We have developed the method for the conjugation of biotinylated DNA to streptavidin-coated QDs. QD-DNA conjugates and a high-sensitive fluorescence imaging technique are adopted to visualize gene transport across the membrane of the live cell in real time. Endocytotic cellular uptake of oligonucleotide and electrically-mediated plasmid DNA transfer into the live cell are monitored by a quantitative microscopic imaging system. Long-term kinetic study enables us to reveal the unknown mechanisms and rate-limiting steps of extracellular and intracellular transport of biomolecules. We designed experimental protocols to conjugate the oligonucleotide or the plasmid DNA to commercially available streptavidin-coated QDs. Gel electrophoresis is used to verify the effect of incubation time and the molar ratio of QDs and DNA on the conjugation efficiency. It is possible to fractionate the QD-DNA conjugates according to the DNA concentration and obtain the purified conjugates by a gel extraction technique.
본 연구는 유산균발효유 제조에 많이 사용되는 Lactobacillus casei YIT 9018에 광범위 숙주영역을 갖고 있는 Streptococcus faecalis DS5 의 plasmid pAM $\beta_1$ DNA를 이용하여 전이, 도입하고자 유당발효능결손변이주를 이용하여 원형질체융합, 접합, 형질전환을 검토하였던 바 얻어진 결과는 다음과 같다. L.casei와 S.faecalis 균주의 conjugation 은 membrane filter mating(Milipore, 0.45$\mu \textrm m$, front side)의 경우 $6.9\times 10^7$으로 가장 높은 전이율을 나타냈으며 protoplast fusion이나 transformation에 의해서는 fusant나 transformant를 선별할 수 없었다.
수중음향채널의 다중경로에 의한 수신신호의 지연확산은 ISI (Inter-Symbol Interference)를 유발하여 수중음향 통신시스템의 성능을 저하시킨다. 본 연구에서 적용하는 수동 페이저 컨쥬게이션 기법은 신호대 다중경로 간섭 신호비를 크게 하여 다중경로에 의한 주파수 선택성을 경감시켜 ISI를 줄이는 다이버시티 통신기법이다. 신호 대 다중경로 간섭신호비의 개선과 이에 따른 주파수 선택성은 수동 페이저 컨쥬게이션에 적용하는 수신기 배열의 배열 센서 개수, 송수신기의 상대운동에 의해 좌우되며, 따라서 비트 오류특성이 결정된다. 본 연구에서는 이들의 특성을 수치모의 실험으로 해석하였다.
Immunoliposomes (antibody-conjugated liposomes) are highly useful as both a drug carrier in drug delivery and as a reporting probe in immunodiagnostics. However, antibody conjugation is lengthy and cumbersome, because this includes several steps such as derivatization of the antibody, conjugation of the derivatized antibody to liposomes, and separation of the unbound antibodies from immunoliposomes. Recently, liposome preparation steps have simplified by using microfluidic devices (${\mu}FDs$) where liposomes are formed when a stream of lipids in solvent is hydrodynamically focused between two oblique buffer streams in a microchannel. Herein, we report a simple method for the production of immunoliposomes (rabbit IgG-conjugated liposomes) using microvalve-controlled ${\mu}FD$. The presence of antibody on the liposome was verified by observing the binding of immunoliposomes to rabbit IgG on the surface. The results suggest that immunoliposomes can be easily prepared through sequential mixing of antibody, conjugation reagents, preformed liposomes using microvalve-controlled ${\mu}FD$.
