• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.671-674
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• 2001

정제, 농축된 free CGTase 는 pH 6.0 - 7.0의 범위에서 안정하였으며, $70^{\circ}C$정도의 고온에서도 안정한 특성을 가지고 있었으며, CGTase의 고정화를 위한 방법으로서 CNBr-activated sepharose 4B에 의한 고정화가 가장 높은 효율올 나타내는 것으로 결정되었다. 고정화의 최적조건은 $30^{\circ}C$, 60rpm, pH 6.0의 phosphate buffer 하에서 9 시간 동안 고정화하는 것이었고, CNBr-activated sepharose 4B를 이용한 고정화의 경우 실험에 사용된 다른 모든 이온교환 수지에서 얻어진 효율에 비해 월등한 효과를 보였다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.635-639
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• 2001

A laccase produced the Trametes sp. was immobilized on CNBr-activated Sepharose 4B(CS4B) and tested for repeated-batch and continuous decolorization of dye. After immobilization, the enzyme was active in wider pH and temperature range, and its heat stability was greatly improved compared to those of the free laccase. Immobilized laccase was efficient for both repeated-batch and contionuous decolorization.

• 한국식품과학회지
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• 제29권2호
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• pp.320-325
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• 1997

이소말토올리고당의 생산에 사용되는 Aspergillus niger 유래의 TG의 고정화를 위해 여러가지 방법을 비교하여 고정화방법을 선정하였다. 이온결합과 흡착, entrapment, 공유결합과 금속이온을 이용한 결합 등을 이용하여 TG의 고정화를 시도하였다. TG의 고정화를 위해서는 수율면에서 우수하고(61.3%) 간편성도 있는 CNBr-activated sepharose 4B를 이용한 고정화 방법을 선정하였다. DEAE-sephadex를 이용한 이온결합에 의해서는 33.1%, Diaion HP-20를 이용한 흡착법에 의해서는 22.5%의 수율을 보였으나 CNBr-activated sepharose 4B를 이용한 고정화 방법에 비해 수율과 안정성이 낮아 제외하였다. Entrapment에 의한 고정화는 bead내의 확산저항으로 인해 최종산물의 생성에 불리한 것으로 판단되었고 magnesium silicate, silica gel, glass bead 등의 담체를 이용한 고정화방법은 낮은 수율로 인해, 금속이온을 이용한 경우 역시 낮은 수율과 장시간의 준비로 인해 고정화방법으로 부적당하다고 판단되었다.

• 동아시아식생활학회지
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• 제22권1호
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• pp.88-94
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• 2012

Histamine은 발효식품, 등푸른 생선 등 단백질이 많이 함유된 식품에서 잘 생성되는 물질로 이들 식품의 부패 시에는 다량의 histamine이 발생되어 이를 섭취하였을 때 독성을 일으킬 수 있기 때문에 histamine은 어육식품의 선도 저하 또는 부패의 지표로서 사용된다. 따라서 본 연구에서는 신속하며 정확한 histamine 검출을 위한 바이오센서 시스템을 구축하기 위하여 기능화된 MWCNT와 Prussian blue를 사용한 전극을 제작하였으며, 여러 불용성 담체에 효소를 고정화시켜 바이오센서 시스템에 적합한 불용성 담체를 확인하기 위한 연구를 수행하였다. MWCNT-$NH_2$와 Prussian blue가 도입된 전극의 과산화수소에 대한 감응도를 확인한 결과, 검출한계는 $0.1{\mu}M$으로 나타났으며, 각 담체의 효소 고정화도를 측정한 결과, CNBr-activated sepharose 4B는 48.5%, calcium alginate는 40.3%, controlled pore size glass beads는 51.0%를 보였다. 또한 CNBr-activated sepharose 4B, calcium alginate, controlled pore size glass beads로 제작된 효소반응기의 $100{\mu}M$ histamine에 대한 전극 감응도는 각각 120 nA, 110 nA, 140 nA로 나타났다. 따라서 담체의 coupling efficiency, 제작된 효소반응기의 전극 감응도, 선형 관계 등을 고려해 보았을 때 controlled pore size glass beads가 본 연구에서 구축된 바이오센서 시스템에서 가장 적합한 담체인 것으로 확인되었다. 이로써 이들 작업전극과 효소반응기로 구축된 바이오센서는 histamine을 감도 높고 신속하게 측정할 수 있는 것으로 나타났다.

• 센서학회지
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• 제6권6호
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• pp.437-444
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• 1997

A potentiometric L-lysine-selective sensor is described for the direct determination of lysine. The sensor system is based on a carbon dioxide gas sensing electrode and an L-lysine decarboxylase immobilized to CNBr-activated sepharose 4B. A highly selective L-lysine sensor has been prepared with immobilizing enzyme slurry put into reaction buffer solution. The optimum conditions for the measurement were evaluated by various experiments. This sensor exhibits a linear response to L-lysine concentrations from $10^{-4}M$ to $10^{-1}M$. Response time of this lysine sensor is shorter than 30secs and the immobilized enzyme slurry is stable over one year.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권4호
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• pp.368-376
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• 2003

