• Applied Biological Chemistry
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• 제35권3호
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• pp.191-195
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• 1992

강낭콩 잎에서 에틸랜에 의하여 유도되는 분자량 30KD인 염기성 키틴분해효소를 정제하고 그 항균활성을 연구하였다. 이 단백질은 chitinase 활성과 lysozyme 활성을 가졌으며, Aspergillus fumigatus, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani의 균사 생장을 억제하였다. 그러나 함께 실험한 2종류의 미생물 chitinase, 달걀 lysozyme, 파파야 protease는 이들에 대한 항균작용을 갖지 않았다. 이상의 결과는 lysozyme 활성을 가진 식물 chitinase가 병원균의 균사생장을 억제하여 자신을 방어할 수 있음을 시사한다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제42권1호
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• pp.7-11
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• 1999

An extracellular chitinase of the selected strong antifungal microorganism, Serratia sp. 3095, was purified by salting out, affinity adsorption, Sepadex G-100 gel fitration, Sepadex G-75 gel fitration and DEAE Sepadex A-50 chromatography. The molecular weight of the purified chitinase was estimated to be 62,000 dalton by SDS-PAGE. Optimal pH and temperature of the chitinase were pH 7.5 and 45, respectively. The enzyme retained more than 80% of the activity between pH 5.5 and pH 10.5, and below $50^{\circ}C$ but was unstable above $60^{\circ}C$, below pH 5.0. The activity of the chitinase was inhibited about 60% by $Sn^{2+}$, 40% by $Hg^{2+}$ and $Ag^+$, 70% by AHA, 40% by iodoacetate, 35% by thiourea and p-CMB, but stabilized by SDS. $K_m$ value of the purified chitinase was 3.68 mg/ml for colloidal chitin. The chitinase from Serratia sp. 3095 showed antifungal activity to Fusariurm solani.

• The Plant Pathology Journal
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• 제15권3호
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• pp.144-151
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• 1999

Chitinase activities from Shumard oak tissues were determined to study changes in chitinase activities related to water stress. The enzyme extracted in sodium acetate buffer (0.1M, pH 4.5) was assayed by a colorimetric method. In addition, the fungal hyphae of Hypoxylon atropunctatum in xylem tissues of oak were observed through scanning electron microscopy. The enzyme in oak tissues was mainly endochitinase, and optimum pH for enzyme activity was 5. Specific chitinase activities from both of stems held under high relative humidity (ranges of 0.63-1.11 pKatal/$\mu\textrm{g}$ of protein) and stems held under low relative humidity (ranges of 0.41-0.99 pKatal/$\mu\textrm{g}$ of protein) were significantly increased following fungal inoculation with H. atropunctatum. However, there was no significant difference in chitinase activities between tissues held under high and low humidities, which might be due to fungal chitinase. Scanning electron microscopy showed holes in fungal hyphae in the xylem tissues of stems held under high humidity but not in the stems held under ow humidity, suggesting that hyphae might be hydrolyzed by plant hydolases such as chitinase.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권6호
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• pp.1001-1005
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• 2010

The chitinase-producing strain TKU008 was isolated from soil in Taiwan, and it was identified as a new species of Pseudomonas. The culture condition suitable for production of chitinase was found to be shaking at $30^{\circ}C$ for 4 days in 100 ml of medium containing 1% shrimp and crab shell powder, 0.1% $K_2HPO_4$, and 0.05% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ (pH 7). The TKU008 chitinase was suppressed by the simultaneously existing protease, which also showed the maximum activity at the fourth day of incubation. The molecular mass of the chitinase was estimated to be 40 kDa by SDS-PAGE. The optimum pH, optimum temperature, pH stability, and thermal stability of the chitinase were pH 7, $50^{\circ}C$, pH 6-7, and <$50^{\circ}C$, respectively. The chitinase was completely inhibited by $Mn^{2+}$ and $Cu^{2+}$. The results of peptide mass mapping showed that 11 tryptic peptides of the chitinase were identical to the chitinase CW from Bacillus cereus (GenBank Accession No. gi 45827175) with a 32% sequence coverage.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권6호
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• pp.599-606
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• 1990

