Kim, Kyung-Soo;Kong, Won-Sik;Choi, Sun-Gyu;You, Chang-Hyun;Ko, Mi-Suk;Seo, Geon Sik
Journal of Mushroom
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v.2
no.2
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pp.49-59
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2004
To establish a genetic relationships of collected Ganoderma strains, mycelium growth according to media and temperature, colony morphology, chlamydospore formation and fruitbody morphology were investigated. For the identification of optimal growth conditions of the strains, five different growth media and four different temperature were tested. GCM (Ganoderma complete medium) at $30^{\circ}C$ was the most effective for mycelial growth of 68 strains with more or less variation. The strains were divided into 28 groups based on their colony shapes, and most of them belong to CM3 or CM8 group. Chlamydospores were observed in the mycelia of 16 strains including ASI 7022 on microscope, but not in most G. lucidum domestic strains, which showed relatively lagging growth on $35^{\circ}C$ in mycelial growth experiment. These results were not similar to those of G. lucidum but those of G. tsugae imported from USA. The strains were cultivated on oak sawdust media to see their fruit body formation. Ninety-seven among 115 strains formed fruitbodies in sawdust cultivation. They showed two forms of fruitbodies, 89.7% of flat type or 10.3% of antler type, although these shapes can be affected by $CO_2$ concentrations. These results suggest that the native strains formerly considered to belong to G. lucidum have to be re-classified with further study.
GacS and GacA proteins form a two component signal transduction system in bacteria. Here, Tn5 transposon gacS and gacA (Gac) mutants of Pseudomonas sp. KL28, an alkylphenol degrader, were isolated by selecting for smooth colonies of strain KL28. The mutants exhibited reduced ability to migrate on a solid surface. This surface motility does not require the action of flagella unlike the well-studied swarming motility of other Pseudomonas sp. The Gac mutants also showed reduced levels of biofilm and pellicle formation in liquid culture. In addition, compared to the wild type KL28 strain, these mutants were more resistant to high concentrations of m-cresol but were more sensitive to $H_2O_2$, which are characteristics that they share with an rpoS mutant. These results indicate that the Gac regulatory cascade in strain KL28 positively controls wrinkling morphology, biofilm formation, surface translocation and $H_2O_2$ resistance, which are important traits for its capacity to survive in particular niches.
Twenty-two isolates of Sclerotium rolfsii causing spotted leaf rot from Varanasi, India were grown on 6% Cyperus rotundus rhizome meal agar (CRMA) medium for the induction of athelial stage (Athelia rolfsii). Only one isolate obtained from Sphaeranthus indicus formed basidial stage on CRMA medium while the other 21 isolates did not. Basidial stage was also produced in S. indicus isolate at different concentrations (5.5, 6.0 and 6.5% w/v) of CRMA medium. Size of basidia, sterigmata and basidiospores of this isolate was measured. Basidia clavate, hyaline and measured $10{\sim}12{\times}4{\sim}5\;{\mu}m$ in size, basidiospores hyaline, unicellular, subglobose to ellipsoid produced on sterigmata and measured $3{\sim}5{\times}2{\sim}4\;{\mu}m$ in size, sterigmata hyaline and measured $4{\sim}5{\times}1.5{\sim}2\;{\mu}m$ in size. The results of the present study revealed wide variation in spotted leaf rot isolates of S. rolfsii. A reddish zone around the colony of S. rolfsii isolate from Vernonia sp. was observed on CRMA medium. HPLC analysis of the zone revealed the presence of gallic and ferulic acid which were also thought to be responsible for reduced mycelial growth of the isolate on CRMA medium.
Kim, Gil Ah;Lee, Seung Tae;Lee, Eun Ju;Choi, Jung Kyu;Lim, Jeong Mook
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.22
no.3
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pp.343-349
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2009
This study was designed to simplify a cryopreservation program for embryonic stem cells (ESCs) by selection of cooling method and cryoprotectant. Commercially available mouse E14 embryonic stem cells (ESCs) were cryopreserved with various protocols, and morphology and viability of the frozen-thawed ESCs and their reactive oxygen species (ROS) production were subsequently monitored. Post-thaw colony-formation of ESCs was detected only after a slow freezing using dimethyl sulfoxide (DMSO) by stepwise placement of a freezing container into a $-80^{\circ}C$ deep freezer and subsequently into -$196^{\circ}C$ liquid nitrogen, while no proliferation was detected after vitrification. When the simplified protocol was employed, the replacement of DMSO with a mixture of DMSO and ethylene glycol (EG) further improved the post-thaw survival. ROS generation in ESCs frozen-thawed with the optimized protocol was not increased compared with non-frozen ESCs. The use of fresh mouse embryonic fibroblasts as feeder cells for post-thaw subculture did not further increase post-thaw cell viability. In conclusion, a simplified slow-freezing program without employing programmable freezer but using DMSO and EG was developed which maintains cell viability and colony-forming activity of ESCs during post-thaw subculture.
