Objectives : This study was carried out to investigate the inhibitive effects of cotton plant sectional extracts in cancer cell lines, Calu-6(human, Caucasian, lung, adenocarcinoma) and MCF-7(human, Caucasian, breast, adenocarcinoma). The incidence of cancer has been increasing even in korea due to the change of dietary life and westernization and becoming conspicuous as the disease threatening health. But cancer treatment have not been fully effective against the high incidence or low survival rate of most cancer. Methods : Calu-6 and MCF-7 cells were cultured and seeded in cell culture plates, respectively. And sectional extracts of cotton plant were treated to MCF-7 cells. Results and Conclusion : Sectional extracts of cotton plant showed no anti-proliferative effect on MCF-7 cells, but root and stem extracts showed strong anti-proliferative effects on Calu-6 cells. Fruit, leaf and flower extracts also showed anti-proliferative effects on Calu-6 cells but not so much like root and stem extracts. But seed extract showed no anti-proliferative effect on Calu-6 cells.
Background : Tissue inhibitor of metalloproteinase is a natural inhibitor that counteracts pro teolytic enzymes essential to the invasion of cancer cell. Whether or not TIMP-2 gene transfer via adenovirus could inhibit the invasion of lung cancer cell iη vitro was evaluated for the future purpose of gene therapy against lung cancer. Methods : Recombinant adenovirus-TIMP-2(Ad-TIMP-2) was generated by homologous recombination after pACCMV-TIMP-2 and pJM17 were cotransfected into 293 cell by standard calcium phosphate coprecipitate method. Calu-6, one of the most invasive lung cancer cells, was transduced with Ad-TIMP-2 or Ad-$\beta$gal. Anchorage-independent growth and invasiveness were assessed by soft agar clonogenicity assay and invasion assay using two-chamber, well divided by matrigel. Results : Ad-TIMP-2 transduced calu-6 cells produced biologically active TIMP-2 more than 50 times more than parental calu-6. TIMP-2 gene transfer did not suppress the in vitro tumorigenicity. However, two chamber well assay revealed that Ad-TIMP-2 transduction reduced the invasiveness of calu-6 efficiently (12% compared with parental cell) even at low 10moi. Conclusion : Even though TIMP-2 gene transfer did not inhibit in vitro tumorigenicity, it did inhibit invasion of lung cancer cell in vitro. The inhibition of invasion by Ad-TIMP-2 may be a useful strategy for the treatment of lung cancer.
Objectives: To elucidate the antitumor activities of Hang-Am-Dan (HAD), we investigated the anti-proliferative effects and related mechanisms of HAD, the main ingredients such as Cordyceps Militaris and Santisigu Tuber, and its main effective components cordycepin and colchicin, respectively. Methods: We cultivated Calu6 and MCF-7 cells and gave them phosphate-buffered saline extracts of HAD, each ingredient of HAD, and the main effective components of each ingredient. After these processes, we performed MTT assay, BrdU assay, TUNEL assay, SDS-PAGE and Western blot analysis and observed the results. Results: The survival rate of these two cancer cells in HAD were 34-38%. The survival rate in extract of Cordyceps militaris (ECM) and extract of Santisigu tuber (EST) were both about 50%. Cordycepin showed decreased survival rate in both cancer cells, 32% and 89%. Colchicin also showed decreased survival rate, 30% and 16%. We observed that all of the cancer cells got apoptotic bodies after adding the extracts and they have more apoptotic bodies when they were exposed to more extracts. The expression of caspase-3 was increased in Calu6 cell lines treated with the ECM, cordycepin and colchicin. The expression of p53 and p21 were increased in the MCF-7 cell lines treated with the ECM and cordycepin. Conclusions: HAD showed cytotoxic activities on the two kinds of human cancer cell lines, Calu6 and MCF-7. Additionally, HAD and its main ingredients caused a dose-dependent inhibition of cell proliferation and induced the apoptotic cell death.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
