The purpose of this study is to characterize canine mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow (BM) for use in research on the applications of stem cells in canine models of development, physiology, and disease. BM was harvested antemortem by aspiration from the greater tubercle of the humerus of 30 normal beagle dogs. Canine BM-derived MSCs were isolated according to methods developed for other species and were characterized based on their morphology, growth traits, cell-surface antigen profiles, differentiation repertoire, immunocytochemistry results, and neurotrophic factor expression in vitro. The canine MSCs exhibited a fibroblast-like morphology with a polygonal or spindle-shaped appearance and long processes; further, their cell-surface antigen profiles were similar to those of their counterparts in other species such as rodents and humans. The canine MSCs could differentiate into osteocytes and neurons on incubation with appropriate induction media. RT-PCR analysis revealed that these cells expressed NGF, bFGF, SDF-1, and VEGF. This study demonstrated that isolating canine MSCs from BM, stem-cell technology can be applied to a large variety of organ dysfunctions caused by degenerative diseases and injuries in dogs. Furthermore, our results indicated that canine MSCs constitutively secrete endogenous factors that enhance neurogenesis and angiogenesis. Therefore, these cells are potentially useful for treating dogs affected with various neurodegenerative diseases and spinal-cord injuries.
Sang Eun Kim;Jun Sung Lee;Keon Bong Oh;Jeong Ho Hwang
한국동물생명공학회지
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제38권4호
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pp.199-208
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2023
Background: Canine induced pluripotent stem cells (iPSCs) are an attractive source for veterinary regenerative medicine, disease modeling, and drug development. Here we used vitamin C (Vc) to improve the reprogramming efficiency of canine iPSCs, and its functions in the reprogramming process were elucidated. Methods: Retroviral transduction of Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc (OSKM), and GFP was employed to induce reprogramming in canine fetal fibroblasts. Following transduction, the culture medium was subsequently replaced with ESC medium containing Vc to determine the effect on reprogramming activity. Results: The number of AP-positive iPSC colonies dramatically increased in culture conditions supplemented with Vc. Vc enhanced the efficacy of retrovirus transduction, which appears to be correlated with enhanced cell proliferation capacity. To confirm the characteristics of the Vc-treated iPSCs, the cells were cultured to passage 5, and pluripotency markers including Oct4, Sox2, Nanog, and Tra-1-60 were observed by immunocytochemistry. The expression of endogenous pluripotent genes (Oct4, Nanog, Rex1, and telomerase) were also verified by PCR. The complete silencing of exogenously transduced human OSKM factors was observed exclusively in canine iPSCs treated with Vc. Canine iPSCs treated with Vc are capable of forming embryoid bodies in vitro and have spontaneously differentiated into three germ layers. Conclusions: Our findings emphasize a straightforward method for enhancing the efficiency of canine iPSC generation and provide insight into the Vc effect on the reprogramming process.
Mesenchymal stem cells (MSCs) are often known to have a therapeutic potential in the cell-mediated repair for fatal or incurable diseases. In this study, canine umbilical cord MSCs (cUC-MSCs) were isolated from umbilical cord matrix (n = 3) and subjected to proliferative culture for 5 consecutive passages. The cells at each passage were characterized for multipotent MSC properties such as proliferation kinetics, expression patterns of MSC surface markers and self-renewal associated markers, and chondrogenic differentiation. In results, the proliferation of the cells as determined by the cumulative population doubling level was observed at its peak on passage 3 and stopped after passage 5, whereas cell doubling time dramatically increased after passage 4. Expression of MSC surface markers (CD44, CD54, CD61, CD80, CD90 and Flk-1), molecule (HMGA2) and pluripotent markers (sox2, nanog) associated with self-renewal was negatively correlated with the number of passages. However, MSC surface marker (CD105) and pluripotent marker (Oct3/4) decreased with increasing the number of subpassage. cUC-MSCs at passage 1 to 5 underwent chondrogenesis under specific culture conditions, but percentage of chondrogenic differentiation decreased with increasing the number of subpassage. Collectively, the present study suggested that sequential subpassage could affect multipotent properties of cUC-MSCs and needs to be addressed before clinical applications.
Hips of the Golden and Labrador retrievers in Korea were evaluated with the University of Pennsylvania Hip Improvement Program (PennHIP) and the severity of joint laxity and degenerative joint disease (DJD) were compared to the PennHIP database. The distraction index (DI) of domestic Golden and Labrador retrievers was significantly higher than the DI of the PennHIP database. In the two breeds, the prevalence of DJD increased according to the DI. However, the severity of DJD did not show a positive correlation with the DI. Overweight dogs and dogs kept indoors showed more severe DJD and more prevalence of clinical signs. This report is thought to be the first case presentation of a large population of Golden and Labrador retrievers in Korea and the findings are representing the overall level of canine hip dysplasia (CHD) of domestic Retrievers, as the PennHIP method was not available in Korea until 2001. We can respect that the stock of retrievers can have a tighter hip joint through control of CHD using an accurate diagnostic method keyed to a phenotype especially concern for joint laxity using PennHIP method and an organized screening program. The clinical manifestation of dysplastic dog can be reduced through control of bodyweight and the environment with regular monitoring the hips with concern for joint laxity using PennHIP method.
