Development of stable rCHO cell lines is still time consuming and labor intensive, although it is a critical step in the commercial development of recombinant antibodies. The current work demonstrates, for the first time, that electroporation of CHO cells with DMSO can enhance stable expression of recombinant antibodies in rCHO cells. Electroporation with DMSO resulted in an average 3.7-fold and 2.8-fold increases in expression levels of aflibercept and pembrolizumab, respectively, in pools of stable rCHO cells. It also resulted in an average of 2.2-fold and 2.6-fold increases in the expression of aflibercept and pembrolizumab, respectively, in single-cell derived rCHO clones. Simple batch cultures of rCHO cell clones with the highest expression produced 1.0 g/l for aflibercept and 1.4 g/l for pembrolizumab without a time-consuming gene amplification process. Electroporation with DMSO also shortened the development of rCHO cell lines to 2-3 months, allowing rapid establishment of stable rCHO cell lines with a desirable expression level antibodies.
본 연구는 Chinese hamster ovary (CHO-KI) 배양세포에서 S-15분획에 의해 활성화된 bezo(a) pyrene (BP)과 3-methylcholanthrene(MC)에 의해 유발된 DNA단사절단과 DNA복제억제 및 그 회복과정에 미치는 한국산 인삼추출물 saponin의 영향을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. S-15분획으로 활성화된 10-5 M의 BP 또는 MC를 1.0-10ng/ml의 saponin과 함께 처리할 경우 BP와 MC단독처리군에 비해 DNA 단사절단률이 감소하였다. DNA 합성률은 활성화된 10-5M의 BP와 10-6 M의 MC에 의해 각각 50% 및 75% 억제되었으나, 0.1-10ng/ml의 saponin을 동시에 처리할 경우 DNA 합성억제률이 약 10% 이상 둔화되었다.
본 연구는 알킬화제를 처리한 CHO-K1 세포에서 DNA 복제억제와 그 회복과정의 분자론적 기작을 규명할 목적으로 방사선 이중 표지에 의한 DNA 합성율의 측정, 알칼리 자당 농도구배 초원심분리법에 의한 DNA 분자량과 후복제 회복율을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) 1mM methyl methanesulfonate (MMS)와 1nM N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) 이하의 낮은 농도의 처리군에서는 DNA 합성율이 급격히 감소하였으나, 2 mM MMS, 2mM MNNG이상의 농도에서는 그 감소양상이 둔화되었다, (2) DNA 합성율은 알킬화제의 처리 직후 감소하였다가 시간경과에 따라 회복되어 처리후 4시간 째에는 대조군 수준 또는 그 이상으로 회복되었다.
한국독성학회 2001년도 International Symposium on Dietary and Medicinal Antimutgens and Anticarcinogens
/
pp.189-189
/
2001
For a continuous expression of human cytochrome p450 3A5 (CYP3A5) and NADPH-cytochrome P450 reductase (CYPR) proteins, bicistronic construct (CYP3A5BC-LNCX2) was made using internal ribosome entry site (IRES). As for mammalian cell expression, we used pLNCX2 retroviral vector; and using calcium phosphate, plasmid transfer was achieved in 293GPG cell and transduced in Chinese hamster ovary (CHO) cell.(omitted)
돌연변이 유발 물질인 mitomycin C(MMC)를 처리하여 배양한 Chinese hamster ovary(CHO) cell에 대한 감잎차 추출액의 항돌연변이 효과를 자매 염색 분체 교환(sister chromatid exchange, SCE) 시험법을 사용하여 측정하여 보았다. 감잎차 추출액 자체는 CHO 세포의 SCE 빈도수를 변화시키지 않았으며, 세포의 분열 주기중 S phase에 S9 mixture 없이 감잎차 추출액이 처리되었을 경우 MMC로 유도된 SCE 빈도수를 감소시키지 않았다. 그러나 S9 mixture 존재하에 $G_{1}$ phase에서 MMC 처리 후 감잎차를 처리하는 후처리 방식으로 감잎차 추출액을 처리하였을 때, 저농도($\leq$40$\mu\textrm{g}$/ml)에서 MMC로 인해 유발된 SCE 빈도수가 낮아지는 것을 볼 수 있었다. 이에 비해 고농도(>40$\mu\textrm{g}$/ml)에서는 SCE 빈도수의 감소 효과가 없었다. 본 연구결과, MMC 처리된 CHO 세포에 대한 감잎차 추출액의 항돌연변이 효과를 볼 수 있었고, 이 효과는 S9 mixture 존재하에서 저농도의 감잎차 추출액이 $G_{1}$ phase에 처리되었을 때 나타났다. 감잎차 추출액의 이러한 항돌연변이의 효과의 기전은 감잎차 추출액의 대사산물이 MMC 처리된 CHO 세포에 대한 DNA-excision repair activity를 촉진시키기 때문인 것으로 생각된다.
