Ethaboxam[(RS)-N-(a-cyano-2-thenyl)-4-ethyl-2-(ethylamino)-1,3-thiazole-5-carboximide]은 난균강 미생물에 대하여 우수한 살균활성을 보이는 신규 살균제이다. Ethaboxam 원제와 몇 가지 ethaboxam 제형의 배추 뿌리혹병에 대한 방제효과를 조사하였다. Ethaboxam을 관주처리 하였을 때, 토양 1 L 당 8.33 mg 농도 처리구는 배추 뿌리의 혹 형성이 완전히 억제되었으며, $EC_{50}$ 값은 2.65 mg/L 토양이었다. Ethaboxam 5개 제형(10% 액상수화제, 15% 액상수화제, 2% 입제, 5% 입제, 25% 수화제) 그리고 ethaboxam과 metalaxyl 합제 제형(3%+1% 입제)의 배추 뿌리혹병 방제효과는 우수하였다. 이들 중 토양 관주처리 한 ethaboxam의 10% 및 15% 액상수화제, 토양 혼화처리 한 ethaboxam 2% 입제 제형은 다른 제형보다 배추 뿌리혹병에 대하여 더 우수한 방제효과를 보였다. 이들의 배추 뿌리혹병에 대한 $EC_{50}$ 값은 원제기준으로 토양 L 당 각각 3.72 mg(10% 액상수화제), 1.10 mg (15% 액상수화제), 4.95 mg (2% 입제) 이었다. 그러므로 실험한 ethaboxam 6개 제형 중에 15% 액상수화제가 배추 뿌리혹병에 대하여 가장 우수한 방제효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이들 결과로부터 ethaboxam은 포장에서도 배추 뿌리혹병을 효과적으로 방제할 수 있으리라 생각되었다.
본 연구는 배추 무사마귀병의 생물학적 방제를 위해 수행되었다. 배추 무사마귀병균 Plasmodiophora sp외 길항미생물은 낙엽부식토양에서 분리한 350여 종의 토양미생물 중에서 가장 길항력이 높은 방선균 AC-3균주를 이용하였고, AC-3 균주는 16S rDNA 염기서열분석방법으로 Streptomyces sp.로 동정되었다. Streptomyces sp. AC-3은 배양액 $m\ell$당 9.3 units의 chitinase를 생산하였다. 그 결과 배추 무사마귀병균 Plasmodiophora sp.의 배양액에 Streptomyces sp. AC-3을 접종하고 배양하면 Plasmodiophora sp.의 균체가 팽윤되거나 세포벽이 용해된 모습이 관찰되었다. Streptomyces sp. AC-3은 전딘도 배추 무사마귀병이 만연했던 포장에서 재배 시험하기 위해 제형화시키고 유기질비료에 첨가하여 이용하였다. 미생물제제를 첨가하지 많고 제조한 유기질비료(H-1)(대조구)와 미생물제제 첨가하여 제조한 유기질비료(H-2)(처리구)에 의한 포장시험에서 배추의 생육은 재배 40일 까지는 거의 차이를 나타나지 않았으나 재배 60일에는 다소 차이를 나타내었다. 배추의 병 발생율을 조사한 결과 무사마귀병은 H-1 비료 처리구에서는 36.17% 병이 발생되었으나 H-2 비료 처리구에서는 18.28% 발병되어 약 50%의 방제효과를 나타내었으며, 균핵병, 잎마름병, 그루썩음병 등에서도 길항효과를 나타내어 생물학적 방제가 가능한 균주로 확인되었다.
순활물기생체인 Plasmodiophora brassicae는 병원성 검정을 위해서 반드시 뿌리혹을 장기적으로 보관하는 것이 매우 중요하기 때문에 그동안 병원성을 유지하는 것이 관건이다. 특히 기존의 방법은 100년 이상 사용되어온 저장법으로 개선이 필요하여 그 효율적인 방법을 밝히고자 하였다. 이 결과 장기적으로 병원성의 저하를 최소화하며 장기간 뿌리혹을 저장할 수 있는 방법은 $-70^{\circ}C$ 냉동고에 보관하는 것으로 확인되었고, 저장 조건은 뿌리혹을 그대로 보관하거나 뿌리혹을 갈아 균질화한 후 여러 겹의 거즈에 거른 것이 6가지 저장조건 중에 가장 효과적인 저장법으로 밝혀졌다.
