The production of cellulase by Pseudomonas sp. LBC505 isolated was under the strict genetic and biochemical control mechanisms such as catabolit repression and induction. These biochemical control reduced cellulase production. Thus LBC505 was mutated to increase enzyme yields. Cells growth and cellulase production were inhibited by the addition of 2-deoxy glucose (2-DG), which is presumed to function as repressor for the selection of high cellulase yielding mutant.
Cellulase production by fed-batch cultivation of Trichoderma reesei Rut C30 with various initial concentrations of Solka Floc in 1 % wheat bran-containing medium was investigated. The cellulase activity and productivity increased with initial Solka Floc concentration up to 5%. When a total Solka Floc concentration of 90 g/l was used for cellulase production, CMC (carboxymethyl cellulose) and FP (filter paper) activities, productivity, and yield were 359.7 U/ml, 30.61 U/ml, 161 FPU $L^{-1}$$h^{-1}$, and 340 FPU $g^{-1}$, respectively. It was important to maintain a high cell concentration during cellulase production to obtain high cellulase activity and productivity. Cellulase powder was prepared by ammonium sulfate precipitation: FP activity was 396.7 U/g and CMC activity was 6481 U/g.
효모탈묵용 cellulase와 xylanase 생산을 위한 조건을 조사한 결과 배지초기 pH, Tween 80, 포자접종량, 질소원의 종류 및 탄소원의 종류에 따라 효소 생산량이 크게 변하였다. Cellulase 생산을 위한 최적조건으로는 pH5.0-6.5, Tween 80 0.02, 포자현탄액($1{\times}10^{7}$/ml) 접종량 0.5-1.0, 질소원으로 면실박, 탄소원으로 옥분을 사용하였을 때 가장 효과적 이었다. 또한, xylanase 생산을 위한 최적조건으로는 pH6.5, Tween 80 0.01%, 질소원으로 corn steep liquor, 탄소원으로는 신문고지를 사용하였을 때 효과적이었으며, 이때 포자현탁액의 접종량은 cellulase 생산의 경우와 동일하였다.한편, cellulasedhk xylanase의 동시생산을 위해서는 플라스크 규모에서 질소원으로 면실박 0.5%, 탄소원으로 신문고지 1.0%와 옥분 2.0%를 첨가하였을 때 효과적이었으며, 이때 생상된 배양약의 cellulase의활성은 6.11~7.22IU/ml, xylanase의 활성은 97.7IU/ml이었다. 그러나 fermentor 규모에서는 동일 배지조성에서 효소생산이 다소 감소하였으며, 특히 xylanase 경우 배양액의 효소활성이 낮아서 이에 대한 보완이 요구된다.
The effect of the addition of wheat bran to the growth medium on the production of cellulolytic enzymes of Trichoderma reesei Rut C30 was studied in batch culture using shake flasks. The activity of cellulase was enhanced by the addition of wheat bran to the cellulase production medium. $KH_2PO_4$-$K_2HPO_4$ buffer was used for pH control during cellulase production. As a result, high cellulase activities were obtained in shake flask culture; a CMC (carboxymethyl cellulose) activity of 125.78 U/ml was obtained from 2% Avicel- and 3% wheat bran-containing medium and an FP (filter paper) activity of 12.85U/ml was obtained from 1% Avicel- and 5% wheat bran-containing medium after 6 days of cultivation.
Taxus wallichiana Zucc. 현탁세포배양에서 항암제 paclitaxel 생합성 연구를 수행하였다. 현탁세포배양에서 exponential phase의 최고 생장 속도는 0.14 $day^{-1}$이었으며 배가시간이 4.96 day이었다. Paclitaxel은 배양초기에 생성되지 않고 exponential phase 말기부터 서서히 생성되어 stationary phase에서도 이어지며 declined phase에서 최고치를 나타내었다. Paclitaxel의 생산을 촉진하기 위하여 elicitor를 사용하였다. 여러 elicitor 중 jasmonic acid와 cellulase가 paclitaxel의 생성을 증가시켰다. Elicitor는 접종과 동시에 투여했을 때 가장 효과가 좋았으며, jasmonic acid와 cellulase의 combination으로 효과가 더욱 증진했는데 각각 투여할 때보다 1.8배 및 3.1배 paclitaxel 생성이 증가되었다.
