본 연구는 4종의 별의별간(SS) 음료의 간보호 소재로서의 이용 가능성을 조사하고자 항산화능 평가, t-BHP 와 $CCl_4$로 산화적 손상 및 급성 간독성 유도한 in vitro, in vivo 모델을 활용하여 간보호능을 평가하였다. 실험결과, 별의별간 01~04는 $50{\mu}M$ vitamin C 와 유사한 항산화 효과를 나타내었다. HepG2 세포에 t-BHP로 산화 스트레스를 유도한 뒤 나타나는 세포독성에 대해 별의별간 01 및 04에서 농도 의존적인 세포 보호효과를 보였으며, ROS 생성 억제에서 별의별간 01, 03, 04에서 농도의존적인 억제를 나타내었다. 미나리가 혼합된 별의별간 04에 대한 급성 간손상 in vivo 모델을 활용하여 간보호능 검증 결과, 별의별간 04는 $CCl_4$로 증가된 혈중 ALT, AST의 유의적 감소, 간 조직중 증가된 MDA 함량 감소 및 감소된 GSH의 유의적 증가를 나타내었다. 또한, 혈청 및 간 조직에서 증가된 중성지방과 콜레스테롤을 유의적으로 감소시켰다. 이러한 결과를 종합하며, 별의별간 04는 in vitro 및 in vivo 모델에서 산화적 손상에 대해 간보호 효과를 나타내었다.
These studies were carried out to observe the effect of Aqua-acupuncture with Woolgum extract on the recovery from liver injury of rats. The liver injury of rats induced with 0.5ml/200g carbon tetrachloride. The Aqua-acupuncture with Woolgum extract solution inserted into corresponding locus of the Kansu(BL18.) in Rats. Experimental group was divided into 4 groups: Normal group, $CCI_4$-intoxicated group, Saline treated group after $CCI_4$-intoxicated and Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. Biochemical assays for each serum enzyme activity of GOT, GPT, LDH, total protein, triglyceride, albumin, WBC, neutrophils, lymphocyte were performed. The results were as follows : 1. GOT was decreased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. In GOT activity, the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated showed higher level significant compared with the saline aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 2. GPT was decreased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated after $CCI_4$-intoxicated. In GOT activity, the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated showed higher level significant compared with the saline aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 3. LDH was decreased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 4. Total protein increased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 5. Albumin was increased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. The saline aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated was not recognized as compared with $CCI_4$-intoxicated group. 6. Triglyceride was increased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 7. WBC was decreased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. In WBC count, the Woolgum aqua-acupuncture higher level significant compared with the saline aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 8. Lymphocyte was decreased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. 9. Neutrophils was increased with statistical significance in the Woolgum aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated. The saline aqua-acupuncture treated group after $CCI_4$-intoxicated was not recognized as compared with $CCI_4$-intoxicated group. From above results, it is suggested that the Woolgum aqua-acupuncture had significant effects on the injury induced by $CCI_4$.
피리딘, ${\beta}$-피코린 및 3,5-루티딘과 요오드사이에 형성되는 전하이동착물을 사염화탄소 용액에서 자외선분광광도법을 사용하여 연구한 결과 $C_5H_5N{\cdot}I_2$, ${\beta}-C_5H_4(CH_3)N{\cdot}I_2$ 및 3,5-$C_5H_3(CH_3)_2N{\cdot}I_2$ 형의 1:1 분자착물이 형성됨을 알았다. 이들 착물생성에 대한 흡수최대는 온도가 상승함에 따라 blue shift되므로 이를 고려하여 각 온도에서의 평형상수를 구했다. 이 값으로부터 이들 착물생성에 대한 ${\Delta}H$, ${\Delta}G$및 ${\Delta}S$ 이 열역학적 파라미터를 산출하였다. 이 결과 착물의 상대적 안정도가 다음 순서로 증가함을 알수가 있었다. Pyridine < ${\beta}$-Picoline < 3,5-Lutidine. 이러한 결과는 dipole moment, steric hindrance effect 및 positive inductive effect에 의한 electron density의 증가 때문인 것으로 설명할 수 있었다. 그리고 polymethylbenzene-iodine CT-complex와도 비교 검토하였다.
