Examination by scanning electron microscopy and potato-dextrose agar medium showed that the dry seeds of R. raetam were externally free of fungi. When planted in sandy loam soil, the seeds become colonized with eleven soilborne fungal species. The fungi were isolated on cellulose agar, pectin agar and lignin agar media. Aspergillus flavus, A. niger, Penicillium capsulatum and Fusarium oxysporum had broad occurrence and recovered on the three media. The production of hydrolytic enzymes by the isolated fungi depends on the substrate and species. P. capsulatum, P. spinulosum and A. niger had wide enzymatic amplitude and they were able to produce cellulolytic, pectolytic and lignolytic activities on corresponding substrates as well as on seed coat containing media. The lignolytic activities of the isolated species except Chaetomium bostrychods and Trichoderma viride were enhanced on applying the seed coat materials as C-source rather than using lignin. Soaking R. raetam seeds in culture filtrates of the most fungi grown on seed coat supplemented media induced pronounced and distinct stimulating effect on seed germination. The most effective filtrates were those of P. capsulatum, P. spinulosum and Sporotrichum pulverulentum.
In the studies of microbiological utilization of cellulosic wastes, cellulolytic fungi were isolated and screened out. At the first stage, 221 cellulolytic fungi were isolated from different sources such as soils, humus, composts and rotten wood debris by enrichment culture techniques. In the second stage, 36 strains of fungi out of those previously isolated were selected for their cellulase activities estimated by means of filter paper degradation, carboxy methyl cellulose liquefaction and cup method. Activities of C$_1$-cellulase, C$\sub$x/-cellulase and filter paper activity were adopted on the final screening stage and five different strains which are tentatively identified as Aspergillus sp.(strain No. AS-9), Penicillium sp. (strain No. KNI-1-2), Trichoderma, sp. (strain No. KI-7-2, KI-7-5, KI-4-1-1B) were selected for their high potency of C$_1$ and C$\sub$x/-cellulase activities. When rice straw milled and treated with NH$_4$OH was hydrolyzed with the crude enzyme Prepared from the culture broth of Trichoderma sp. (strain No. KI-4-1-1B), saccharification rate was obtained up to 26%.
Sixty three species and 5 varieties belonging to 30 fungal genera were collected from 75 soil samples. Cultivated (29 genera and 58 species + 5 var.), desert (22 and 35 + 2 var.) and saline soil (21 and 41 + 1 var.) fungi were recovered on glucose-, cellulose- and 50% sucrose-Czapek's agar at $28^{\circ}C$. The most common genera were Alternaria, Aspergillus, Emerieella, Fusarium, Mycosphaerella, Nectria and Penicillium. The most prevalent species from the three types of soils on the three types of media were Alternaria alternata, Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. niger, A. terreus, Emerieella nidulans, Fusarium oxysporum, Myeosphaerella tassiana, Nectria haematococca and Penicillium ehrysogenum. Chaetomium globosum was in the top of fungi in producing endo-$\beta$-1,4-glucanases among the 42 tested isolates obtained from soils on cellulose-Czapek's agar. Maximum production of this enzyme by C. globosum obtained after 6 days of incubation at $30^{\circ}C$ with culture medium containing maltose as a carbon source and ammonium nitrate as a nitrogen source and pH initially adjusted to 6.
