A real-time PCR assay was developed and validated inhouse specifically for the detection of Clostridium perfringens (Cl. perfringens) in meats and vegetables by comparing with the culture method. The detection limit of the real-time PCR assay in phosphate-buffered saline was $10^2$ CFU/ml. When the two methods were compared in food samples inoculated with Cl. perfringens, the culture method detected 52 positives, whereas real-time PCR detected 51 positives out of 160 samples. The difference was without statistical significance (p>0.05). Real-time PCR assay is an option for quality assurance laboratories to perform standard diagnostic tests, considering its detection ability and time-saving efficiency.
A 3-year-old male lion at Gwangju Uchi Zoo presented for acute onset of haemorrhagic diarrhea and died. The lion showed reddening of the anus as the cause of haemorrhagic enteritis. Necropsy revealed a severe haemorrhagic colitis. Grossly, lesions included icterus, excess pericardial fluid. dark kidneys, and an enlarged, friable liver. The intestines were flaccid, thin-walled, dilated, and 9as-filled. The spleen was enlarged and pulpy because of congestion. Most of organs were rapidly postmortem autolysis. Histopathologically, the intestines were edema and transient leukocyte infiltration of the lamina propria, followed by necrosis. Especially of the intestinal submucosa was edematous, haemorrhagic, or filled with leukocytes. The crypts remained intact or dilated. C perfringens was isolated from a lion at bloody feces, and identified C perfringens type A, confirming the presence of C perfringens $\alpha-toxin$ by PCR. These results were suggested that the case were diagnosed as enterotoxicosis in the lion. More studies are needed on lion enterotoxemia. especially of its etiopathogenesis, in order to develop more efficient prevention for this disease.
Novel and specific recognition elements are of central importance in the development of a pathogen detection method. Here, we describe a simple method for identifying the cell-wall binding domain (CBD) from a sequenced bacterial genome employing homology search for phage lysin genes. A putative CBD (CPF369_CBD) was identified from a genome of Clostridium perfringens type strain ATCC 13124, and its function was studied with the CBD-GFP fusion protein recombinantly expressed in Escherichia coli. Fluorescence microscopy showed the specific binding of the fusion protein to C. perfringens cells, which demonstrates the potential of this method for the identification of novel bioprobes for specific detection of pathogenic bacteria.
pNAN15b와 E. coli BL21(${\lambda}DE3$)를 써서 클로닝한 E. coli 유래의 NALase는 높은 수준으로 발현이 되었다. Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Clostridium perfringens 세 가지 균주 유래의 NALase를 비교해본 결과 E. coli 유래의 NALase가 발현이 잘되어 전체 활성도는 높았지만 활성저해를 받는 경향이나 pH 11에서의 안정성을 보면 H. influenzae 유래의 NALase가 Neu5Ac 합성에 더 유리한 특성을 갖고 있어서 H. influenzae 유래의 NALase를 E. coli에서 충분히 발현할 수 있다면 H. influenzae 유래의 NALase가 더 효과적이라고 할 수 있다.
국내에서 구입 가능한 주요 식이 소재로부터 장내의 대표적인 유해균인 Clostridium perfringens의 생육을 억제시키는 소재를 탐색한 결과 감자즙에서 강력한 항균활성을 발견하였다. 감자즙 중 70% 황산암모늄용액에서 침전되는 단백질성 물질이 항균활성을 나타낸 것으로 밝혀졌으며, 이 감자단백질은 pH 4~10 사이에서는 안정하나 $60^{\circ}C$에서 10분간의 열처리로 그 활성이 소실되었다.
Detection for heat-labile enterotoxin(LT) of enterotoxigenic Escherichia coli(ETEC, EC81, O148:H28) and enterotoxin of enterotoxigentic Clostridium perfringents type A(CP, NCTC8238, Hobbs serotype 2) by use of a polymerase chain reaction (PCR) assay were positive reaction, which using LT gene-specific primers of ETEC with a detection limit equivalent from 100ng/${\mu}\ell$ to 1 pg of a DNA fragment of 417-bp in EC81 and enterotoxin gene-specific primers of CP with a detection limit equivalent from 100ng/${\mu}\ell$ to 10pg of a DNA fragment of 364-bp in NCTC8238. Detection for a LT gene of ETEC highly appeared 10-fold sensitivity than an enterotoxin gene of CP.