Journal of information and communication convergence engineering
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제11권1호
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pp.1-6
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2013
Suppressing or mitigating signal distortion due to group velocity dispersion and optical Kerr effects is necessary in ultra-high speed and long-haul wavelength division multiplexing (WDM) transmission systems. Dispersion management (DM), optical phase conjugation (OPC), and the combination of these two are promising techniques to compensate for signal distortion. In this paper, to implement a flexible optical WDM network, a new optical link configuration with a randomly distributed single-mode fiber (SMF) length and fixed residual dispersion per span in the combination of DM and OPC is proposed and investigated. The simulation results show that the best net residual dispersion (NRD) in the proposed optical links is +10 ps/nm, which is independent of pre- and postcompensation. The effective launch power of the WDM channel is increased more in the optical links with NRD = +10 ps/nm controlled by only precompensation. Furthermore, the system performance difference between the proposed optical link configuration with the best NRD and the conventional optical link with uniform distribution of the SMF length had little significance. Consequently, it is confirmed that the proposed optical link configuration with the best NRD is effective and useful for implementing a reconfigurable long-haul WDM network.
Objective: Pluripotent stem cell-derived lymphatic endothelial cells (LECs) show great promise in their therapeutic application in the field of regenerative medicine related to lymphatic vessels. We tested the approach of forced differentiation of mouse embryonal stem cells into LECs using biodegradable poly lactic-co-glycolic acid (PLGA) nanospheres in conjugation with growth factors (vascular endothelial growth factors [VEGF-A and VEGF-C]). Methods: We evaluated the practical use of heparin-conjugated PLGA nanoparticles (molecular weight ~15,000) in conjugation with VEGF-A/C, embryoid body (EB) formation, and LEC differentiation using immunofluorescence staining followed by quantification and quantitative real-time polymerase chain reaction analysis. Results: We showed that formation and differentiation of EB with VEGF-A/C-conjugated PLGA nanospheres, compared to direct supplementation of VEGF-A/C to the EB differentiation media, greatly improved yield of LYVE1(+) LECs. Our analyses revealed that the enhanced potential of LEC differentiation using VEGF-A/C-conjugated PLGA nanospheres was mediated by elevation of expression of the genes that are important for lymphatic vessel formation. Conclusion: Together, we not only established an improved protocol for LEC differentiation using PLGA nanospheres but also provided a platform technology for the mechanistic study of LEC development in mammals.
대용량 장거리 WDM 전송 시스템의 구현을 위해 전송 링크에 적용되는 광 위상 공액 (optical phase conjugation) 기술은 광 전력과 국부 분산량이 광 위상 공액기 (OPC; optical phase conjugator)에 대해 대칭적으로 분포되어야 하는 한계를 갖는다. 이러한 한계는 OPC를 전체 전송 링크 중간에 위치시켜야 하는 제한을 갖게 한다. 본 논문에서는 광 위상 공액의 이러한 한계를 최적NRD(net residual dispersion)의 도출을 통한 inline 분산제어 (DM; dispersion management)의 적용으로 극복할 수 있다는 것을 살펴보았다. OPC 위치별 최적 NRD의 도출은 precompensation과 postcompensation의 조합을 통해 이루어진다. 최적 NRD는 OPC 위치 외에 WDM 채널의 입사 전력과 시스템 성능 기준에 따라 달라질 수 있다는 것을 확인하였다. 즉 WDM 채널의 수신 성능 기준을 1 dB 눈 열림 패널티 (EOP; eye opening penalty)로 하는 경우 최상 NRD의 도출과 전송 링크에서의 적용으로 입사 전력이 0 dBm인 채널들에 대해서는 OPC를 1000 km의 어떤 곳에도 위치시킬 수 있고, 수신 성능 기준을 3 dB EOP로 하는 경우 precompensation과 postcompensation의 최상의 조합이 아니더라도 입사 전력이 3 dBm인 채널들에 대해서는 NRD를 100 ps/nm부터 200 ps/nm 사이로 설정하게 되면 OPC를 350 km부터 700 km까지의 범위에 위치시킬 수 있는 것을 확인하였다.