Colonial morphology of the various yeasts often encountered in sputum or other clinical specimens was investigated on the corn meal-potato-yeast extract agar medium (GJCPY) containing orange-yellow pigments extracted from Gardenia jasminoides fruits in hopes of differential identification on primary cultures. The results obtained are as follows. 1) Cryptococcus neoformans which is a medically important yeast and whose colony showed brown to purple brown on GJCPY medium was distinguishable not only from buff colored Cr. laurentii after one week incubation but also from Candida spp. 2) Colony color of Candida albicans, a most common species in sputum specimens and of Ca. parapsilosis, a rare isolate, remained unchanged even after 15 days incubation. 3) Ca. tropicalis, second common isolate from sputums and Ca. krusei, a rare isolate, formed a characteristic rough and wrinkled colonies that permit to differentiate them from others. 4) Rare isolates, Ca. guilliermondii and Ca. lusitaniae, turned to prussian blue within three days of incubation. 5) Torulopsis sp. and Saccharomyces cerevisiae showed glossy grayish blue or light blue after one week incubation. The findings clearly showed that Ga. jasminoides pigments medium was useful to the morphological differentiation of medically important yeasts that were often encountered in sputum or other clinical specimens.
Preset study was carried out to evaluate characteristics of lactic acid producing bacteria(LAB) in hen's cecum as probiotics value. Distribution of LAB in intestinal tracts was investigated using 5∼25 weeks - old hens. So, 12 strains to LAB with different morphology were isolated purely. Acid tolerance of LAB tested at pH 1, 2, 3, and 4, and bile resistant also tested at 0, 0.3% and 0.5% bile salt concentration. Growth pattern of LAB observed to 60h. All strains of cecal LAB couldn't survive at pH 1, and decreased linearly survival colony after incubation at pH 2 although some strains could survive for 2h. Most of LAB maintained constant number at pH 3 and 4. The bacterial action could increase linearly at 0% bile salt concentration in all of tested strains. However, only one strain could multiply at 0.3% bile salt, others were influenced by bile salt. That tendency was similar at 0.5% bile salt. Growth was peaked at 12 to 18 h after innoculation. After peak, the decreasing pattern of colony was different to strains which some strains decreased rapidly or maintained for long time. The LAB of hen's cecum was similar to intolerance acidity, but different to resistant to bile salt and growth pattern by strain. So, we choose three strains which have probiocs value, and identified as Lactobacillus amylovorus LLA7, Lactobacillus crispatus LLA9 and Lactobacillus vaginalis LLA11.
For researching nitrogen-fixing bacteria associated with gramineous crops, we collected growing roots of rices, wheats, oats, barleys, ryes, and maizes at 19 sites of southern Korean peninsula. Endophytes and free living bacteria were isolated from those crop roots. Sixty-three isolates were classified on the basis of different morphology, size, color, host of colony, and the 16S rDNAs sequence. The analyses of PCR amplification for nifH gene and nitrogenase activity assay, revealed that all isolates contained nitrogen-fixing abilities. In addition, most of them have cellulase activity which is one of the common features of endophytic bacteria from plant.