An experiment was conducted to examine the effects of Cordyceps militaris mycelia on microbial populations and fibrolytic enzyme activities in vitro. C. militaris mycelia was added to buffered rumen fluid with final concentrations of 0.00, 0.10, 0.15, 0.20, 0.25 and 0.30 g/L and incubation times were for 3, 6, 9, 12, 24, 36, 48 and 72 h. At all incubation times, the supplementation of C. militaris mycelia linearly increased the number of total viable and celluloytic bacteria; maximum responses were seen with 0.25 g/L supplementation of C. militaris mycelia. The addition of C. militaris mycelia above the level of 0.20 g/L significantly (p<0.01) increased the number of total and cellulolytic bacteria compared with the control. On the other hand, the response of fungal counts to the supplementation of C. militaris mycelia showed a linear decrease; the lowest response was seen with 0.30 g/L supplementation of C. militaris mycelia. It would seem that C. militaris mycelia possess a strong negative effect on rumen fungi since the lowest level of C. militaris mycelia supplementation markedly decreased fungal counts. Carboxylmethyl cellulase activities were linearly increased by the addition of C. militaris mycelia except at 3 and 9 h incubation times. At all incubation times, the supplementation of C. militaris mycelia linearly increased the activities of xylanase and avicelase. In conclusion, the supplementation of C. militaris mycelia to the culture of mixed rumen microorganisms showed a positive effect on cellulolytic bacteria and cellulolytic enzyme activities but a negative effect on fungi.
Cellulosic substance which plays an important role in carbon cycle is most abundant in the nature world. Some higher fungi are able to digest cellulose directly to satisfy their carbohydrate requirement. Then, in order to investigate the enzymatic components of Lenzites betulina (Fr.) being wood rot, that fungus was collected in Kwangneung area. The carpophore of the fungus was smashed with cool distilled water, extracted and salted out by ammonium sulfate. And then the precipitate was purified by dialysing with visking tube and dissolved with pH 7.8 ammonia water, and the extract was filtrated. The fraction of filtrate was obtained as light brown powder after lyophilization, and determined cellulolytic activity. Cellulolytic potency of Lenzites betulina (Fr.) was 1. 65 unit/ml. The cellulase of Lenzites betulina (Fr.) was stable at below $45^{\circ}C$ and range of pH $4.5{\sim}6.0$ and is completely inactivated at $60^{\circ}C$ for 15 minutes. The optimum condition for the enzymatic reaction was $40^{\circ}C$ and pH 4.0. The enzyme activity was not influenced by the presence of $Ca^{2+}$ and $Fe^{2+}$.
Crude cellulases freshly prepared from cultures of Aspergillus niger, Prnicillum motatum, Trichoderma vride 16273 and Trichoderma viride 16374 were assayed on 4 different substrates including Na-CMC, cellulose powder, starch and sucrose. Enzyme prepared from A. niger contained highly active hydrolytic enzymes of the 4 substrates assayed. P. notatum [yielded relatively lower amount of cellulase but the extracts were also highly reactive on starch and sucrose. Trichoderma viride 16274 yielded very little cellulase and invertase, but the extracts showed a high degree of amylase activity. Trichoderma viride 16374, however, yielded collulase comparable to that of Penicillium notatum, but lower activities of amylase and invertase were seen. Commercial cellulases prepared from Penicillium notatum (cellulase[K]) and Trichoderma viride(cellulase[J]) indicated enzyme activities closely parallel to the crude enzymes freshly prepared from fungus cultures. The optimum pH's of cellulolytic activities of cellulase[K] and cellulase[J] were 4.0 and 5.0 respectively. The optimum temperatures of the cellulolytic activities of cellulase[K] and cellualse[J] were 4.0 and 5.0 respectively. The optimum temperatures of the cellulolytic activities of cellulase [K] and cellulase [J] were $60{\circ}C$ and $50{\circ}C$ respectively. Assuming the average molecular weight of Na-CMC is about 115,000, the Km values of cellulase [K] and cellulase[J] were found to be $3.3{\times}10^{-5}/nM$ and $3.3{\times}10^{-4}/nM$ respectively.
