바이오틴을 피부에 전달하기 위해 고압균질기를 사용하여 바이오틴과 세라마이드를 모두 함유하는 에토좀에 대하여 연구하였다. 바이오틴이 주된 성분으로 사용되었으며, 세라마이드 NP는 인지질 이중층의 지지체로 활용되었다. 바이오틴은 수용성 내부에 포획되었고, 세라마이드 NP는 에토좀의 이중층에 흡착되었다. 세라마이드 NP를 함유한 에토좀의 물성을 살펴보면 소포체의 크기는 80~130 nm, 다분산지수는 0.09~0.16, 제타 전위는 -40~-49 mV로 측정되었다. 세라마이드 NP가 없는 소포체의 크기는 124.80±1.46 nm, 다분산지수와 제타전위는 각각 0.088±0.018과 -45.48±1.27 mV이었다. 따라서 세라마이드 NP가 함유된 에토좀은 세라마이드 NP가 없는 에토좀에 비해 소포체의 물리적 특성이 개선됨을 알 수 있었다. 세라마이드 NP를 함유한 에토좀의 피부흡수율은 12시간 후 6.13~14.98%이었으며, 반면에 세라마이드 NP가 없는 에토좀의 피부흡수율은 7.08%이었다. 결론적으로 세라마이드 NP를 함유한 에토좀은 피부흡수 효율을 향상시킬뿐만 아니라 소포체의 안정성에도 긍정적인 영향을 미쳤다.
Ceramide III was prepared by the cultivation of Saccharomyces cerevisiae. Ceramide III was partitioned from the cell extracts by solvent extraction and analyzed by Normal Phase High Performance Liquid Chromatography (NP-HPLC) using Evaporative Light Scattering Detector (ELSD). We experimentally determined the mobile phase composition to separate ceramide III with NP-HPLC. Three binary mobile phases of n-hexane/ethanol, n-hexane/lsoprophyl Alcohol(IPA) and n-hexane/n-butanol and one ternary mobile phase of n-hexane/IPA/methanol were demonstrated. For the binary mobile phase of n-hexane/ethanol, the first mobile phase composition, 95/5(v/v), was step-increased to 72/23(v/v) at 3 min. In the binary mobile phase, the retention time of ceramide III was 7.87min, while it was 4.11 min respectively in the ternary system, where the mobile phase composition of n-hexane/IPA/methanol, 85/7/8(v/v/v), was step-increased to 75/10/15(v/v/v) at 3 min. However, in the ternary mobile phase, the more peak area of ceramide III was observed.
본 연구에서는, 화장품 중 로션, 크림, 클렌저 제형에 적용된 세라마이드엔피(ceramide NP)의 함량을 분석하고자 high-performance liquid chromatography (HPLC)를 이용한 정량 분석 방법을 개발하였다. 분석은 C18 칼럼을 이용하고 이동상은 아세토니트릴과 메탄올을 70 : 30 비율로, 유속은 0.8 mL/min으로 하고 칼럼 온도는 20 ℃로 조건을 설정하였다. 분석 방법은 ICH 가이드라인에 따라 특이성, 직선성, 검출한계(LOD) 및 정량한계(LOQ), 정확성, 정밀성을 분석하여 검증하였다. 분석 방법의 유효성 검증 결과, 검량선의 직선성(R2)은 0.99984로 우수한 직선성을 보였다. 로션, 크림, 클렌저 제형에 대한 정확성은 95.11 ~ 100.48%의 회수율을 통해 확인하였고, 정밀성 분석 결과 상대 표준 편차(RSD)는 0.26% 이하로 나타났다. 검출한계는 0.902 ㎍/mL, 정량한계는 2.733 ㎍/mL로 확인되었다. 이를 통해, 화장품에 적용된 세라마이드엔피의 정량 분석 시, 방해 물질의 영향으로 인해 주피크 분리가 어려운 경우 측정이 가능하게 하여 제품의 품질관리에 도움이 될 것으로 기대된다.
각질층은 각질세포와 세포간지질로 형성되고, 세포간지질의 주성분으로 세라마이드가 있다. 세라마이드는 세포간지질이 라멜라 구조를 형성하는데 중요한 성분 중 하나지만 난용성 물질이기 때문에 피부로의 직접적인 적용은 적합하지 않다. 그래서 약물전달시스템 중 꾸준한 관심을 받는 pluronic lecithin organogel (PLO gel) 제형에 세라마이드를 적용하고자 하였다. 제형에 적합한 오일을 선택하였고, 세라마이드를 함유한 PLO gel을 제조하였다. 편광현미경을 이용하여 액정 형성과 변화를 관찰하였고, 제형의 점탄성 거동을 알아보기 위해 점탄성 분석을 진행하였다. 그리고 제형 내의 구조들을 확인하기 위해 small-angle X-ray scattering (SAXS) 및 wide-angle X-ray scattering (WAXS) 분석을 진행하였다. 결과, 세라마이드를 함유한 PLO gel에서의 세라마이드와 레시틴의 함량비에 따라 액정 형성 여부, 액정의 크기와 안정성에서 차이를 보였다. 또한 점탄성 분석 결과로 제형의 안정성을 알 수 있었고, SAXS/WAXS 분석을 통해 세라마이드를 함유하지 않은 PLO gel은 사방정계 배열의 헥사고날 구조, 세라마이드를 함유한 PLO gel은 사방정계 배열의 라멜라 구조를 갖는 것을 확인하였다.
In this study, skin permeation enhancement was confirmed by designing it to have a structure and composition similarity to the intercellular lipids that improve miscibility with skin by cross-linked lipids poloxamer. The cross-linked lipids poloxamer was synthesized and analyzed by 1H NMR that structure dose had conjugated pluronic with ceramide3. Active component is released by modification of liquid crystal structure because PPO part, large-scale molecule block of pluronic, has hydrophobic nature at skin temperature of $35^{\circ}C$. Conjugated pluronic with ceramide3 was synthesized using Pluronic F127 and p-NPC (4-nitrophenyl chloroformate) at room temperature yielded 89%. Pluronic(Ceramide 3-conjugated Pluronic) was synthesized by reaction of p-NP-Pluronic with Ceramide3 and DMAP. The yield was 51%. This cross-linked lipids poloxamer was blended and dissolved at isotropic state with skin surface lipids, phospholipid, ceramide, cholesterol and anhydrous additive solvent. Next step was preceded by ${\alpha}$-Transition at low temperature for making the structure of Meso-Phase Lamella, and non-hydrous skin analogue liquid crystal using thermo-sensitivity smart sensor, lamellar liquid crystal structure through aging time. For confirmation of conjugation thermo-sensitivity smart sensor and non-hydrous skin analogue liquid crystal, structural observation and stability test were performed using XRD(Xray Diffraction), DSC(Differential Scanning Calorimetry), PM (Polarized Microscope) And C-SEM (Cryo-Scanning Electron Microscope). Thermo-sensitivity observation by Franz cell revealed that synthesized smart sensor shown skin permeation effect over 75% than normal liquid crystal. Furthermore, normal non-hydrous skin analogue liquid crystal that not applied smart sensor shown similar results below $35^{\circ}C$ of skin temperature, but its effects has increased more than 30% above $35^{\circ}C$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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