Clostridium chauvoei is the etiologic agent of blackleg, a high mortality rated disease infection mainly cattle. In the present study, the partial sequences of 16S rRNA and flagellin gene of C. chauvoei isolated in Jeonbuk, Korea were determined and compared with those of reference strain. Oligonucleotide primers were designed to amplify a 811 bp fragment of 16S rRNA gene and 1229 bp fragment of flagellin gene. Sequencing analysis of 16S rRNA gene showed high homology to the reference strains ranging 82.3% to 100%, while flagellin gene were different from published foreign clostridia, showing 98.7% to 72.0% nucleotide sequence homology. Phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene revealed the close phylogenetic relationship of C. chauvoei and C. septicum in cluster I, which includes C. carnis, C. tertium, C. quinii, C. celatum, C. perfringens, C. absonum, C. botulinum B. Phylogentic analysis also revealed that flagellin gene formed a single cluster with C. chauvoei, C. septicum, C. novyi A, C. novyi B, C. tyrobutylicum, C. acetobutylicum. The genetic informations obtained from this study could be useful for the molecular study of C. chauvoei.
This study was investigated resistance on disinfectants and antibiotics of Clostridium chauvoei isolated from dairy farm in Kyongbuk province. The results obtained were summarized as follows ; C chauvoei isolated from dairy farm were susceptible to norfloxacin, penicillin, tetracycline, erythromycin, enrofloxacin, bacitracin, tyrosine, cephalothin and cefazolin but resistant to gentamicin, kanamycin, sulfamethoxazole+trimethoprim, amikacin, neomycin streptomycin, colistin. In effect on disinfectants, C chauvoei was inhibited completely to growth in mercuric bichloride ($HgCl_2$), harasol(sodium hypochloride 4-6%), long-life(high boiling tar acids et al), and phenol($C_6$$H_5$OH), but growth in all-stop(didecyl dimethyl ammonium chloride 10%), powercide(potassium monopersulphate 50% et al), antec vercon-s(triple salt 50% et al), and taego-51(6-alkyl-2.6-diaza-hexane-carbonic acid-1ㆍHCl et al). The effect of disinfectant was excellent in mercuric bichloride and harasol.
Outbreaks from September 1999 to July 2000 of blackleg in 4 milking and fatting cattle farms in the vicinity of Munkyong(northwestern part of Gyeongbuk province) were investigated biochemical characteristics of isolates and were surveyed epidemiological works during the period of 2 months from August to September 2000. Clostridium chauvoei, the etiological agent of blackleg is a serious pathogen of cattle and sheep causing fever, depression and lameness with high mortality in growing phase of 6 to 18 months old mainly beef cattle. Biochemical and cultural properties of 4 isolated Cl chauvoei were identical to those of reported results and isolates were susceptible to ampicillin, bacitracin, chlorarnphenicol, cephalothin, ciprofloxacin, erythromycin, norfloxacin, penicillin, and tetracycline, while they were resistant to amikacin, colistin, gentamicin, kanamycin, neomycin, streptomycin and trimethoprim-sulfamethoxazole. In the results of epidemiological survey, outbreak farms that concentrated region of milking or fatting cattle in each sites were so close contact within a radius of about 1km that they are separated only by wire fence or shrub harrier and flies, rodents, wild cats and birds could have the chance to move around between those farms. The origin of the outbreak blackleg were uncertain, but the transmission between farms were mainly through the movement of farm personnel, vehicles which were struck the feces or manures from farm and other mechanical factors such as flies, rodents and birds furthermore occurred 4 farms were not vaccinated. In conclusion, a periodic disinfection, vaccination and quarantine prevention are ideal methods of damage reduction by blackleg.
A fourteen-month-old Holstein bull from a private cattle fattening farm at Ansung county in Kyunggi Province Korea was submitted on August 2nd 1997, for examination at the Pathology Division of the National Veterinary Research Institute. The bull died within 24 hours after developing clinical signs of abrupt inertia, complete anorexia high fever(40.3℃) diffuse severe emphysematous swelling of upper part of the right hind leg lateral recumbancy and paralysis. At necropsy diffuse severe subcutaneous redness and influx of serosanguinous exudate containing gas bubbles had accumulated under the thorax right hip and upper region of right hind leg. Muscles in upper right hind leg were blackish to dark red and yellowish brown in color. Muscle bundles were dry and separated by gas bubbles and serosanguinous fluids and muscles sections from affected regions floated in water. Histopathologically muscle fibers were partially or entirely degenerated fragmented and separated by exudate and gaseous substance mixed with polymorphonuclear cells. Blood vascular walls in affected regions showed severe acute fibrinoid necrosis. Typical large rod-shaped bacteria with or without oval central to subterminal spores were frequently observed in tissue sections stained with H-E and Gram stain. The large Gram-positive anaerobic endospore-producing rods were isolated from the suspension of muscle lesions. Isolated bacteria were identified as Clostridium(CL) chauvoei and CL. sordellii by biochemical tests. This case was diagnosed as blackleg based on the typical clinical signs gross finding histopathological observation and bacteriological results. This is the first case report on blackleg associated with Cl. chauvoei and Cl. sordellii in Holstein cattle in Korea.