One of the most economically viable processes for the bioconversion of many lignocellulosic waste is represented by white rot fungi. Phanerochaete chrysosporium is one of the important commercially cultivated fungi which exhibit varying abilities to utilize different lignocellulosic as growth substrate. Examination of the lignocellulolytic enzyme profiles of the two organisms Phanerochaete chrysosporium and Rhizopus stolonifer show this diversity to be reflected in qualitative variation in the major enzymatic determinants (ie cellulase, xylanase, ligninase and etc) required for substrate bioconversion. For example P. chrysosporium which is cultivated on highly lignified substrates such as wood (or) sawdust, produces two extracellular enzymes which have associated with lignin deploymerization. (Mn peroxidase and lignin peroxidase). Conversely Rhizopus stolonifer which prefers high cellulose and low lignin containg substrates produce a family of cellulolytic enzymes including at least cellobiohydrolases and ${\beta}-glucosidases$, but very low level of recognized lignin degrading enzymes.
To identify biologically active enzymatic components of the higher fungi in Korea, the dried carpophores of Cryptoderma citrinum was smashed with cool distilled water, extracted, salted out and the precipitate was purified by dialysing with visking tube and dissolved with pH 7.8 ammonia aqua. The fraction of the filtrate was lyophilized to obtain as light brown powder and then cellulase activity was determined. Cellulolytic potency of Cryptoderma citrinum was 750 unit/g. The optimum condition for the enzymatic reaction was pH 4.5 and $40^{\circ}$. The enzyme activity was activated in the presence of $Ca^{2+}$, $Fe^{2+}$ and $Co^{2+}$.
The effect of pH on degradation of paper by some fungi, which able to degrade cellulose, was investigated. Trichoderma koningii, Aspergillus nigerand Penicillium nigulosum were cultured at $28^{\circ}C$ for 16 days in the selective medium (PH3, PH4, PH5, PH6, PH7, PH8, PH9, PH10, PHC) containing paper as substrate. Each paper was pretreated with each pH buffer (pH 3∼pH 10, D.W.)prior to addition to the selective medium. Enzyme activities in the each culture medium were measured spectroph to metrically using C.M.C., Avicel, PNPG as the substrates for endoglucanase, exoglucanase and $\beta$-glucosidase, respectively. In all experimental fungi, the enzyme activities of PH3 and PH9 medium were usually much higher than those of other experimental groups. However in the PH6medium, enzyme activity was lower than other groups. To analyze the concentration and pattern of protein in the each culture medium, the medium was concentrated by lyophilization. The protein concentration of PH3 and PH9 medium were relatively high (T.koningii; 6.31mg, 6,19mg, A.niger; 1.62mg, 1.96mg, P.nigulosum;2.50mg, 2.73mg, respectively), but that of PH6 was relatively low. The protein pattern of each medium was analyzed by using SDS-PAGE and VDS Image Master Analysis Program. The concentrations of bands in the each lane were usually high at lane2 (PH3) and lane8 (PH9) and low at lane5 (PH6). Therefore, the incresed cellulolytic activity of fungus against acidified paper could be result of structural change and deterioration of paper caused by being acidified.
Pokkah Boeng is a serious disease of sugarcane, which can lead to devastating yield losses in crop-producing regions, including southern China. However, there is still uncertainty about the causal agent of the disease. Our aim was to isolate and characterize the pathogen through morphological, physiological, and molecular analyses. We isolated sugarcane-colonizing fungi in Fujian, China. Isolated fungi were first assessed for their cell wall degrading enzyme capabilities, and five isolates were identified for further analysis. Internal transcribed spacer sequencing revealed that these five strains are Fusarium, Alternaria, Phoma, Phomopsis, and Epicoccum. The Fusarium isolate was further identified as F. verticillioides after Calmodulin and EF-$1{\alpha}$ gene sequencing and microscopic morphology study. Pathogenicity assay confirmed that F. verticillioides was directly responsible for disease on sugarcane. Co-inoculation of F. verticillioides with other isolated fungi did not lead to a significant difference in disease severity, refuting the idea that other cellulolytic fungi can increase disease severity as an endophyte. This is the first report characterizing pathogenic F. verticillioides on sugarcane in southern China.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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