근해 연안 토양으로부터 Chitinase 활성이 우수한 균주를 분리하여 Aeromonas salmonicida로 동정하였으며, 분리균주의 효소생산 최적조건은 colloidal chitin 1.26, tryptone 2.95, $MgSO_4-7H_20$0.15, $K_2HP0_4$, 0.15, pH8.5, 27'C에서 48시간 진탕배양하였을 때였다. 효소의 정제는 배양액으로부터 ammonium sulfate 침전, affinity adsorption, hydroxylapatite chromatography, gel filtration을 통해 수율 29.7, 정제도 18.5배의 정제효소를 얻었다. 정제된 chitinase의 최적온도와 pH는 $50^{\circ}C$와 7.0이었고 pH 안정성은 pH5.0-9.0 사이였고 $50^{\circ}C$까지 안정하였으며 Km값은 1.276mg/ml, 분자량은 200,000 daltons으로 확인되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.511-518
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• 1992

Serratia marcescens ATCC 27117에서 부터 클로닝한 58KD 키티나아제 유전자를 subcloning 하여 2.6Kb DNA 삽입단편을 가진 플라스미드 pCHI26을 제조하고 대장균에서 발현과 분비를 살펴보았다. 키티니아제 유전자는 대장균에서 자신의 prmoter를 이용하여 매우 낮은 수준(<5mU/m$\ell$)으로 발현되었으며 lac promoter를 이용하는 경우 키티니아제 발현이 증가되어 약 80mU/m$\ell$가 되었다. 발현된 키티니아제는 거의 전적으로 대장균의 periplasm에 위치(약 87.8)하고 있었다. 배양시간에 따라서 세포내 키티니아제 활성을 측정해본 결과 초기정지기까지는 균체 성장과 비례해서 세포내 효소활성이 증가되었으나 정지기부터 세포내 효소활성이 급격히 줄어드는 양상을 보였다. 그러나 이 기간 동안 세포의 효소활성의 변화는 거의 없었다. 이러한 결과로 보아 periplasm에 위치한 키티나아제가 대장균의 단백분해효소에 의해서 분해되는 것으로 추정되었다.

• 환경생물
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• 제22권1호
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• pp.167-170
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• 2004

Phytopathogenic fungi들에 대해 매우 공격적인 Trichoderma hurzianum은 다른 곰팡이들의 세포벽 주성분인 chitin을 분해하는 extracellualr chitinase를 분비하기 때문에 매우 효율적인 biocontrol agent로 사용할 수 있다. Trichoderma harzianum의 생물학적 제어 기능을 이용하기 위하여 extracellualr chitinase의 생산성을 높일 수 있는 batch모드에서의 적정 환경을 찾는 일은 매우 복잡하다. 이러한 문제를 해결할 수 있는 방법이 바로 self-directing optimization이다 이 방법을 이용하여 실험한 결과 6∼7차례의 실험만으로 최적의 온도 혹은 pH 및 폭기율과 교반양을 구할 수 있었다. 그 결과 온도 $32^{\circ}C$, pH4.9, 폭기율 3.22 ι, 교반율 225 rpm에서 chitinase의 최대 생산량 16.825 U를 나타내었다. 이는 온도 $25^{\circ}C$, pH 5, 폭기율 1l, 교반율 150 rpm에서 나타난 chitinase 생산량 4.221 U에 비교하면 3.99배 증가한 효과를 나타내고 있다. 이로서 self-directing optimization방법을 통한 최적화 기술이 효소 생산 기술에 있어 그 최적화 과정을 단축시키고 최종 과정에 도달하는 새로운 기술로 적용할 수 있음을 알 수 있었다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제33권3호
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• pp.318-328
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• 2017

