세 가지 균주 유래의 N-acetylneuraminate lyase 비교; Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Clostridium perfringens.

  • 이정호 (서울대학교 응용화학부) ;
  • 김병기 (서울대학교 응용화학부)
  • Published : 2000.11.09

Abstract

The N-acetylneuraminate lyase(NALase) from Escherichia coli was cloned and it was compared to that from Haemophilus influenzae and Clostridium perfringens. NALase from E. coli was expressed in very high level(about 6U/mg). The ManNAc Km value of three enzymes was almost the same. Pyruvate inhibited from H. influenzae was inhibited by GlcNAc in lower level than the others. The crude extract has about 30 times more activity than the cell for the substrate and product diffusion limit problem. The pH stability of three enzymes at pH 11 was also checked for its importance in the direct synthesis of Neu5Ac from GlcNAc and pyruvate at high alkaline condition.

pNAN15b와 E. coli BL21(${\lambda}DE3$)를 써서 클로닝한 E. coli 유래의 NALase는 높은 수준으로 발현이 되었다. Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Clostridium perfringens 세 가지 균주 유래의 NALase를 비교해본 결과 E. coli 유래의 NALase가 발현이 잘되어 전체 활성도는 높았지만 활성저해를 받는 경향이나 pH 11에서의 안정성을 보면 H. influenzae 유래의 NALase가 Neu5Ac 합성에 더 유리한 특성을 갖고 있어서 H. influenzae 유래의 NALase를 E. coli에서 충분히 발현할 수 있다면 H. influenzae 유래의 NALase가 더 효과적이라고 할 수 있다.

Keywords