• Journal of Ginseng Research
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• 제22권3호
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• pp.188-192
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• 1998

We established the model of clonogenic assay with human tumor cell line such as Calu-3 (lung carcinoma), HEC- lB (endometrial adenocarcinoma) , HEp-2 (larnyx carcinoma), Hs-5787 (breast carcinoma), K-562 (chronic myelogenous leukemia), SF-188 (brain carcinoma), SNU-1 (stomach carcinoma) and WiDr (colon carcinoma) . We investigated growth inhibition of solvent (EtOH, MeOH) and water (100$^{\circ}C$, 121$^{\circ}C$) extracts from Korean red ginseng by clonogenic assay. The results of clonogenic assay showed that EtOH extract had growth inhibition against Calu-3, SF-188 and SNU-1, MeOH extract had growth inhibition against Calu-3, Hs-5787, K-562, and WiDr, but water extract at 100$^{\circ}C$ and water extract at 121$^{\circ}C$ had not growth inhibition against used cell lines.

• Journal of Ginseng Research
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• 제19권1호
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• pp.27-30
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• 1995

We established the model of clonogenic assay with cancer cell lines such as SW-156(kidney), SNU-5(stomach), Hep G2(liver), and WiDr(colon), and we investigated anticancer effect of hydrophobic protein fraction(N-fraction) from Korea red ginseng by using this model. The results of clonogenic assay showed that N-fraction had anticancer activity against SNU-5 above 100 $0.2\mu\textrm{g}$/ml concentration, and did not exhibit anticancer activity against cell lines such as SW-156, WiDr, and Hep G2 up to 1,000 $\mu\textrm{g}$/ml concentration. This result suggests that N-fraction has specially anti-stomach cancerous effect.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제34권6호
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• pp.491-499
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• 2009

본 연구의 목적은 구강상피세포를 배양한후 각기 다른 조건의 냉동 보존법으로 6일간 보존시 각각의 세포의 활성도를 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity의 방법을 이용하여 비교 평가하기 위함이다. 각 실험군당 $1\times10^6$개의 세포를 다음의 방법으로 6일간 냉동 보존한다. Freezing container에 담아 $1^{\circ}C$/min의 냉동속도로 $-70^{\circ}C$까지 냉동 후 $-196^{\circ}C$에 냉동하여 보관한 일반 냉동 보존군, 세포를 바로 $-196^{\circ}C$의 액화질소에 넣어 냉동한 급속 냉동 보존군, $4^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 $-0.5^{\circ}C$/min속도로 서서히 냉동시킨 뒤 $-196^{\circ}C$에 냉동한 저속 냉동 보존군, 2 Mpa, 3 Mpa의 압력을 가하고 $-0.5^{\circ}C$/min속도로 $4^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 서서히 냉동시킨 뒤 $-196^{\circ}C$에 냉동한 2 Mpa, 3 Mpa압력 저속 냉동 보존군으로 나누었다. 6일 후 냉동되었던 세포를 급속 해빙하여 각각의 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity 값을 측정하여 비교하였다. 실험 결과 2 Mpa혹은 3 Mpa의 압력을 이용한 저속 냉동법이 저속 냉동법 및 급속 냉동법 보다 세포 활성도에 있어 우수한 경향을 나타내었다.

• Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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• 제15권1호
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• pp.35-48
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• 1993

The in vitro predictive tests in cancer chemotherapy of cancer cell lines to anticancer drugs were determined using novel dye exclusion assay [NDEA], [3H] thymidine incorporation, and clonogenic assay [CA>. Antitumor effect of Bleomycin, Cis-platin, Vinblastine, Methotrexate to HEp-2, B16 cell lines using rapid assays was compared with [CA> in this study. In dye exclusion assay of B l6 cell line, cancer cells were sensitive to Bleomycin at all concentrations, to Vinblastine at the level of peak plasma concentration [PPC], ${\times}1/10$ [PPC](P<0.05). And Bleomycin revealed relatively good cytotoxicity than that of CDDP and vinblastine at ${\times}10$[PPC], (P<0.05). HEp-2 cells were resistive to methotrexate at the level of ${\times}100$[PPC] (P<0.05) In [3H] thymidine incorporation assay, B 16 cells were sensitive to Bleomycin, CDDP, Vinblastine at the level of [PPC], ${\times}10$ [PPC](P<0.01). Dose-dependent drugs of bleomycin, CDDP were more sensitive than Vinblastine at high concentration (P<0.05). In clonogenic assay, HEp-2 cell line was sensitive to three drugs of all concentrations except ${\times}10$ [PPC] of CDDP. B 16 cell line was sensitive to all drugs(P<0,01). In comparison of chemosensitivity tests among three assays, the results were correlated(${\gamma}=0.99$, P<0.05).