간 질환 개선용 영양보충제로 시판되고 있는 글루타티온 고함유 Saccharomyces cerevisiae FF-8 효모 균체(FF-8) 급여가 사염화탄소 및 알코올-유발 흰쥐 조직 스트레스에 대하여 억제효과가 있다는 것을보고한 바 있다. 본 실험에서는 글루타티온 고함유 효모 FF-8 급여에 의한 오르트산-유발 지방간에서 각 조직 중 과산화지질 농도와 간 조직 내 미네랄 성분과의 관계를 검토하였다. 체중 증가량은 정상군은 두 실험군에 비해 증가하였으나, 오르트산 급여 실험군들에서는 체중 증가량이 5% 수준에서 유의적으로 감소하였다. 각 조직 중량은 오르트산 급여군에서 간 조직에서 5% 수준에서 유의적으로 증가하였고 FF-8 투여에 의해 다소 감소하는 것으로 나타났다. 한편, 신장 및 비장에서도 오르트산 급여에 의해 5% 수준에서 유의적으로 감소하였다. 간 조직 중의 과산화지질 농도는 오르트산 급여군에서 5% 수준에서 유의적으로 증가하였고, FF-8 균체 급여군에서 감소하였다. 이때 간 조직 중의 글루타티온 농도도 유사한 경향을 보였다. 천연 항산화 미네랄로 알려진 간 조직 중의 아연 농도는 정상군에 비해 오르트산 유발 지방간에서 감소하였고, FF-8 균체 급여에 의해 다소 증가되는 것으로 나타났다. 이상의 실험 결과에서 오르트산-유발 지방간에서 지질과산화 농도의 증가는 간 조직내 천연 항산화 물질인 글로타티온과 아연 농도의 현저한 감소에 기인하였고, 항산화 물질인 글루타티온을 고함유한 S. cerevisiae FF-8 효모 균체 동시 급여에 의해서는 글로타티온과 아연 농도의 증가에 의해 과산화지질 농도가 경감됨으로서 오르트산 유발 산화스트레스를 경감시키는 효과가 있는 것으로 확인되었다.
본 연구는 $CCI_4$를 투여한 흰쥐에서 인진쑥과 동충하초를 서로 다른 혼합비율로 투여했을 때 간 손상에 대한 생리활성 기능을 조사하기 위해 혈청 및 지질대사에 미치는 영향을 측정하였다. 사염화탄소의 투여는 간독성을 나타내 간의 무게 및 ALT, AST 수준을 증가시켰으며 이는 인진쑥과 동충하초의 투여에 의해 개선되며 인진쑥과 동충하초를 병행 투여 시 더욱 효과적인 것으로 나타났다. 사염화탄소 투여로 인해 증가된 혈청 콜레스테롤과 중성지방은 인진쑥, 동충하초의 투여로 저하되었으며 혈청 중성지방은 인진쑥과 동충하초를 동량으로 투여한 군에서 유의적으로 낮게 나타났고, 혈청 콜레스테롤은 전체 인진쑥, 동충하초 투여군에서 모두 유의적으로 감소되었으며 인진쑥과 동충하초를 병행 투여하는 경우 더 효과적인 것으로 나타났다. 또한 동맥경화지수는 사염화탄소의 투여 시 정상식이군보다 유의적으로 증가되었으나 인진쑥, 동충하초의 투여로 감소되었으며 4% 인진쑥과 2% 동충하초 병행 투여가 동맥경화지수를 낮추는데 가장 효율적인 것으로 사료된다. 사염화탄소를 투여한 흰쥐의 간장 내 총 지질과 총 콜레스테롤 및 중성지방의 함량은 정상군보다 증가하였다. 인진쑥, 동충하초의 투여는 사염화 탄소 투여로 높아진 중성지방과 콜레스테롤을 감소하는 효과를 보였으며 4% 인진쑥과 2% 동충하초를 병행 투여 시가장 효과적인 것으로 나타났다. 본 연구 결과에 의하면 인진쑥과 동충하초의 투여는 사염화탄소로 유발된 간 독성을 저하시키며 혈청과 간지질 대사를 개선하는 효과가 있는 것으로 사료되며 간 기능 개선과 지질대사 개선효과를 가지고있는 인진쑥과 동충하초를 단독으로 투여하는 것보다 병행 투여하는 것이 더 효과적이며 그 혼합비율이 4% 인진쑥과 2% 동충하초에서 가장 효율적으로 나타났으나 혼합비율에 대해서는 앞으로 지속적인 연구가 필요하다고 사료된다.