A fungal strain producing a high level of cellulase was selected from 320 fungal isolates and identified as Aspergillus sp. This strain was further improved for cellulase production by sequential treatments by two repeated rounds of $\gamma$-irradiation of $Co^{60}$, ultraviolet treatment and four repeated rounds of treatment with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. The best mutant strain, Aspergillus sp. XTG-4, was selected after screening and the activities of carboxymethyl cellulase, filter paper cellulase and $\beta$-glucosidase of the cellulase were improved by 2.03-, 3.20-, and 1.80-fold, respectively, when compared to the wild type strain. After being subcultured 19 times, the enzyme production of the mutant Aspergillus sp. XTG-4s was stable.
느타리버섯 균사를 톱밥에 배양할 때 분비되는 여러 가지 extracellular enzyme중 pretense, phenoloxidase, cellulase가 배양조건을 달리하였을 때 변화양상을 요약하면 먼저 톱밥의 종류에 따라서는 참나무톱밥에 비해 포플라톱밥이 specific activity가 높은 경향이었다. 첨가제 종류에 따라서는 밀기울에 비해 미강이 약간 높았으며 혼합비율이 30, 20, 10%순으로 높았다. 수분함량은 3가지 효소 모두 70%에서, 배지의 PH에 따라서 protease는 pH 4와 9, cellulase는 pH6, phonoloxidase는 pH 5와 7, 배양온도는 3가지 효소 모두 $25^{\circ}C$, 목초액 농도에 따른 pretense와 phonoloxidase는 무처리가 처리보다 총활성이 높았으며, cellulase는 0.5%에서 총활성이 가장 높았다.
본 연구에서는 cellulase를 보다 경제적으로 생산하기 위해 다양한 리그노셀룰로스계 폐기물 기질에 대해 cellulase 생산을 검토, 비교하였으며 가능성이 높은 기질에 대해 대량 생산 실험을 수행하였다. 폐 신문지는 0.2% NaOH를 사용하여 전처리한 경우 FPase와 CMCase의 최대활성이 각각 0.25 IU/mL, 4.6 IU/mL로 좋았으나, 폭쇄재 및 당화잔사 등 다른 기질의 최대활성인 0.6∼0.8 IU/mL, 5.5∼6.5 IU/mL에 비해 매우 낮았다. 30 L 발효기를 이용한 cellulase 생산 실험에서 FPase 최대활성은 lactose와 폭쇄재에서 각각 0.75 IU/mL, 0.72 IU/mL로서 당화 잔사의 최대 활성인 0.58 IU/mL에 비해 30% 높았으나 CMCase는 당화 잔사에서 최대활성이 6.3 IU/mL로 폭쇄재를 기질로 하였을 때 보다 15%높았다.
In order to increase the productivity of cellulolytic enzymes, medium composition and culture conditions were studied. When cellulose powder (Avicel) supplemented with rice straw was used as carbon source, productivity of ${\beta}-glucosidase$ was increased by about 3 times compared with the runs with only cellulose powder as a carbon source. In this case no negative effects on the production of CMC enzyme activity and filter paper activity was found. For the production of celulolytic enzymes using T. reesei QM 9414, casitone was found to be a good nitrogen source compared with other sources studied, such as peptone, yeast extract, tryptone, and casein. The highest cellulase activity was attained when 0.3% glucose and 0.01% Tween 80 were supplemented to the standard medium of Rese. An adequate oxygen transfer rate was also found to be important to the cellulase fermentation and about 50 mmole of oxygen/liter/hour supported good cellulase biosynthesis during cellulase fermentation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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