• 한국축산식품학회지
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• 제24권3호
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• pp.293-297
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• 2004

본 연구에서는 유황오리로부터 항종양 효과를 나타내는 물질을 용매 추출법과 각종 크로마토그래피를 사용하여 분리 및 정제하였다. 유황오리로부터 정제한 활성 물질의 각종 종양세포에 대한 항암 효과를 측정한 결과 MTT assay는 100 $\mu\textrm{g}$/mL의 농도에서 HEp-2는 56%, KB는 58%의 세포 증식 억제 효과가 나타났다. 정상 세포주인 MDBK는 28%의 세포증식억제 효과가 나타나 정상 세포에 대한 세포 독성은 나타나지 않았다. Clonogenic assay는 200 $\mu\textrm{g}$/mL의 농도에서 HEp-2는 26%, KB는 28%의 생존율을 나타내었다. 따라서 유황오리로부터 정제한 활성 물질은 후두암 세포주인 HEp-2와 구강암 세포주인 KB에서만 특이적으로 세포 증식 억제 효과를 나타내었다.

• Radiation Oncology Journal
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• 제19권2호
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• pp.163-170
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• 2001

목적 : 방사선조사후 세포의 생존 분획은 세포집락 측정기법으로 확인하는 것이 표준이나 많은 비용과 시간이 소요되는 단점을 갖고 있다. 이에 생존 세포의 tetrazolium염의 자색 formazan 침전물로의 환원시키는 능력에 그 기반을 둔 MTT 기법을 사용하여 세포집락 측정기법을 대체하기 위한 기법으로서의 유용성과 그 실행상의 최적조건을 규명하고자 하였다. 방법 : PCI-1, SNU-1066, NCI-H630, RKO등의 세포주에 0, 2, 4, 6, 8, 10 Gy의 방사선을 조사한 후 세포집락 측정 기법과 MTT기법으로 세포 생존 분획을 조사하였다. 세포집락 측정기법은 $25\;cm^2$ 폴리스티렌 배양 플라스크에 방사선량에 따라 다른 수의 세포를 분주한 후 24시간 동안 배양 후 방사선을 조사하였고 이를 $10\~14$일 동안 배양 후 염색하여 생성된 세포집락의 수를 측정하였다. MTT기법은 침전물의 용해과정이 필요없는 Premix WST-1 시약을 이용하여 시행하였다. MTT기법은 각각의 세포주에서 세포수와 흡광도간의 선형관계와 최적 실험조건을 확인한 이후 시행하였다. 이 기법은 방사선을 조사받은 세포에서는 지수적 성장을 회복한 이후와 방사선을 조사받지 않은 세포는 4회 이상의 세포분열을 거친 후에 시행하였다. 세포집락 측정기법 및 MTT기법을 통하여 얻은 세포 생존율을 구한 후 이를 지표로 비교하였다. 결과 : 각 기법으로 얻은 세포 생존율의 표준편차는 $5\%$ 내외였다. 2가지 방법으로 구한 세포 생존율은 t-test로 비교하였을 때 $0\~4\;Gy$에서는 통계적으로 유의한 차이가 없었으며 회귀분석 결과는 선형적 관계가 있었다$(R^2=0.975-0.992)$. MTT 기법의 시행에 최적인 세포수는 배양효율에 따라 다른 것으로 나타났는데, 배양효율이 $30\%$ 이상이면 300개 이하가, $30\%$ 미만인 경우는 $500\~1,000$개가 적당한 것으로 확인되었다. MTT기법은 6 배가시간 경과 이후에 시행하는 것이 세포집락 측정기법과 가장 근접하였으며 적어도 4 배가시간 이후에 시행하는 것이 필요할 것으로 사료되었다. 이에 따르면 배가시간이 3일 이하인 세포주가 세포 민감성 측정방법으로서 MTT 기법이 세포 집락 측정 기법을 대체하여 사용하기에 적합한 것으로 사료되었다. 결론 : 이상에서, MTT기법을 이용하여 방사선조사 후의 세포생존을 측정하기 위해서는 예비실험을 통해 각 세포주에서의 최적의 조건을 찾는 것이 필수적이며 이 조건하에서 MTT기법을 시행해야만 방사선에 의한 세포 민감성 측정에 이용될 수 있음을 확인하였다.