Bacillus subtilis XF-1, a strain with demonstrated ability to control clubroot disease caused by Plasmodiophora brassicae, was studied to elucidate its mechanism of antifungal activity against P. brassicae. Fengycin-type cyclopeptides (FTCPs), a well-known class of compounds with strong fungitoxic activity, were purified by acid precipitation, methanol extraction, and chromatographic separation. Eight homologs of fengycin, seven homologs of dehydroxyfengycin, and six unknown FTCPs were characterized with LC/ESI-MS, LC/ESI-MS/MS, and NMR. FTCPs (250 ${\mu}g/ml$) were used to treat the resting spores of P. brassicae ($10^7/ml$) by detecting leakage of the cytoplasm components and cell destruction. After 12 h treatment, the absorbencies at 260 nm ($A_{260}$) and at 280 nm ($A_{280}$) increased gradually to approaching the maximum of absorbance, accompanying the collapse of P. brassicae resting spores, and nearly no complete cells were observed at 24 h treatment. The results suggested that the cells could be cleaved by the FTCPs of B. subtilis XF-1, and the diversity of FTCPs was mainly attributed to a mechanism of clubroot disease biocontrol.
2016년부터 2018년까지 제주도내 농가포장에서 재배되고 있는 콜라비에 뿌리혹병 지속적으로 발생(최고발병률 27.2%)했다. 초기 감염은 뿌리털 부분이 정상주 뿌리털에 비해 비대했으며, 병이 진전되면서 뿌리 중심부에 혹이 형성되고, 잎이 시들고 끝이 누렇게 변했다. P. brassicae 휴면포자 현탁액을 이용한 병원성 검정결과 접종 50일 후에 병원성을 나타냈다. 병원균은 콜라비 세포조직 안에 빈 곳 없이 무수히 많은 휴면포자를 형성하며, 휴면포자는 단세포로 무색, 원형 또는 타원형, 크기는 직경 $3-5{\mu}m$이다. 콜라비 뿌리혹병원균의 ITS rDNA 염기서열 분석, 계통수 작성 결과 P. brassicae로 동정했다. 따라서 균학적 특징, 병원성 검정, ITS rDNA 염기서열 비교분석 등의 결과를 바탕으로 이 병은 우리나라에서 지금까지 보고되지 않은 'Plasmodiophora brassicae에 의한 콜라비 뿌리혹병'으로 명명하고자 한다.
고랭지의 배추 뿌리혹병 방제에 적합한 윤작작물을 선발하고자 2000년 감자, 옥수수, 콩, 양파, 곰취 등을 뿌리 혹병 이병포장에 재배하면서 뿌리혹병 발생에 미치는 영향을 조사하였다. 윤작작물들간의 경제성 비교에서는 감자와 양파 재배가 배추 연작에 비해 각각 약 16.9와 14.9배 더 높은 소득을 나타내었다. 윤작작물 재배 후의 토양 내 휴면포자 밀도는 모든 작물에서 $0.3{\sim}1.2{\times}10^3/g$ 토양이었고 배추 연작재배에서는 $89.3{\times}10^3/g$ 토양이었다. 2001년 동일 포장에 배추를 재배한 결과 뿌리혹병 발병도는 배추 연작재배의 77.8%에 비해 양파, 콩, 감자, 옥수수, 곰취 재배에서 각각 4.9, 20.2, 24.4, 25.1, 27.8%로 낮게 나타났다. 윤작작물의 재배기간에 따른 뿌리혹병 방제 효과를 양파, 감자, 콩 등의 작물로 2002년부터 2005년까지 시험하였다. 윤작작물 재배 후의 휴면포자 밀도는 모든 작물에서 2년째 재배까지 감소하였고 3년째 재배에서는 낮은 밀도가 유지되는 반면 배추 연작재배에서는 3년 동안 2.6에서 23.6배까지 증가하였다. 3년간의 윤작작물 재배를 통한 배추의 뿌리혹병 발병도는 감자 재배가 92%에서 4.4%, 콩 재배가 72%에서 10.4%, 양파 재배가72%에서 12.2%를 보이며 크게 감소한 반면 배추 연작재배에서는 100%를 유지하였다. 배추의 수량은 윤작기간이 길어질수록 증가되었으나 연작재배에서는 감소하였으며 3년째에는 연작재배의 배추 포기당 무게 95 g에 비해 감자, 콩, 양파 재배에서는 각각 2,205, 2,493, 2,476 g의 상품성 있는 배추가 생산되었다.