$Nokyangbotang^{TM}$ (NYBT) is a kind of powerful food for health and have been drunk at a oral dose of 80 ml (99.5 mg) three times per day: It has not been well studied about the anti-fatigue and hepatoprotective activity. In this experiments, we evaluated pathophysiologically the effect of NYBT on swimming time in mouse and hepatoprotective activity in rats intoxicated with carbon-tetrachloride. NYBT was nontoxic in orally acute toxicity test ($LD_{50}$, 320 ml/60 kg): a nontoxic food in more four times of one-shoot dosage (80 ml) to human. Weight-loaded forced swimming test was carried out to measure the swimming time of mice with a 4% load of body weight in plastic cylinder (diameter $10{\;}cm{\;}{\times}{\;}height{\;}20{\;}cm$) on water bath at $25^{\circ}C$, and the anti-fatigue activity represented the ratio of swimming time of experimental group to that of control group. NYBT had dose-dependent anti-fatigue activity Mice administered NYBT at a dose of 320 ml/60 kg once daily for 5 days could swim about two times more than control. Hepatoprotective activities of NYBT were examined by the determination of malonedialdehyde (MDA) and pathological survey in liver and liver function test of rat intoxicated with $CCl_4$ at i.m. dose of 2 ml/kg once daily for 7days. NYBT decreased dose-dependently thiobarbituric acid reactive substance: Oral administration of NYBT at a dose of 20 ml/60 kg was $38.51{\;}{\pm}{\;}3.02$ nmol MDA/g of tissue, that of 80 ml/60 kg was $33.76{\;}{\pm}{\;} 1.84$ nmol MDA/g of tissue, and that of 320 ml/60 kg was $32.87{\;}{\pm}{\;}1.90$ nmol MDA/g of tissue as compared with control group ($43.61{\;}{\pm}{\;}2.85$ nmol MDA/g of tissue). All rats administered NYBT at a dose of 320 ml/60 kg were survival as compared with 40% survival of control animals, and GPT activity of rats administered NYBT at a dose of 80 ml/60 kg was decreased as compared with control. In histopathological survey, NYBT improved slightly the fatty changes of hepatocytes around centrilobular area. These results suggest that NYBT has anti-fatigue and hepatoprotective activity in rats and mice.