Chitinase-producing Paenibacillus elgii strain HOA73 has been used to control plant diseases. However, the antimicrobial activity of its extracellular chitinase has not been fully elucidated. The major extracellular chitinase gene (PeChi68) from strain HOA73 was cloned and expressed in Escherichia coli in this study. This gene had an open reading frame of 2,028 bp, encoding a protein of 675 amino acid residues containing a secretion signal peptide, a chitin-binding domain, two fibronectin type III domains, and a catalytic hydrolase domain. The chitinase (PeChi68) purified from recombinant E. coli exhibited a molecular mass of approximately 68 kDa on SDS-PAGE. Biochemical analysis indicated that optimum temperature for the actitvity of purified chitinase was $50^{\circ}C$. However, it was inactivated with time when it was incubated at $40^{\circ}C$ and $50^{\circ}C$. Its optimum activity was found at pH 7, although its activity was stable when incubated between pH 3 and pH 11. Heavy metals inhibited this chitinase. This purified chitinase completely inhibited spore germination of two Cladosporium isolates and partially inhibited germination of Botrytis cinerea spores. However, it had no effect on the spores of a Colletotricum isolate. These results indicate that the extracellular chitinase produced by P. elgii HOA73 might have function in limiting spore germination of certain fungal pathogens.

• KSBB Journal
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• 제11권1호
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• pp.92-98
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• 1996

전남 법성포 해안의 갯벌 시료로부터 chitinase 생 생 균주를 분리하였으며, 분리된 균주 중에서 chiti­n nase 생성능이 우수한 JM을 선발 동정하여 Serranasetia sp. JM으로 명명하였다. Serratia sp. JM은 nu­trient 배지냐 MacConkey 배지에서 prodigiosin 색소를 생성하며, 정제 chitin이 포함된 한천 배지에서 는 chitinase 생성에 따른 clear zone 형성이 확인되 었다 Serratia sp. JM은 형태적, 생리.생화학적 특 성과 유기물 동화는 SUCCIniC, urea 및 pyruvic 산 을 제외하고는 공시 균주인 Serratia marcescens ATCC 27117과 유사하였으며, tetracyclin에 대해 서는 항생제에 대한 내성을 가지고 있었으나, kanamycin과 chloramphenicol에 대해서는 내성을 가지지 않았다. Serratia sp. JM의 chitinase 생성에 따른 최적온도와 pH는 $30^{\circ}C$ 와 7.5로 냐타났다. Serratia sp. JM은 120시간까지는 배양 시간이 증가 함에 따라 chiti-nase 생성과 pH는 점차 증가하였으 나, 배양 120시간 이후에는 chitin 분해에 따른 acetic acid의 축적에 따라 chitinase 생성과 pH는 감소 하였다.

• KSBB Journal
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• 제11권6호
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• pp.696-703
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• 1996

S. marcescens QM 81466 균주는 chitin 분해 효소(1mg/Lmedium)를 선택적으로 높게 생성시킬 수 있는 균주로서, chitin을 N-acetyl-$\beta$-D-glucosa­m mine(NAG)으로 효소적 가수분해를 할 때 chitinase와 chitobiase의 두 가지 가수분해 효소계를 구 성시킨다. 본 연구에서는 이 균주의 chitinase/chitobiase 생성을 위한 chitin 입자크기에 대한 최적화와, 회분 발효계에서 이 균주의 세포 밀도 배양에 따른 두 효소 생성의 변화를 조사하여 NAG 생산성의 증대를 시도하였다. 아울러. chitin과 CM­ chitin이 chitinase/chito biase 생성비 와 NAG 생성 에 미치는 영향을 검토하였는데, CM-chitin을 colloidal 및 결정성 chitin 대신에 사용했을 때, chitinase 활성을 약 7~10U/mL 증가시켰다. 이 경우에 있어서, chitinase/chitobiase의 비는 9:1로 서 NAG의 생성량이 3.0g/L로서 높게 나타났다.