Lee Eunyoung;Rho Jeung-yon;Yu Kwon;Paik Sang-Gi;Lee Kyung-Kwang;Han Yong-Mahn
Reproductive and Developmental Biology
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v.29
no.2
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pp.93-99
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2005
Human embryonic stem cells (hESCs) derived from the inner cell mass of blastocysts have the ability to renew themselves and to differentiate into cell types of all lineage. The present study was carried out to investigate whether the Wnt signaling pathway is related to maintaining self-renewal of hESCs. Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK-3) inhibitor, BIO ((2'Z,3'E)-6-Bromoindirubin-3'-oxime) was treated to Miz-hES1 line for activation of Wnt signaling pathway. BIO-nontreated hESCs (control) and BID-treated hESCs were cultured for 5 days in the modified feeder-free system. During the culture of hESCs, differences were observed in the colony morphology between 2 groups. Controls were spread outwards whereas BIO-nontreated hESCs were clumped in the center and the differentiated cells were spreading outwards in the edges. The results of stem cell specific marker staining indicated that control were differentiated in large part whereas BIO-treated hESCs maintain self-renewal in the center of the colony. The results of lineage marker staining suggested that outer cells of the hESC colony were differentiated to the neuronal progenitor cells in both control and BIO-treated hESC. These results indicate that Wnt signaling is related to self-renewal in hESCs. In addition, control group showed higher composition of apoptotic cells $(23.76\%)$ than the BID-treated group $(5.59\%)$. These results indicate that BIO is effective on antapoptosis of hESCs.
Aims and Background: Traditional chemotherapy strategies for human leukemia commonly use drugs based on cytotoxicity to eradicate cancer cells. One predicament is that substantial damage to normal tissues is likely to occur in the course of standard treatments. Obviously, it is urgent to explore therapies that can effectively eliminate malignant cells without affecting normal cells. Our previous studies indicated that ginsenoside $Rg_1$ ($Rg_1$), a major active pharmacological ingredient of ginseng, could delay normal hematopoietic stem cell senescence. However, whether $Rg_1$ can induce cancer cell senescence is still unclear. Methods: In the current study, human leukemia K562 cells were subjected to $Rg_1$ exposure. The optimal drug concentration and duration with K562 cells was obtained by MTT colorimetric test. Effects of $Rg_1$ on cell cycle were analyzed using flow cytometry and by SA-${\beta}$-Gal staining. Colony-forming ability was measured by colony-assay. Telomere lengths were assessed by Southern blotting and expression of senescence-associated proteins P21, P16 and RB by Western blotting. Ultrastructural morphology changes were observed by transmission electron microscopy. Results: K562 cells demonstrated a maximum proliferation inhibition rate with an $Rg_1$ concentration of $20{\mu}\;mol{\cdot}L^{-1}$ for 48h, the cells exhibiting dramatic morphological alterations including an enlarged and flat cellular morphology, larger mitochondria and increased number of lysosomes. Senescence associated-${\beta}$-galactosidase (SA-${\beta}$-Gal) activity was increased. K562 cells also had decreased ability for colony formation, and shortened telomere length as well as reduction of proliferating potential and arrestin $G_2$/M phase after $Rg_1$ interaction. The senescence associated proteins P21, P16 and RB were significantly up-regulated. Conclusion: Ginsenoside $Rg_1$ can induce a state of senescence in human leukemia K562 cells, which is associated with p21-Rb and p16-Rb pathways.
Objective: Gut health improvements were monitored with respect to growth performance, diarrhea incidence, fecal bacterial population and intestinal morphology of suckling pigs orally supplemented with live Lactobacillus salivarius (L. salivarius) oral suspensions and challenged with $F4^+$ enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). Methods: Two groups of newborn pigs from 18 multiparous sows were randomly designated as non-supplemented (control: n = 114 piglets) and L. salivarius supplemented groups (treatment: n = 87 piglets). Treatment pigs were orally administered with 2 mL of $10^9$ colony-forming unit (CFU)/mL L. salivarius on days 1 to 3, then they were orally administered with 5 mL of $10^9CFU/mL$ L. salivarius on days 4 to 10, while those in control group received an equal amount of phosphate buffered saline solution. On day 24 (2 weeks post supplementation), one pig per replicate of both groups was orally administered with $10^8CFU/mL$$F4^+$ ETEC, then they were euthanized on day 29 of experiment. Results: Results revealed that pigs in treatment group had a statistically significant increase in average daily gain, body weight and weight gain, and tended to lower diarrhea throughout the study. Numbers of Lactobacillus population in feces of treatment pigs were higher than control pigs, especially on day 10 of study. Numbers of total bacteria in intestinal contents of control pigs were also increased, but not Coliform and Lactobacillus populations. Histological examination revealed statistically significant improvements of villous height and villous/crypt ratio of duodenum, proximal jejunum and distal jejunum parts of treatment pigs compared with controls. Duodenal pH of treatment group was significantly decreased. Conclusion: Oral supplementation of live L. salivarius during the first 10 days of suckling pig promoted growth performance and gut health, reduced diarrhea incidence, increased fecal Lactobacillus populations and improved intestinal morphology.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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