This study was performed by the sister chromatid exchanges (SCEs) to investigate the effects of Aphidicolin (APC) or 2, 4-dinitrophenoi (DNP) on cross-adaptive response to ultraviolet radiation (UV) or ethyl methanesulfonate (EMS) in Chinese hamster ovary (CHO) cells. The pretreatment with 1 J/m$^2$ UV decreased the yield of SCEs induced by subsequent treatment with 8 mM EMS in CHO cells. And the treatment with 10 $\mu$g/ml APC or 50 $\mu$M DNP during incubation after pretreatment with 1 J/m$^2$ UV increased the yield of SCEs induced by 8 mM EMS. The pretreatment with 2 mM EMS decreased the yield of SCEs induced by subsequent treatment with 5 J/m$^2$ UV. The treatment with 10 $\mu$g/ml APC during incubation after 2 mM EMS increased the yield of SCEs induced by 5 J/m$^2$ UV. These results suggest that APC and DNP inhibit cross-adaptive response to pretreatment with UV and subsequent treatment with EMS, and also cross-adaptive response to pretreatment with EMS and subsequent treatment with UV is inhibited by APC in CHO cells.
An important modification of thrombolytic agents is resistance to plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1). In previous studies, a new truncated PAI-1-resistant variant was developed based on deletion of the first three domains in t-PA and the substitution of KHRR 128-131 amino acids with AAAA in the truncated t-PA. The novel variant expressed in a static culture system of Chinese Hamster Ovary (CHO) DG44 cells exhibited a higher resistance to PAI-1 when compared with the full-length commercial drug; Actylase. In the present study, the truncated-mutant protein was expressed in CHO DG44 cells in 50 ml orbital shaking bioreactors. The final yield of the truncated-mutant in the culture was 752 IU/ml, representing a 63% increase compared with the static culture system. Therefore, these results suggest that using the combined features of a transient and stable expression system is feasible for the production of novel recombinant proteins in the quantities needed for preclinical studies.
A recombinant human erythropoietin (EPO), expressed in Chinese hamster ovary (CHO) cells, is glycosylated at Asn 24, Asn 38, Asn 83, and Ser 126. After release of the N-linked carbohydrate chains by $peptide-N^{4}-(N-acetyl-{\beta}-glucosaminyl)$ asparagine amidase F, the oligosaccharides were analyzed by FACE (Fluorophore-Assisted Carbohydrate Electrophoresis). The O-linked carbohydrate chain was separated by hydrazine, and analyzed by FACE. The monosacccharide composition of recombinant EPO showed man nose, fucose, galactose, N-acetylglucosamine, N-acetylneuraminic acid, and a trace of N-acetylgalactosamine, which are typical monosaccharides in the glycoproteins from the CHO cell. Sequences of N-linked and O-linked oligosaccharides were determined. The structure and composition of oligosaccharides attached to recombinant human EPO, expressed in the CHO cell, are identical to the reported oligosaccharide structure in human EPO isolated from urine.
The adaptive response and cross-adaptive response to sister chromatid exchanges (SCEs) and DNA single-strand breaks (SSBs) in Chinese hamster ovary (CHO)-K$_1$ cells treated with ultraviolet radiation (UV), ethyl methanesuffonate (EMS), or bleomycin (BLM) were investigated. Two assays were used in this study; SCEs and alkaline elution. The pretreatment with low conditioning dose of 2 mM EMS or 1 J/m$^2$ UV decreased the yield of SCEs induced by subsequent treatment with 8 mM EMS, 5 J/m$^2$ UV or 5 $\mu$g/ml BLM. And the pretreatment with low conditioning dose of 1 $\mu$g/ml BLM decreased the yield of SCEs induced by subsequent treatment with 5 $\mu$g/ml BLM or 5 J/m$^2$ UV. The rejoining of DNA SSBs in cells subsequently treated with 2 J/m$^2$ UV, 50 mM EMS or 400 $\mu$g/ml BLM is higher than that only treated with 2 J/m$^2$ UV, 50 mM EMS or 400 $\mu$g/ml BLM. These results suggest that there are the adaptive response and cross-adaptive response to SCEs, and is the adaptive response to the rejoining of DNA SSBs in CHO cells.
The effect of novobiocin (NOV), and inhibitor of topoisomerase II, on ethyl methanesulfonate (EMS)-or bleomycin (BLM)-induced DNA repair synthesis was examined during the cell cycle of Chinese hamster ovary (CHO)-K1 cells. Three assays were employed in this study: cell survival, alkaline elution and unscheduled DNA synthesis. EMS was effective at killing CHO cells in G1 phase, wheras BLM preferentially killed cells in G2 and S phases. EMS induced the much more amount of DNA damage in G1 phase, while BLM induced in G2 phase than the other phases. The both of pre- and post-treatment with BOV inhibitied EMS- or BLM-induced DNA repair synthesis in G1 and G2 phases, and pretreatment with NOV inhibited more effectively than the post-treated group. These results suggested that CHO cells exhibited a differential sensitivity to cell lethality and DNA damage in relation to cell cycle according to used chemical agents, and that DNA topoisomerase II participated in an initial stage of DNA repair.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.