먹는샘물과 용기 중에 phthalate 및 adipate를 분석하였다. 시료 전처리법으로서 먹는샘물의 경우는 methylene chloride를 용매로 하여 액체-액체 추출법을 사용하였고, 고체 시료는 속 슬렛 추출과 실리카겔 정제법을 사용하였다. 추출 후 농축한 다음 GC-MS (SIM)로 정량하였다. 추출물의 chromatogram은 방해물질이 없고 각 피크는 분리가 잘 되었다. 물 시료의 경우 $0.1{\sim}10{\mu}g/L$의 농도범위에서 $r^2$값이 0.996 이상의, 용기시료의 경우 $1{\sim}1,000{\mu}g/Kg$의 농도범위에서 $r^2$값이 0.994이상의 좋은 직선성을 보였다. 물 시료 중에서 검출한계는 $0.002{\sim}0.010{\mu}g/L$의 범위를 용기 시료 중에서는 $0.01{\sim}0.02{\mu}g/Kg$의 범위를 보였다. 먹는샘물 5 종류, PET병 2 종류, 라벨 2 종류, 병뚜껑 2 종류 그리고 접착제 2 종류를 위의 방법에 따라 분석하였다. 그 결과 국내산 먹는샘물 중에서는 대부분 불검출 되었고 외국산 먹는샘물에서 총 프탈레이트 $1.2{\mu}g/L$의 농도가 검출되어 외국의 경우 긴 유통기간 때문에 높은 것으로 판단되나 인체에 유해한 정도의 농도는 아니었다. 용기 재질 분석에서도 국내산 PET 용기에서 (약 0.55 mg/Kg) 보다 외국산의 경우가 (약 1.2 mg/Kg) 비교적 높은 농도로 검출되었다. 한편 라벨이나 접착제에서는 비교적 높은 농도로 프탈레이트가 함유되어 있는 것으로 나타났다. 본 연구결과 먹는샘물과 용기 중에서 프탈레이트의 분석은 공시료 분석값을 정확히 빼주는 것이 필요하며 PET 시료채취 시에는 라벨과 본드를 제외시켜야 정확한 분석값을 구할 수 있는 것으로 나타났다.
사염화 탄소에 의한 과산화 지질 증가 및 간 손상에 calcium 및 Kupffer cell의 역할 및 calcium channel blocker의 간 손상에 대한 방어 효과를 연구하였다. 사염화 탄소는 (1 gm/kg, ig) 간의 malondialdehyde (nmole/gm liver) 및 혈중 AST와 ALT (lU/ml) 활성도의 현저한 증가를 나타내었다. 고 농도의 Retinol (250,000U/kg/day)로 인한 Kupffer cell의 활성 증가는 사염화 탄소에 의한 간 과산화 지질 증가 및 간 손상에 상승 작용을 나타낸 반면, $GdCl_3$ 전처리는 $CCl_4$로 인한 ALT의 증가를 감소시켰다. 한편 Retinol 처치군에 Diltiazem (10mg/kg/day)을 병행하여 처치한 결과, 사염화 탄소에 의한 혈중 AST 및 ALT의 증가를 Retinol 단독 처치군에 비하여 현저하게 억제시킬 수 있었다. 이 결과들이 Retinol 혹은 Diltiazem의 투여에 의한 사염화 탄소가 cytochrome P450에 의한 대사 활성 또는 GSH와 관련된 항산화 기전에 미치는 영향에 기인한 것인가를 규명하기 위하여 cytochrome P450, cytochrome P4502El 활성도, GSH reductase 및 GSH peroxidase 활성도를 측정하였다. 그 결과, Retinol 및 Diltiazem의 전처리는 이들 효소의 활성도에 미치는 영향은 대조군에 비하여 유의한 차이가 없었다. 이상의 실험 결과를 종합하여 보면, 사염화 탄소의 투여에 의한 간 손상은 세포내 calcium의 증가를 가져오며, 이는 이차적으로 Kupffer cell을 활성화 시켜 이미 손상된 간세포의 독성을 증가시켰으며, calcium channel blocker인 Diltiazem의 투여는 사염화 탄소의 간독성을 현저하게 감소시키는 효과를 나타내었다.