R plasmid의 분포와 새로운 conjugation 방법 개발을 위하여, 한국의 남해안과 동해안의 양식현장의 어류질병관련 세균으로부터 항균제 다제 내성균을 분리하였다. 분리균 134종에서 10균주가 chlorarnphenicol, tetracycline, streptomycin, ampicillin, colistin, nalidixic acid, oxolinic acid, kanamycin 등에 대한 다제내성의 특성을 가지고 있었으며 이중 V. damsela JE1 한 균주는 chloram-phenicol과 tetracycline에 대한 내성전달 특성을 갖는 R plasmid 와 ampicillin과 kanamycin에 대한 유전자를 chromosome 등에 함유하고 있었다. 분리된 어병세균의 다제내성 특성이 R plasmid에 기인하는 것인지의 확인은 다양한 장내세균의 선택배지로 최근 개발된 CC 배지에서 각기 다른 균주들이 나타내는 증식여부 또는 집락 색깔의 차이를 이용하여 donor, recipient 그리고 transconjugant를 구별할 수 있는 방법을 적용하였다. Conjugation의 최적화를 위해 여러 가지 조건을 비교한 결과, V. damsela JE1의 R plasmid의 전달은 filter mating법을 사용하는 것이 broth mating법보다 약 100배 이상의 높은 성공률을 보여 주었으며 이때 사용온도는 30$^{\circ}C$ 이상, mating 시간은 24시간에서 가장 높은 전달 빈도를 나타내었다. R plasmid를 함유한 V. damsela JE1이 분리된 4개월 후, 동일 양식장의 동일 그룹의 넙치 장내세균에서 분리한 다제내성균 Sphingomonas sp. 3균주는 V. damsela JE1에서 분리된 것과 같은 크기의 R plasmid를 함유하고 있었으며, 그 특성 또한 V. damsela JE1의 R plasmid와 마찬가지로 다제 내성 중 Cm과 Tc에 대한 유전자만이 recipient로 전달되어 장내 세균총이 R plasmid의 reservoir로서의 역할을 하고 있음을 확인하였다.
자연계로부터 분리한 DK1 균주(NI)가 가지고 있는 $Km^r$ plasmid를 유전자조작 기법으로 변형시킨 DKC601 균주 (GEM)를 이용하여 $Km^r$ 유전자의 전이를 무심천의 자연 수계환경에서 실험하였다. $Km^r$ 유전자의 전이 빈도는 NI 균주의 결과와 비교 연구하는 동시에, 전이과정에서 일어나는 plasmid rearrangement를 비교 분석하였다. GEM과 NI의 $Km^r$ 유전자의 전이 빈도는 5-$10^{\circ}C$의 하천수에서는 $9.1\times 10^{-12}~1.8\times 10^{-11}$로 비슷하였으나 20-$30^{\circ}C$에서는 NI 균주가 GEM 균주보다 조금 높았다. 그리고 멸균하천수나 LB broth를 이용한 실험실 환경에서의 $Km^r$ 유전자의 전이 빈도는 하천수에서 보다 다소 높게 나타났다. NI 균주가 가지고 있던 70kb인 $Km^r$ plasmid는 MTl 균주를 recipient로 했을 때에 얻은 transconjugant에서는 수계환경에 관계없이 rearrangement가 많이 일어났으나, GEM 균주에서 얻은 transconJug gant에서는 52 kb인 $Km^r$ plasmid가 안정된 상태로 발견되었다. 그러나 MT2 균주들 recipient로 했을 때에는 NI 뿐만 아니라 GEM 균주로부터 전이된 $Km^r$ plasmid가 모두 rearrangement를 나타냈다. Transconjugant들이 가지고 있는 plasmid의 수는 conjugation의 시간이 길어짐에 따라 사용한 성험균주나 수계환경에 관계없이 감소되었으며, 특히 GEM의 5 52 kb인 $Km^r$ 유전자의 크기는 24시간 후에도 그대로 유지되였다. 이와 같은 결과로 볼 때, $Km^r$ 유전자는 GEM에서나 NI로부터 전이되는 빈도는 recipient 균주에 관계없이 비슷하였으나, conjugation 과정 중 GEM의 $Km^r$ 유전자는 NI의 $Km^r$ 유전자보다 더욱 안정된 상태로 전이되었으며 이 $Km^r$ plasmid의 rearrangement는 수계환경에 관계없이 recipient 균주에 따라 다양하게 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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