본 연구에서는 육포제조 시 사용된 양념의 여부 및 포장 방법에 따라 C. perfringens에 의한 육포의 안전 관리방안을 위해 정량적 미생물 위해평가를 수행하였다. 서울소재 대형마트 및 재래 시장에서 판매되는 275종의 오리지널 및 양념 육포에서 C. perfringens의 오염수준을 분석한 결과, 모든 제품에서 C. perfringens는 검출되지 않았으나 보관온도(10, 17, 25, $35^{\circ}C$)에서 C. perfringens 오염되었을 경우 포장조건(호기/진공)을 달리한 오리지널 및 양념 육포에서 모두 생존하는 것으로 나타났다. 육포에 @RISK를 활용한 위해도 추정결과, 진공포장 된 양념 육포에서 식중독 발생확률이 $2.77{\times}10^{-16}$으로 추정되었다. 또한 FDA-iRISK를 활용하여 육포의 위해도 및 관리순위를 비교한 결과, 진공포장된 양념 육포의 섭취를 통하여 C. perfringens에 의해 질병 발생확률과 질병에 의한 부담정도(DALYs)도 또한 가장 큰 것으로 나타났다. 포장조건(호기/진공)을 달리한 오리지널/양념 제품 중 진공포장된 양념 육포에서 C. perfringens에 의한 식중독 발생 가능성이 상대적으로 가장 높아 우선관리 대상임을 알 수 있었지만, 전반적으로 C. perfringens가 오염된 육포의 섭취에 의한 식중독 발생가능성은 매우 낮았다. 본 연구결과는 현재 육포에서 C. perfringens의 음성으로 관리하는 미생물학적 기준설정 제고에 대한 과학적 근거자료로 활용 할 수 있을 것으로 사료된다.
As part of a larger study of indigenous prokaryotic species diversity in South Korea, various samples from Namhangang were subjected to analyses. Fresh water, underwater sediment, and moss-inhabiting aerobic and anaerobic bacteria were isolated. 22 of the isolates were identified as unrecorded bacterial species in Korea that had ${\geq}98.7%$ 16S rRNA gene sequence similarity with published species. The aerobic strains isolated were Kurthia gibsonii and Massilia plicata. Also identified were four facultative anaerobic strains: Bacillus hisashii, Enterococcus rotai, Paenibacillus vini, and Pediococcus pentosaceus. 16 strictly anaerobic strains were identified as Bacteroides xylanolyticus, Carnobacterium maltaromaticum, Clostridium argentinense, Clostridium beijerinckii, Clostridium butyricum, Clostridium cavendishii, Clostridium diolis, Clostridium frigidicarnis, Clostridium perfringens, Clostridium saccharoperbutylacetonicum, Clostridium sphenoides, Clostridium subterminale, Cutibacterium acnes, Paraclostridium bifermentans, Prevotella paludivivens, and Romboutsia lituseburensis. Based on the examination of morphological, cultural, physiological, and biochemical properties of the isolates, descriptive information of these previously unrecorded species is provided here.
장조림 원료 쇠고기 우둔살과 가열 처리한 쇠고기 우둔살에서 중온성균, 저온성균 등 11종의 미생물에 대한 분포도를 측정하였고, B. cereus, C. botulinum, C. perfringens, L. monocytogenes 등과 같은 9종류의 주요 병원성세균의 분리를 시도하였다. 원료육에서 미생물분포는 대부분 높은 분포를 보였으나 가열 처리육에서는 대부분 검출되지 않았다. 원료육에서 저온성균은 오염지표세균 중에서 가장 높은 분포를 나태낸 반면, 가열처리 후 급격하게 감소하였다. 식중독균인 B. cereus, C. perfringens 및 L. monocytogenes 등 3균주가 원료육에서 분리된 반면 C. botulinum, E. coli O157:H7, Salmonella spp., Shigella spp., S. aureus 및 Y. enterocolitica는 분리되지 않았다. 원료 쇠고기에서 분리된 B. cereus는 CERT-RPLA 방법에 의해 enterotoxin을 생성한 반면, C. perfringens는 PET-RPLA 방법에 의해 독소를 생성하지 않았다.
The growth responses of Ruta chalepensis leaf-derived materials toward human intestinal bacteria were examined. The biologically active constituent of the R. chalepensis extract was characterized as quinoline-4-carboxaldehyde($C_{10}H_{7}NO$). The growth responses varied depending on the bacterial strain, chemicals, and dose tested. At 0.25 and 0.1 mg/disk, quinoline-4-carboxaldehyde strongly inhibited the growth of Clostridium perfringens and weakly inhibited the growth of Escherichia coli without any adverse effects on the growth of three lactic acid bacteria. Furthermore, at 0.05 and 0.025 mg/disk, this isolate showed moderate activity against C. perfringens. In comparison, chloramphenicol at as low as 0.01 mg/disk significantly inhibited the growth of all bacteria tested, and cinnamaldehyde at 0.25 mg/disk did not inhibit Bifidobacterium bifidum, B. longum, E. coli, and Lactobacillus acidophilus, with the exception of C. perfringens. The structure-activity relationship revealed that quinoline-3-carboxaldehyde had strong growth inhibition against C. perfringens, but quinoline, quinoline-3-carboxylic acid, and quinoline-4-carboxylic acid did not inhibit the growth of B. bifidum, B. longum, C. perfringens, E. coli, and L. acidophilus. These results indicate that the carboxyl aldehyde functional group of quinolines seems to be required for growth-inhibiting activity against C. perfringens, thus indicating at least one of the pharmacological actions of R. chalepensis leaf.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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