• 생약학회지
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• 제30권3호
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• pp.275-279
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• 1999

The solvent extracts from Aloe arborescens and Aloe vera were randomly screened for inhibitory effects on the growth of tumor cell lines. In case of Aloe vera extracts, butyl alcohol extract and ethyl alcohol extract showed antitumor activity at $100\;{\mu}g/ml$ on lung cell lines(A427, Sk-mes-1, Calu-3 and 3LL). In Aloe arborescens extracts, butyl alcohol extract and ethyl alcohol extract exerted high activity at $100\;{\mu}g/ml$ on breast cell line(Hs-578T) and lung cell line(Sk-mes-1), respectively. The solvent extracts from Aloe vera exerted antitumor activity broadly on various tumor cell lines. In contract, the solvent extracts from Aloe arborescens exerted specific antitumoricity on a few tumor cell lines.

• Radiation Oncology Journal
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• 제6권2호
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• pp.151-154
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• 1988

악성종양 치유에 있어서 증식가능한 종양세포의 완전한 세포사 필요성 여부를 확인하기 위하여 C3Hf마우스의 섬유육종을 이용하여 실험을 시행하였다. $10^1$ 내지 $10^5$개의 종양세포를 근육에 이식한 후 3일 경과 후에 방사선조사를 시행하고 120일간 관찰하여 종양치유에 필요한 방사선량을 측정하였다. 평균 $50\%$에서 종양이 치유되는데 필요한 방사선량$(TCD_{50})$은 $10^1,\;10^2,\;10^3,\;10^4\;및\;10^5$개의 종양세포에 대하여 각각 14.8, 27.1, 42.4, 49.9 및 65.5Gy였다. 종양치유에 증식가능 종양세포의 완전한 세포사가 필요한 것으로 가정하여 이론적으로 계산한 수치는 각각 15.65, 28.50, 40.97, 53.41 및 65.85Gy로서 이론적 계산수치는 위의 실험결과와 거의 일치하였다. 따라서 최소한 본 실험에 사용한 종양모델에서는 종양치유를 위하여는 모든 증식 가능한 종양세포의 세포사가 필요함을 확인할 수 있었다.

• 생명과학회지
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• 제10권1호
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• pp.37-44
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• 2000

The mammary gland contains a subpopulation of epithelial cells with large proliferative potentials which are the likely targets for carcinogens. These clonogenic cells can proliferate and differentiate into functional glandular structures. Rat mammary epithelial cells (RMEC) were isolated and characterized in vitro. By flow cytometry of RMEC stained with fluorescein isothiocyanate-peanut agglutinin(PNA) and phycoerythrin anti-Thy-1.1 monoclonal antibody, it was possible to four cell subpopulations from 7-8 week old F344 female rat mammary glands: cells negative to both reagents (B-), PNA-positive cells (PNA+), Thy-1.1-positive cells (Thy-1.1+), and cells positive to both reagents (B+). When single PNA+ cells were isolated and cultured in Matrigel with irradiated (∼50 Gray) 3T3 fibroblast feeder layer, they gave rise to multicellular clonal structures of three types: alveolar, foamy alveolar, and squamous colonies. The developed structures were similar to the mammary glands in vivo. These results suggest that some of PNA+ cells possesses many of the characteristics of multipotent clonogenic stem-like cells.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제16권10호
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• pp.4357-4361
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• 2015

Thunbergia Laurifolia Linn. (TL) is one of the most familiar plants in Thai traditional medicine that is used to treat various conditions, including cancer. However, the antitumor activity of TL or its constituents has never been reported at the molecular level to support the folklore claim. The present study was designed to investigate the antitumor effect of an aqueous extract of TL in human breast cancer cells and the possible mechanism(s) of action. An aqueous crude extract was prepared from dried leaves of TL. Folin-Ciocalteu colorimetric assays were used to determine the total phenolic content. Antiproliferative and cell cycle effects were evaluated in human breast adenocarcinoma MCF-7 cells by MTT reduction assay, cell growth inhibition, clonogenic cell survival, and flow cytometric analysis. Free radical generation by the extracts was detected using electron paramagnetic resonance spectroscopy. The exposure of human breast adenocarcinoma MCF-7 cells to a TL aqueous extract resulted in decreases in cell growth, clonogenic cell survival, and cell viability in a concentration-dependent manner with an $IC_{50}$ value of $843{\mu}g/ml$. Treatments with extract for 24h at $250{\mu}g/ml$ or higher induced cell cycle arrest as indicated by a significant increase of cell population in the G1 phase and a significant decrease in the S phase of the cell cycle. The capability of the aqueous extract to generate radical intermediates was observed at both high pH and near-neutral pH conditions. The findings suggest the antitumor bioactivities of TL against selected breast cancer cells may be due to induction of a G1 cell cycle arrest. Cytotoxicity and cell cycle perturbation that are associated with a high concentration of the extract could be in part explained by the total phenolic contents in the extract and the capacity to generate radical intermediates to modulate cellular proliferative signals.