/
v.34
no.5
/
pp.613-618
/
2005
This study was carried out to examine the effects of gamma irradiation on the cytotoxicity and multidrug-resistance reversing activity of methanol extracts from Coix lachryma-jobi L. var. me-yuen Stapf seed. The seed was irradiated with doses of 1, 4, 8, 16, 32 and 64 Gy of the gamma radiation, and then extracted by methanol. The extracts were examined for cytotoxicity on the human cancer cell lines, MCF-7 (human breast adenocarcinoma pleural effusion), Calu-6 (human pulmonary carcinoma) and SNU-601 (human gastric carcinoma) cells, and investigated for multidrug-resistance reversing activity using drug sensitive AML-2/WT and multidrug-resistant AML-2/D100 cells. The growth inhibitory activity of irradiated seed extracts on human cancer cell lines was higher than that of the control. In the case of Calu-6 cell line, the effect of cytotoxicity was observed in the extracts of 4, 8 and 16 Gy. $IC_{50}$ value in the MCF-7 cell line was measured in the only 8 Gy extract. And in the SNU-601 cell line as Calu-6, the effect of cytotoxicity was observed in the extracts of 4, 8 and 16 Gy. But the extracts of gamma-irradiated seed over 32 Gy showed little growth inhibitory effect against human cancer cell lines. In this result, 8 Gy extract had significant growth inhibitory in all human cancer cell lines $(Calu-6:\;633\;{\mu}g/mL,\;MCF-7:\;653\;{\mu}g/mL\;and\;SNU-601:\;683\;{\mu}g/mL)$. The extracts of 4, 8 and 16 Gy strongly potentiated vincristine cytotoxicity in AML-2/D100 cells. The reversal fold (RF) of 4, 8 and 16 Gy extracts was 1.7, 1.8 and 1.6, respectively. But their cytotoxicities to both sensitive AML-2/WT and resistant AML-2/D100 cells were in the same order of magnitude. These results indicate that the above samples would contain some principles which have cytotoxicity and multidrug-resistance reversing activity. Irradiation technology can be applied to promote physiological activities of medicinal plant seeds.
Park, Jung-Suk;Chon, Sang-Uk;Moon, Eun Woo;Jeong, Cheol-Yun
Food Science and Preservation
/
v.23
no.4
/
pp.553-559
/
2016
The purpose of this study was to determine the content of phenolics and various anthocyanin compounds, and antioxidant and anticancer activities of the extracts from pomergranates, which were produced in two different regions including Goheung, Korea and California, USA. These pomergrantes were divided into juice, pericarp, and seed parts and each part was extracted with 95% methanol. Content of total phenolics [mg chlorogenic acid equivalents/kg DW] was highest in pericarp, followed by juice and seeds from pomergrantes in both regions. The anthocyanins identified in pomegranate fruit were cyanidin-3,5-diglucoside chloride (Cy3,5G), cyanidin-3-O-glucoside chloride (Cy3G), delphini din-3,5-di-O-glucoside chloride (Dp3,5G), delphinidin-3-O-glucoside chloride (Dp3G), pelargonidin-3,5-di-glucoside chloride (Pg3,5G), and pelargonidin-3-glucoside chloride (Pg3G). Among these, cyanidin-3,5-diglucoside chloride (Cy3,5G) was the major anthocyanin in California pomegranate fruit juice and Goheung pomegranate fruit pericarp. DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl radical) free radical scavenging activity was dose-dependently increased, and was higher in pericarp part than juice or seed parts from pomergrantes in both regions. By MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay, pericarp extracts from pomergrantes in both regions showed the highest anticancer activity, which was higher on Calu-6 for human pulmonary carcinoma than SNU-601 for human gastric carcinoma. Correlation between polyphenols and anticancer activity on Calu-6 was determined to be in the range of $r^2=0.8904$ to 0.9706.