The present experiment was performed in order to know the therapeutic effect of laserpuncture and aquapuncture with methionine on recovery in artificially induced hepatic damaged rats by carbon tetrachloride. The animals were divided into control, laserpuncture and aquapuncture groups. The changes of serum enzyme activities(ALT and AST), serum total protein contents, protein fractions(ALB and GLB) and A/G ratio were examined before and after application of laserpuncture and aquapuncture. In change of serum ALT activity, recovery with treatment in laser and aquapuncture groups was more rapid than that of control. The significant decreased value was shown on 3rd(P < 0.05) and 7th day(P < 0.01) after treatment in laserpuncture group and on 7th day(P < 0.05) after treatment in aquapuncture group. In addition, significance was detected on 2nd day(P < 0.05) between laserpuncture and aquapuncture groups. In change of serum AST activity, recovery with treatment in laserpuncture and aquapuncture groups was more rapid than that of control. The significant lower values on 7th day(P<0.01) in aquapuncture groups. In addition, significant low value was detected on 7th day(P < 0.05) in aquapuncture group comparing with that of laserpuncture group. The change of serum TP contents showed similar pattern in control, laser and aquapuncture groups. The significances were detected on 7th day(P < 0.05) in both experimental groups. In addition, significant high value was detected on 2nd day(P < 0.05) in laserpuncture group comparing with that of aquapuncture group. The change of serum ALB content with treatment in laser and aquapuncture groups was more rapid than that of control. The significant high value was shown on 2nd(P < 0.01), 5th(P < 0.05) and on 7th day(P < 0.01) in laserpuncture group. In addition, significant high value was detected on 3rd day(P<0.01) only in aquapuncture group comparing with laserpuncture group. The change of serum GLB content showed similar pattern among groups. The significant low values were detected on 2nd day(P < 0.05) in aquapuncture group. In addition significant high value was detected on 5th day(P < 0.01) only in laserpuncture group comparing with that of aquapuncture group. In change of A/G ratio laser and aquapuncture groups showed higher values than that of control. The significant high values were detected on 1st day(P < 0.Of) and 2nd day(P < 0.05) in laserpuncture group, and on 1st day(P < 0.05) and 2nd day(P < 0.01) in aquapuncture group. In addition, significant high value was detected on 5th day(P < 0.05) in aquapuncture group comparing with that of laserpuncture. Considering above findings collectively, it was considered that both laserpuncture and aquapuncture were effective; aquapuncture was more effective than laserpuncture for recovery of hepatic damage.
This experiment was carried out to establish a proper method of indocyanine green(ICG) excretion test for a applicable liver function test in dogs. The half life(T1/2), fractional clearance rate(KICG) and retention rate after injection of ICG with or without administred carbon tetrachloride($CCl_4$) were also invested. The results obtained were as follows ; 1. The maximum absorbance of ICG in plasma was at 810nm. 2. Half life and fractional clearance rate when administered 0.25 and 0.50mg of ICG per Kilogram body weight were $6.33{\pm}0.58$ minutes and $0.11{\pm}0.99$/minute in the former, $10.01{\pm}1.0$ minutes and $0.07{\pm}0.007$/minute in the latter, respectively. The ICG removal rate was exponentially linear for the first 15 minutes after injection both, of 0.25 and 0.50mg of ICG. 3. One day following the administration of $0.0042m{\ell}\;CCl_4$ kilogram body weight which injected 0.50mg of ICG, half life was more longer and fractional clearance rate was significantly reduced than that of ICG single injection. 4. Plasma retention rate when 15, 30, 45 minutes after injection dose of 0.25 and 0.50mg ICG per Kilogram body weight, $14.7{\pm}4.8$, $5.1{\pm}3.1$, $2.6{\pm}1.6%$ in the former, $26.9{\pm}1.8$, $11.1{\pm}2.4$, $4.8{\pm}1.3%$ in the latter, respectively. However, after administration of $CCl_4$, plasma retention rate of ICG at a dose of 0.50mg, it was $39.3{\pm}0.9$, $16{\pm}2.9$, $10.7{\pm}0.1%$, respectively. 5. Plasma enzyme(AST, ALT, r-GTP) activities administered with $CCl_4$ were increased, but there was no change which injected any dose of single ICG injection. From these results, ICG excretion test to dog is applicable to evaluation of liver function in both clinical and research.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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