Background: Canine distemper virus (CDV) infection results in high morbidity and mortality in dogs. There has been no report about Isolation of Korean CDV since 1980 in Korea. Objectives: To investigate the biological properties and the genetic characterization of Korean CDV. Methods: Vero cells expressing dog signaling lymphocyte activation molecule (dSLAM) gene named as Vero/dSLAM were used to isolate CDV using 17 samples. Diagnostic methods such as cytopathic effects, immunofluorescence assay, peroxidase linked assay, electron microscopy, rapid immunodiagnostic assay, and reverse transcription polymerase chain reaction were used to confirm the Korean CDV isolate as a CDV. The genetic analysis was performed through cloning and sequencing of hemagglutinin gene of CDV isolate. Results: A virus propagated in Vero/dSLAM cell was confirmed as CDV (CD1901 strain) based on the above methods. The CD1901 strain showed the highest viral titer (105.5 50% tissue culture infectious dose [TCID50]/mL) in the Vero/dSLAM cells at 4 days post inoculation, but did not form a fork on chorioallantoic membrane of 7-day-old egg. Ribavirin, a nucleotide analogue anti-viral agent, inhibits moderately the Korean CDV propagation in the Vero/dSLAM cells. The nucleotide and amino acid sequences of the H gene of CD1901 strain were compared with those of other CDV strains. The CD1901 strain belonged to Asia 1 group and had the highest similarity (99.9%) with the BA134 strain, which was isolated in China in 2008. Conclusions: We constructed successfully Vero/dSLAM and isolated one Korean CDV isolate (CD1901 strain) from a naturally infected dog. The CD1901 strain belonged to Asia 1 genotype.
The techniques of IVM, IVF and IVC of canine oocytes may provide useful information for gamete salvage programs and the conservation of endangered canidae. This investigation has been made to determine the efficiency of in vitro maturation (IVM) as a basic experiment to study the development of canine oocytes after in vitro fertilization (IVF). The rate of oocytes developing to the Mil stage was higher in the hormone treated group (10 IU/ml hCG+eCG, 14.7%, p<0.05) than in the control group (0 IU/ml hCG+eCG, 10.0%). The monospermy and pronuclear rates of canine oocytes were investigated after caffeine treatment on IVF. Canine oocytes were fertilized in the Fert-TALP medium supplemented with 0, 10, 20 or 30 mM caffeine (Fert I, Fert II, Fert III or Fert IV, respectively). The highest pronuclear formation rate was obtained in the Fert I for 24 h IVF (6.7%, 6/89). Therefore, it is believed that unlike in other mammals, caffeine in canine IVF does not increase the efficiency of fertilization rate, and is not an important factor.
The goal of this study was to measure immunoglobulin G4 (IgG4) concentrations and to evaluate the significance of these values in the management of canine pancreatitis. The medical records of 24 dogs that visited the Veterinary Medical Teaching Hospital between December 2016 and June 2018 were retrospectively reviewed to identify dogs that had been diagnosed with pancreatitis. The serum C-reactive protein and serum IgG4 concentration in the affected dogs were highly increased compared to the healthy group. Particularly, serum IgG4 measured significantly higher in dogs with pancreatitis and concurrent immune-mediated disease (p < 0.05). In conclusion, increased serum IgG4 concentrations are a characteristic finding in dogs with pancreatitis. The results of this research indicate that an elevation in IgG4 has the potential of being used as a tool for the diagnosis of pancreatitis and concurrent immune-mediated disease.
Siewert-Kartagener's syndrome, a type of primary ciliary dyskinesia, is a complex disease comprising situs inversus, rhinosinusitis, and bronchiectasis. Situs inversus totalis is a condition in which all organs in the thoracic and abdominal cavities are reversed. Furthermore, primary ciliary dyskinesia, an autosomal genetic disease, may coexist with situs inversus totalis. Reports on Siewert-Kartagener's syndrome in veterinary medicine are limited. We report a rare case of primary ciliary dyskinesia with Siewert-Kartagener's syndrome in a dog, concurrently infected with canine distemper virus and type-2 adenovirus. This case highlights that situs inversus totalis can cause primary ciliary dyskinesia, and concurrent infections are possible.
Atopic dermatitis, caused by immune hyper-responsiveness, is wide spread in humans as well as in the dogs, especially in industrialized condition. Pet dogs are generally exposed to the same environment as their owners, and a significant portion of these animals are also known to suffer from this allergic disease. However, diagnosis and treatment methods of atopic dermatitis in animals have not been well established. We explored the possibility of using recently developed PG102 for the treatment of atopic dermatitis in the canine population. PG102 is a water soluble extract prepared from Actinidia arguta, and has been shown to produce significant therapeutic effect in variable allergy animal models. After oral administration of PG102 at a dose of 12.5 mg/kg daily for 4 weeks, severity of disease was greatly improved. IgE is one of representative members used to diagnose allergic diseases in humans. However, it is not well established whether there is any correlation between the serum level of IgE and atopic dermatitis. Our data indicated that dogs diagnosed to have atopic dermatitis contained higher level of serum IgE than the normal dogs and that treatment of dogs with PG102 significantly lowered the serum level of IgE. Taken together, this study demonstrated that PG102 treatment yielded significant amelioration of canine atopic dermatitis and down-regulation of serum IgE and that the serum level of IgE can be used as a convenient member for diagnosis of atopic dermatitis in dogs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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