The Journal of Korean Medicine Ophthalmology and Otolaryngology and Dermatology
/
v.19
no.1
/
pp.79-92
/
2006
This study was carried out to evaluate antioxidative, cytotoxic and chemosensitizing effects for anti-tumor activities of Naesosungma-tang (NST). The results were as follows ; 1. The oxidative effects were measured by DPPH radical scavenging activity. NST water extract was showed more effective than ethanol extract and also various solvent fractions from NST showed effective in the following order : butanol fraction > ethyl acetate fraction > hexane fraction > aqueous fraction. 2. NST water extract was showed cytotoxic effects on the human cancer cells Calu-6 cell and SNU-601 cell, but not on MCF-7 cell. 3. The viability of cells was measured in 4 kinds of solvent fractions from water extract of NST by MTT assay. The results were as followings : 1) On the NIH3T3 cell, $IC_{50}$ value was $200{\sim}300\;{\mu}g/m{\ell}$ in three fractions except aqueous fraction. 2) On the Caco-2 cell, effective only in the butanol fraction. 3) On the Calu-6 cell, most effective in hexane fraction($IC_{50}:80\;{\mu}g/m{\ell}$) and effective in ethyl acetate and butanol fraction($IC_{50}:100{\sim}120\;{\mu}g/m{\ell}$). 4) On the MCF-7 cell, $IC_{50}$ value was similar in three fractions except aqueous fraction. 5) On the SNU-601 cell, $IC_{50}$ value was within $100\;{\mu}g/m{\ell}$ in three fractions except aqueous fraction. 6) On the HCT-1l6 cell, $IC_{50}$ value was $150{\sim}200\;{\mu}g/m{\ell}$ in three fractions except aqueous fraction. 7) On the AML-2/WT cell, not effective in four kinds of solvent fractions. 4. In combined effects of NST and vincristine on AML-2/D100 cell, water and ethanol extracts of NST and hexane fraction of water extracts of NST more effectively inhibited proliferation of AML-2/D100 cell. These results Suggest that NST has antioxidative and cytotoxic effects against Caco-2, Calu-6, MCF-7, SNU-601, HCT116 and NIH3T3 cell especially Calu-6 and SNU-601 cell, and also chemosensitizing effects against AML-2/D100 cell in combined vincristine.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
/
v.33
no.3
/
pp.487-493
/
2004
This study has been undertaken to increase availability of native camellia in Jeonnam as a medicinal resource and to isolate the effective components from them. Fresh leaf and flower of camellia, single camellia tea and camellia tea mixed with green tea, herbs were screened for cytotoxicity on MCF -7 (human breast adenocarcinoma pleual effusion), Calu-6 (human pulmonary carcinoma), SNU-601 (human gastric carcinoma) cells. Also their multidrug-resistance reversing activity were evaluated using drug sensitive AML-2/WT and multidrug-resistant AML-2/D100 cells. Among the camellia extracts, young leaf and camellia tea mixed with green tea had strong growth inhibitory effects in below 100 $\mu\textrm{g}$/mL against human cancer cells. In result, young leaf showed the strongest inhibitory effects on MCF -7 ($IC_{50}$/ = 100 $\mu\textrm{g}$/mL ↑), Calu-6 ($IC_{50}$/ = 79 $\mu\textrm{g}$/mL), and SNU -601 ($IC_{50}$/ = 39 $\mu\textrm{g}$/mL), and AML-2/WT ($IC_{50}$/ = 64 $\mu\textrm{g}$/mL). Chemosensitizing effect was the extracts of mature leaf ($IC_{50}$/ = 97 $\mu\textrm{g}$/mL, RF=3.0), roasted tea ($IC_{50}$/ = 76 $\mu\textrm{g}$/mL, RF = 2.6 ↑) and steam tea ($IC_{50}$/ = 70 $\mu\textrm{g}$/mL, RF=2.8 ↑) strongly potentiate vincristine cytotoxicity in AML-2/D100 cells. But their cytotoxicities to both sensitive AML-2/WT and resistant AML-2/D100 cells were in the same order of magnitude. This results indicate that crude extracts of camellia mature leaves would contain some principles which have chemosensitizing activity.