Okazaki, K.;Kawamura, K.;Kodama, T.;Shimizu, S.;Tomita, H.;Doullah, M.A.U.;Fukai, E.
한국균학회소식:학술대회논문집
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한국균학회 2015년도 춘계학술대회 및 임시총회
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pp.38-38
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2015
Throughout the world, clubroot disease is one of the most damaging diseases affecting Brassica oleracea. In order to perform QTL analysis of CR (clubroot resistance) loci in B. oleracea, we constructed a map, and analyzed CR-QTLs using the mean phenotypes of F3 progenies from the cross of a resistant double-haploid cabbage line (Anju) with a susceptible double-haploid broccoli line (GC). We identified one major QTL, pb-Bo(Anju)1 in C2 from Anju and four minor QTLs; pb-Bo(GC)1 in O5 from GC, pb-Bo(Anju)2, -3, -4 in C2, C3, and C7 from Anju, respectively. Additionally, we found that the accumulation of Pb-Bo(Anju)1 allele and the minor CR-QTLs is essential for resistance against various six isolates. Our finding markers closely linked to the CR-QTLs will help marker-assisted selection for CR. At present, we are undergoing toward map-based cloning for Pb-Bo(Anju)1 gene. The preliminary experiment delimited Pb-Bo(Anju)1 locus, encompassing among 450kB.
Plasmodiophora brassicae, the causal agent of clubroot disease, does the most serious damage to the Brassica crops. The limited control approaches make that the identification of clubroot resistance (CR) is more important for developing CR cultivars of the Brassica crops. So far, 8 CR loci were mapped. However, the variation of P. brassicae leads to the rapid erosion of its resistance. To identify novel CR genes, we employed three mapping population, derived from crosses between Chinese cabbage and turnip inbred lines ($59-1{\times}ECD04$ and $BJN3-1{\times}Siloga$) or between Chinese cabbage inbred lines ($BJN3-1{\times}85-I-II$), to perform QTL analysis. Totally, 8 CR loci were indentified and showed race-specific resistance. Physical mapping of these 8 loci suggested that 4 were located previously mapped position, indicating they might be the same allele or different alleles of the same genes. Other 4 loci were found to be novel. Further, CR near isogenic line carrying each CR locus was developed based on the marker assisted selection. Verification of these CR loci was underway. Identification of these novel CR genes would facilitate to breed broad-spectrum and durable CR cultivars of B. rapa by pyramiding strategies.
Clubroot disease is the major threat to the production of Chinese cabbage (Brassica rapa L.) in Japan. Although the breeding of the clubtoot resistant (CR) cultivars is one of the most efficient ways to control this disease, the CR cultivars do not always have effects due to the breakdown of resistance. Therefore, it is necessary to develop the breeding strategy to accumulate multiple CR genes in a single cultivar effectively. We have identified two incomplete dominant CR loci, Crr1 and Crr2, which are originated from the European CR turnip Siloga. To investigate the effectiveness of marker-assisted selection (MAS) for CR breeding, the inbred line with Crr1 and Crr2 was crossed with parental lines of the existing CR $F_1$ cultivar of Chinese cabbage, followed by 5 times of MAS and backcrossing. The $F_1$ derived from a cross between the resulting parental lines improved the clubroot resistance as expected and had the same morphological characters as the original $F_1$ cultivar. We have shown that the Crr1 locus comprised two loci: Crr1a, which by itself conferred resistance to the mild isolate; and Crr1b, which had a minor effect, but was not required for Crr1a-mediated resistance. Further genetic analysis suggested that Crr1b was necessary to acquire resistance to the more virulent isolate in combination with Crr2. Molecular characterization of Crr1a encoding TIR-NB-LRR class of R protein revealed that there were at least 4 alleles in Japanese CR cultivars of Chinese cabbage. PCR analysis with Crr1a-specific markers demonstrated that the functional alleles were predicted to be present in European CR turnips, Debra and 77b besides Siloga, whereas rarely in Japanese CR cultivars, indicating that Crr1a is an useful source to improve the resistance of Chinese cabbage cultivars.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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