Bacillus amyloliquefaciens D4, which produces a strongly fibrinolytic enzyme, was isolated from Chungkook-Jang, a traditional Korean soybean-fermented food. B. amyloliquefaciens D4 was mutated with N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) to yield a series of mutants with increasing levels of fibrinolytic enzyme production. After mutation, a mutant D4-7 was obtained with fibrinolytic activity about eight times stronger than the parent strain. The fibrinolytic activity of B. amyloliquefaciens D4-7, reached a maximum, when the producer was cultivated in 2% Isolated Soy Protein (ISP) broth for 48 h at $37^{\circ}C$. Compared to commercial fibrinolytic enzymes, the cell-free culture supernatant of B. amyloliquefaciens D4-7 showed stronger activity than plasmin and streptokinase. The optimum temperature and pH were $50^{\circ}C$ and 10.0 and thermostability was increased by the addition of glycerol, glucose, and NaCl.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.31
no.3
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pp.389-393
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2002
Among the bacterial strains isolated from chungkook-jang, Bacillus subtilis CH-1, Bacills circulans K-1 and Bacillus subtitis (natto) N-1, Bacillus subtitis CH-1 showed the highest productivity of biosufactant. A-medium was selected for the basal medium in the large scale production of biosurfactant, and modified to synthetic medium which containing 2% glucose, 0.3% soy peptone, and mineral salts. The surface tension was reduced to maximal value after 96 hr after fermentation, about the 43% of initial tension. Temperature and initial pH of medium was not critical factor for the biosurfactant production. The yield of crude biosurfactant was 6 g/L under the optimum condition.
The growth process of the Chungkook-jang that occured by utilizing such traditional methods as Bacillus natto and Bacillus subtilis method has been examined. The results of the experiment in which the changing process of elements during the storage period had been measured are as follows: 1. During the growth period, concerning any change in pH, the storage period had been declined and after 18 days pH rose above 7.0. Salt content was between $5.28{\sim}6.40%$ and Bacillus subtilis fungus showed the highest titrable acidity. 2. Moisture content was between $50.94{\sim}56.74%$ and crude protein content range was $14.44{\sim}18.60%$ indicating irregularity in pattern resulting from the testing equipment groups, whereas crude fat and crude fiber tend to decrease in general. 3. During the storage, total sugar and ethyl alcohol content in all of groups tended to decrease and after 18 days Bacillus subtilis total sugar content was the lowest. 4. Amino nitrogen and water soluble nitrogen content increased with days, but no difference was found between groups. 5. Amylase and protease activity showed irregular pattern with time, but no significant difference between groups was found.
Chungkook-jang Koji was fermented with rice straw at $40^{\circ}C\;and\;50^{\circ}C$ for 72 hours. The changes of proximate composition, pH, titrable acidity, nitrogen compounds, protease activity and free-amino acids during the fermentation were investigated. Moisture, lipid and protein contents remained essentially unchanged during the fermentation. The pH was gradually increased from 6.4 to 7.46 and 7.82 at $40^{\circ}C\;and\;50^{\circ}C$, respectively, after 72 hour fermentation. Amino type and water soluble nitrogen increased as fermentation progressed. however, the former slightly decreased after 60 hour fermentation. Chungkook-jang fermented at $40^{\circ}C$ showed somewhat higher protease activity than $50^{\circ}C$. However, protease activity at both fermentation temperatures showed the same trend; that is, it increased until 48 hour fermentation and thereafter decrease. Free amino acid content of Chung-kook-jang after 72 hour fermentation at $40^{\circ}C$ was 6 times greater than that of the steamed soybean, while it was 2.5 times greater at $50^{\circ}C$. Based on these results. it seems that the optimum fermentation conditions for Chungkook-jang were $40^{\circ}C$ and 72 hours.
Soybean is useful source of protein, especially in Asia. But soybean needs heat inactivation or fermentation process before consumption, since it contains the toxic lectin and various protease inhibitors. Therefore, production of soybean boiling-waste liquor (SBWL) as a byproduct is inevitable. In this study, the chemical composition of SBWL and the optimization of culture conditions for Bacillus pumilus JB-1, a selected strain for functional chungkuk-jang fermentation, using SBWL were investigated. The SBWL contains 88% water, 9.5% free sugar, 1.6% crude protein, 0.3% crude fat, 0.1% crude fiber and 2.1% ash, respectively. The contents of total polyphenol, total flavonoids and free amino acid in SBWL were 55%, 76%, and 30% of those of raw soybean, respectively. Culture conditions for B. pumilus JB-1 in SBWL were optimized. The 1/10-diluted, 0.1 % of $(NH_4)_2SO_4$ added SBWL without pH adjustment and carbon source addition was cultured at $37^{\circ}C$ for 48 h with agitation (120 rpm). The 0.5% of inoculation was enough. The large scale fermentation in 5-L jar fermentor showed that the SBWL is a good resource for production of chungkuk-jang starter and functional ingredients.
For studies of fibrinolytic enzyme strain K-54 was isolated from the Korean traditional food chungkook-jang. Isolated strains K-54 was identified as Bacillus subtilis. The molecular weight of fibrinolytic enzyme from B. subtilis K-54 was 27 kDa. Optimum temperature for fibrinolytic enzyme of B. subtilis K-54 was $50-70^{\circ}C$ and optimum pH for producing the enzyme of this strain was ranging from 8 to 12. Also, it was found out enzyme activity was completely inhibited by 1mM PMSF. The result indicated this enzyme was thermo-stable alkaline serine protease with strong fibrinolytic activity. The wool and silk were treated with protease of B. subtilis K-54. As a result, the property of dyeing of wool fabrics was increased. By the increasing of treatment time became smoothened. But the change of mechanical properties were not changed.
In order to study the changes of components and enzyme activities during Chungkookjang-Koji preparation, the Kojies were prepared with Bacillus Natto, Bacillus subtilis and traditional method. The temperature of Koji materials during Koji preparation was very different according to the experimental group. The content of ethyl alcohol, reducing sugar, amino nitrogen and water soluble nitrogen were changed by the Koji preparing stage and experimental group. Amylase and protease activities showed on irregular change on standing and their activities were not remarkably different among the groups and appeared weakly.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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