This study was carried out to investigate the characteristics survey of Clavicorona pyxidata strains. C. pyxidata are selected 3 kinds of strains collected in GWANG DEOCK Mt., DO BONG Mt., and BUK HAN Mt., Mycelial growth of C. pyxidata collected from GWANG DEOCK and BUK HAN Mt. is 64mm, 60mm for 18days respectively. DO BONG Mt strain is 85mm for 9 days. Transparent crystal body of C. pyxidata mycelia were appeared by microscopic examination of 100 magnification. Optimal temperature of mycelial growth in C. pyxidata strains are 25~30℃ respectively.
Clavicorona pyxidata DGUM 29005의 균사 생육을 위한 최적 배양조건 및 효소 활성을 조사하였다. 균사 생육을 위한 최적 온도 및 pH는 각각 $24^{\circ}C$ 및 5.0이었다. 사용된 복합배지 중 malt extract medium (MEM)에서 가장 좋은 균사 생육을 나타내었다. 최소배지로 Czapek-Dox 한천배지를 사용하고 탄소원으로 trehalose, mannitol, sucrose 및 maltose 첨가시 균사생육이 우수하였다. 전반적으로 무기질소원이 유기질소원 보다 균사 생육을 더 촉진하였으며, 무기질소원으로 calcium nitrate를 사용하였을 때 균사 생육이 가장 우수하였다. 인산원으로 $Na_2HPO_4$를 사용했을 때 균사생육이 촉진되었으며, 가장 우수한 비타민원은 p-aminobenzoic acid이었다. MEM 액체배지를 사용하여 $24^{\circ}C$에서 20일간 C. pyxidata DGUM 29005를 배양하여 균사외 분비효소 및 균사내 효소의 활성도를 측정한 결과, 균사외 분비 효소 중 laccase의 활성도가 다른 효소에 비해 높았으며, ${\alpha}$-amylase, chitinase, lipase 및 pretense의 활성도는 낮거나 없었다.
In a previous study, an extract of Clavicorona pyxidata DGUM 29005 mycelia demonstrated an inhibitory effect against enzyme-associated perceptual disorders. We have attempted to determine whether this mycelial extract is also capable of inhibiting the activities of acetylcholinesterase (AChE) and ${\beta}$-secretase (BACE) activity. Butanol, ethanol, and water extracts of C. pyxidata DGUM 29005 mycelia were shown to inhibit AChE activity by 99.3%, 93.7%, and 91.7%, respectively. The inhibitory value of the butanol extract was more profound than that of tacrine (95.4%). The ethanol extract also exerted an inhibitory effect against BACE activity; this fraction may harbor the potential for development into a pharmocotherapeutic modality for the treatment of Alzheimer's disease (AD) patients. Rat pheochromocytoma PC12 cells in culture were not determined to be susceptible to the cytotoxic activity evidenced by the mycelial extract. The ethanol extract inhibited endogenous AChE activity in PC12 cellular homogenates, with an $IC_{50}\;of\;67.5{\mu}g/ml$, after incubation with intact cells, and also inhibited BACE activity in a dose-dependent fashion. These results suggest that the C. pyxidata mycelial extract has the potential to enhance cholinergic function and, therefore, may perform a function in the amelioration of the cholinergic deficit observed in cases of AD, as well as other types of age-associated memory impairment.
Amyloid $\beta$-peptide (A$\beta$), which is a product of the proteolytic effect of $\beta$-secretase (BACE) on an amyloid precursor protein, is closely associated with Alzheimer's disease (AD) pathogenesis. There is sufficient evidence to suggest that a BACE inhibitor may reduce A$\beta$ levels, thus decreasing the risk of AD. In a previous study, an extract of Clavicorona pyxidata DGUM 29005 mycelia was found to inhibit the production of a soluble $\beta$-amyloid precursor protein (s$\beta$APP), A$\beta$, and BACE in neuronal cell lines. We sought to determine whether this mycelial extract exerts the same effect in human rhabdomyosarcoma A-204 and rat pheochromocytoma PC-12 cells. We found that the production of A$\beta$ decreased in a dose-dependent manner in the presence of the mycelial extract and that the concentration of A$\beta$ never exceeded $50{\mu}g/ml$. The presence of sAPP was detected in every culture medium to which the mycelial extract had been added and its concentration remained the same, regardless of the concentration of the extract used. Endogenous $\beta$-secretase activity in A-204 and PC-12 cellular homogenates also decreased in the presence of this extract. These cells, in culture, were not susceptible to the cytotoxic activity of the mycelial extract.
담자균류로부터 치매 예방 및 치료 효과를 갖는 생물활성물질을 탐색하기 위한 기초 자료를 확립하기 위하여 56종의 배양 균사체 메탄을 추출물 및 배양 여액의 ethylacetate(EtOAc) 가용성 분획에 대하여 prolylendopeptidase(PEP), acetylcholine esterase(AChE) 및 혈전 응고에 대한 저해활성을 측정하였다. 그 결과 PEP에 대하여 Amanita aspera, Phellinus chrysoloma의 균사체 추출물 및 배양여액의 EtOAc 가용성 분획이 40ppm에서 모두 90% 이상의 저해활성을 나타내었으며 분홍껍질고약버섯(Peniophora quercina), 잎새버섯(Grifola frondosa), Wolfiporia extensa, 좀나무싸리버섯(Clavicorona pyxidata) 및 Phanerochaete soy교교의 배양액이 90% 이상의 저해활성을 나타내었다. AChE에 대하여는 40ppm 농도에서 어느 것도 강한 활성을 나타내지 못하였으나 조개껍질버섯(Lenzites betulina), Phellinus chrysoloma, Wolfiporia extensa, Phanerochaete sordida의 균사체 추출물과 Hypocrea nigricans, Coriolus azureus, 팽나무버섯(Flammuzina velutipes), Phlebiopsis gigantea 및 Bondarzewia montana의 배양여액 EtOAc 가용성 분획이 40% 정도의 저해활성을 나타내었다. 한편 혈전응고 저해활성의 지표로 삼은 thrombin times(TT) assay에서는 Amanita aspera, Oxyporus latemarginata, 분홍껍질고약버섯(Peniophora quercina), 말굽버섯(Fomes fomefarius)의 배양여액 EtOAc 추출물과 Clitocybe clavipes, Trametes versicolor, Phlebiopsis gigantea의 균사체 추출물이 550 ppn의 농도에서 혈전 생성에 걸리는 시간을 2배 내지 3배 연장하는 효과를 나타내었으나 activated partial thromplastin times(APTT) assay에서는 어느 것도 효과를 인정할 수 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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