000 4D, Japan) at a crosshead speed of 5mm/min. An one-way ANOVA and LSD test were used for statistical analysis of the data. For SEM evaluation, seven specimens were made and sectioned. Representive postfracture and seven specimens were mounted on brass stubs, sputter-coated with gold and observed under SEM. The results were as follows : 1. The shear bond strength of experimental A group which adhesive were applied to dentin with agitation was higher than that of experimental N-A group (continuous application), and there was significant difference between two groups (p<0.01). 2. The interface between composite and dentin according to different application methods showed close adaptation in experimental A group and showed tinny gap in experimental N-A group. 3. The shear bond strength accoding to various air drying duration was the lowest value(7.57${\pm}$2.60 MPa) in experimental 1 group, so there was significant difference between experimental 1 group and other four groups (p<0.05). But there was no significant difference of shear bond strength between four groups (p>0.05). 4. The interface between composite and dentin according to various air drying duration showed close adaptation in control group and tinny gap in experimental 3 and 4 groups. But experimental 1 and 2 groups showed $30{\mu}$ and 6 - $10{\mu}m$ thick gaps, respectively.
수복물의 연마의 중요성에 대하여 많은 연구들이 이루어져 왔으며, 이는 수복물의 금속성질의 개선, 변연적합성의 증가 그리고 치태축적의 감소 등을 이유로 시행된다. 그러나 불행하게도 수복물에 대한 연마시 열의 발생으로 인하여 치수부위에 손상을 초래하므로 열의 발생을 최소화하려는 노력이 뒤따라야 할 것이다. 이에 본 연구에서는 수복물의 연마시 회전속도의 차이, 냉각제의 적용 유무, 여러 종류의 수복물의 차이, 간헐적인 연마와 연속적인 연마의 차이 그리고 잔존 상아질의 두께의 정도에 따른 치수내부에서의 열의 변화를 알아보기 위하여 발거된 구치에 5급 와동을 형성한 후 복합레진(Z100, 3M co), resin-modified GIC(Dyract, Fuji II LC) 그리고 아말감(Degussa) 등으로 충전하였으며, 다양한 조건에서의 연마를 시행, 치수내부에서의 열의 변화를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Amalgam을 건조한 상태에서 연마시 다른 재료에 비해 가장 큰 치수내 온도 상승을 보였다(P<0.05). 그러나, Z100, Dyract Fuji II LC 간에는 간헐적 수복물 연마와 연속적인 수복물 연마 모두 어떤 경우든 유의차가 없었다(P>0.05). 2. 같은 조건으로 연마를 시행했을 때, 간헐적인 연마보다 연속적인 연마를 한 경우가 치수내 온도가 더 크게 상승하였다(P<0.01). 3. 아말감과 Dyract 에 있어서는 잔존 상아질의 차이에 따른 치수내 온도변화에 유의한 차이를 보였으나(P<0.01), Fuji II LC에 있어서는 유의성이 없었다(P>0.05). 4. 냉각제의 유무에는 관계없이 어떤 경우든 시간에 따른 온도 상승을 보였다. 그러나, 냉각제를 사용한 경우가 냉각제를 사용하지 않은 경우에 비해 온도 상승값이 훨씬 작았다(P<0.01).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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