Background: Herbal compounds such as curcumin which decrease telomerase and gene expression have been considered as beneficial tools for lung cancer treatment. In this article, we compared the effects of pure curcumin and curcumin-loaded NIPAAm-MAA nanoparticles on telomerase and PinX1 gene expression in a lung cancer cell line. Materials and Methods: A tetrazolium-based assay was used for determination of cytotoxic effects of curcumin on the Calu-6 lung cancer cell line and telomerase and pinX1 gene expression was measured with real-time PCR. Results: MTT assay showed that Curcumin-loaded NIPAAm-MAA inhibited the growth of the Calu-6 lung cancer cell line in a time and dose-dependent manner. Our q-PCR results showed that the expression of telomerase gene was effectively reduced as the concentration of curcumin-loaded NIPAAm-MAA increased while expression of the PinX1 gene became elevated. Conclusions: The results showed that curcumin-loaded-NIPAAm-MAA exerted cytotoxic effects on the Calu-6 cell line through down-regulation of telomerase and stimulation of pinX1 gene expression. NIPPAm-MAA could be good carrier for such kinds of hydrophobic agent.
Background : Mucus hypersecretion in the patients with airway diseases represents poor prognosis as well as discomfort. However, there is no known therapy for its effective control. One important component of mucus is mucin, a glycosylated protein, which endows mucus with viscosity. We studied whether a proteinase has a role in mucin secretion and if so, which. Methods : (1) Inhibition of mucin secretion Group-specific proteinase inhibitors were tested to evaluate whether a proteinase belonging to a group of proteinases plays a role in mucin secretion. Phenylmethylsulfonyl fluoride(PMSF, a serine proteinase inhibitor), E-64(a cysteine proteinase inhibitor), Pepstatin(an aspartic proteinase inhibitor) and 1, 10-Phenanthroline(a metalloproteinase inhibitor) were treated into the Calu-3 cell line for 24 hours. The enzyme linked immunoabsorbant assay(ELISA) for MUC5AC was performed to evaluate the amount of mucin secretion and to compare with a control. (2) Stimulation of mucin secretion Matrix metalloproteinase-9(MMP-9), MMP-12 and TACE(TNF-alpha converting enzyme), which are known to be related with airway diseases, were used to be treated into Calu-3 for 24 hours. ELISA for MUC5AC was performed to evaluate the amount of mucin secretion and to compare with the controls. Results : (1) PMSF($10^{-4}M$), E-64($10^{-4}M$), Pepstatin($10^{-6}M$) and 1, 10-Phenanthroline($10^{-4}M$) reduced the MUC5AC secretion by $1{\pm}4.9%$(mean${\pm}$standard deviation; P=1.0 compared with the control), $-6{\pm}3.9%$(P=0.34), $-13{\pm}9.7%$(P=0.34) and $41{\pm}8.2%$(P=0.03), respectively. (2) The amounts of MUC5AC secretion stimulated by MMP-9(250ng/ml), MMP-12(100ng/ml) and TACE(200ng/ml) were $103{\pm}6%$(P=0.39), $102{\pm}8%$(P=1.0) and $107{\pm}13%$(P=0.39), respectively, compared with the controls. Conclusion : Metalloproteinase(s) is (are) suggested to play a role in mucin secretion. It appears that metalloproteinases, other than MMP-9, MMP-12 or TACE, affect the mucin secretion in this in vitro model.
An anticancer substance was prepared by ethanol precipitation of the hot water extract of culture mycelia of Conolus versicolor KFCC 30388. After 6 days of fermentation, the mycelia growth reached the peak and reducing sugar consumed almost all. HTCFA method has been employed for three human cancer cell lines, Hep-2(larynx cell), A-427 and Calu-3 (lung cell). Anticancer activities in A-427 and Calu-3 were 8.4 and 9.8% survival rate, respectively. The chemical analysis of the extract from the mycelia showed 42.2% of polysaccharide and 10.5% of protein. The polysaccharide consisted of five kinds of monosaccharides, L-glucose, D-glucose, galactose, mannose and xylose.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.