Kim, Jeong-Dong;Lee, Dae-Weon;Lee, Kyou-Seung;Choi, Chang-Hyun;Kang, Kook-Hee
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권2호
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pp.401-410
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2004
Soil samples from five different areas in Korea were collected during 2001/02 and examined for presence of the genus Clostridium. Direct immuno-fluorescent assay (IFA) examination showed that Clostridium septicum, Cl. novyi and Cl. chauvoei were detected in the soil of specific areas in Korea. Sixteen species of Clostridium were isolated and cultivated from the soil samples. Cl. peifringens was detected in all sampling locations, while the other species were not. The in vitro activity of 14 antibiotic agents was determined against 421 clostridia isolated from the soil contaminated with animal feces in Korea. Trovafloxacin was effective against all isolates of the genus Clostridium except one isolate of Cl. subterminale, two of Cl. tetani, and three of Cl novyi with $MIC_{50}$$8- 16\mu$g$ml^{-1}$. Thirteen species of Clostridium were resistant to vancomycin except for Cl. perfringens, Cl. sporogenes, and Cl. subterminale. Imipenem and trovafloxacin showed high antimicrobial activities (>95%) against all strains in the clostridia investigated. Therefore, antibiotic agents such as imipenem and trovafloxacin are the most suitable agents for polymicrobial infection as broad-spectrum monotherapy.
The effects of some chemicals for the germinative stimulation of Clostridium chauvoei spore studied. The results obtained were as follows: 1. Cooked meat medium (CMM) was superior to Liver-liver bouillon (LLB) for cultivation of the organisms. 2. Heating the organisms at $70^{\circ}C$ for 30 minutes prior to cultivation in CMM stimulated the germination rate. 3. The addition of 0.5mM L-alanine to CMM was found to be most effective for the rapid germination of the spores. 4. The addition of 0.2 mM D-alanine to CMM inhibited the germination of the spores even if the spores were heat treated. 5. The addition of 0.1mM manganese retarded the germination time, but the final germination rate was greater with 0.1mM manganese than with 0.5mM L-alanine. 6. The addition of both 0.5mM L-alanine and 0.1mM manganese stimulated the germination rate to 100 per cent. 7. The germination rate was greater with the addition of germination stimulants than without any stimulants. The germination rate was approximately 6 per cent greater with prior heat treatment than without heat treatment. 8. The optimum time for the harvest of vegetative forms of the organisms was 15 hours after cultivation in the media which contain suitable germination stimulants.
A total of 100 swelled, springered or flippered canned meat and fish products were studied the degree of contamination with clostridias and serological relationships to Hobbs'13 "heat resistant" types, heat resistance of spores and susceptibility of Clostridium perfringens isolates to several antibiotics. Samples examined in this study were collected from Seoul area from June to October, 1975 and prepared in Korea. Clostridias were isolated from 46(46%) of these samples; 19 strains of Cl. perfringens, 9 strains of Cl. oedematiens A, B, 5 strains of Cl. sordelli, each 3 strains of Cl. chauvoei, Cl, oedematiens C.E, and Cl. difficile, 2 strains of Cl. sporogenes. The highest percentage of contamination by Cl. perfringens was found in beef products(26.5%), and the following(5.2%) in mackerel pike and none in baitop shell. whale, manna brand. and top shell. One of 19 isolates of Clostridium perfringens found in meat products was shown to produce heat resistant spores which resist $100^{\circ}C$ for 60 minutes and others were heat labile strains which is killed at $90^{\circ}C$ for 30 minutes. The distribution of Hobbs' serotype of 19 isolates were each 4 strains of type 6, 8, and 11, 1 strain of type 13 and others untypable. 19 Strains of Cl. perfringens were shown a marked susceptibility to cefamezin, lincomycin and minocin and relatively sensitive to vibraimycin, geopen, and chloramphenicol. A marked resistance to kanamycin, colimycin, and gentamycin were shown. Aerobic enteropathogens from samples were not recovered.
In the event of an outbreak of a livestock epidemic, it has been considered that the existing burial-centered carcass disposal method should be improved ecofriendly for prevention of leachate and odors from burial basically in regard of pathogen inactivation. Therefore, the aim of this study is whether it was possible to treat the carcass of cattle and chickens using the chemical carcass treatment method. It was conducted to establish detailed treatment standards for the chemical treatment method of cattle and chicken carcasses based on the results of the proof of the absence of infectious diseases in cattle chickens. After inoculating cattle carcass with 10 pathogens (foot and mouth disease virus, bovine viral diarrhea virus, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis, Brucella abortus, Bacillus anthracis, Clostridium chauvoei, Clostridium perfringens, Escherichia coli, and Salmonella Typhimurium) and chicken carcasses with low pathogenic avian influenza virus, Clostridium perfringens type C, E. coli and Salmonella Typhimurium, these were treated at 90℃ for 5 hours in a potassium hydroxide liquid solution corresponding to 15% of the body weight. This method liquefies all cadaveric components and inactivates all inoculated pathogens by PCR and culture. Based on these results, it was possible to prove that chemical treatment of cattle and chicken carcasses is effective in killing pathogens and is a safe method without the risk of disease transmission. The chemical treatment method of livestock carcasses can be suggested as an alternative to the current domestic burial-centered livestock carcass treatment method, preventing environmental pollution, and contributing to public health.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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