AA를 AA-2G로 전환하는 CGTase를 고정화하여 AA-2G 대량 생산의 가능성을 고찰한 결과, CNBr-sepharose 4B가 가장 효과적인 담체로 판명되었고, CGTase의 고정화 최적 조건과 고정화 CGTase에 의한 AA-2G 생산의 최적조건 및 재사용성을 검토하였다. 최적 고정화 조건은 효소량 24,000 units/g resin으로 9시간 반응하여 약 18,000 units/g resin의 최고 고정화율을 얻을 수 있으며, pH 5.0(50 mM sodium citrate buffer)용액에 12% AA-Na와 8% soluble starch를 기질로 하여 800 units/ml의 고정화 CGTase를 첨가한 후 $37^{\circ}C$에서 100 rpm으로 교반하면서 25시간 반응하여 약 18 mM의 AA-2G 최고량을 얻을 수 있었다. 또한 0.015 mM의 $CaCl_2$를 첨가하여 고정화 CGTase의 재사용성을 관찰한 결과, 5회까지 50% 이상의 AA-2G 생산율로서 그 가능성을 입증할 수 있었다. 그리고 효소의 재사용성이란 측면에서, 본 고정화의 다른 한 방법인 ultrafiltration(한외 여과)에 의해서는 Millipore사의 YM 10 membrane을 이용하여 먼저 단백질량과 효소 활성 변화를 측정하여 그 가능성을 확보할 수 있었으며, 기질 20 ml을 사용하여 AA-2G를 생성시킨 후, 한외여과에 의해 효소만을 회수하여 연속 반응해 본 결과 8회까지 50%의 생성률을 유지하였다. 따라서 한외 여과는 CNBr-sepharose 4B와 함께 효율적인 고정화의 한 방법으로 판명되었으며, 앞으로 이들 고정화 효소를 이용한 연속 반응 시스템의 구축이 뒤따라야 할 것이다.

• KSBB Journal
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• 제17권2호
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• pp.189-194
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• 2002

Trametes sp.에서 생산되는 laccase는 CNBr-activated Sepharose-4B(CAS4B)에 고정화 되었고, 염료의 연속적인 분해를 위하여 테스트되었다. Laccase는 CAS4B에 효율적으로 고정화되었고, CAS4B에 고정화 된 laccase는 pH, 열, 단백질 구조적인 안정성 면에서 상당히 증가하였다. CAS4B에 고정화 된 accase의 최적 pH는 5, 온도는 4$0^{\circ}C$로서 free laccase와 비교하여 변화가 없었다 기질로서 Reactive Blue 19를 사용하였을 때 free laccase와 고정화 laccase의 $K_{m}$ ($\mu$mol/mL) 값은 각각 0.34와 2.0이었고,V$_{max}$($\mu$mol/mL.min) 값은 각각 0.12, 0.1이었다. Repeated-batch 반응에서 효소의 안정성과 높은 분해 효율 만족하는 조건은 pH 5, 3$0^{\circ}C$이였다. 또한 HBT에 의한 효소의 불활성은 크게 나타나지 않았다. Packed-bed reactor에서 최적으로 운전되었을 때 100 $\mu$M Reactive Blue 19과 0.1 mM HBT가 존재하는 50 $\mu$M Acid Red 57의 연속적인 분해에서 30시간 후에도 분해 효율이 70%로 유지되었다. 고정화 laccase는 Packed-bed reactor에서 azo 염료의 연속적인 분해를 매우 안정적으로 수행하였다.다.

• 환경위생공학
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• 제12권2호
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• pp.59-64
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• 1997

For purification of a 70kDa toxic protein of mosquitocidal delta-endotoxin from B. thuringiensis strain H9B, immuno-affinity chromatography was performed. After separation of 70kDa toxic proteins from the delta-endotoxin of the strain H9B on SDS-PAGE, the 70kDa toxic protein was subcutaneously injected into rabbit for making a polyclonal antibody. A anti-70kDa toxic protein was purified by a column chromatography packed with protein A-sepharose 4B gels. The 70kDa toxic protein from delta-endotoxin of the strain H9B was also purified by an immuno-affinity chromatography packed with CNBr-activated sepharose 4B gels conjugated anti-70kDa toxic protein after elution with 1/10M citric acid-1/5M Na$_{2}$HPO$_{4}$ buffer(pH3.2) containing 0.5M NaCl. The 70kDa toxic protein was purified through only one step-separation system, was demonstrated by SDS-PAGE and immunoblot.

• 한국식품과학회지
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• 제32권5호
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• pp.1079-1086
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• 2000

CNBr-sepharose 4B에 orange pectinesterase(PE)에 결합시킨 affinity chromatography용 수지에 PEI를 선택적으로 결합시킨 후, 높은 이온강도를 갖는 pH 9.5의 용액으로 PEI의 활성 peak를 용출 분리하였다. 분리된 kiwi PEI의 분자량은 12.5% SDS-PAGE 전기영동상에서 약 16.6 KDa 정도인 것으로 나타났다. 분리된 PEI 활성은 $-25^{\circ}C$와 $5^{\circ}C$에서 30일 동안 저장하였을 때 2주간 저장 시 25% 저해활성이 감소하였고 그 이후에는 큰 변화 없이 유지되었으나 실온에서는 급격한 저해활성 감소를 나타내고 30일 저장시 거의 저해활성을 상실하였다. PEI 최적활성 pH는 7.5이고 최적반응 온도는 $10{\sim}60^{\circ}C$ 측정범위에서 낮은 온도이었다. 또한 기질용액 중 NaCl의 0.2M일 때 최적활성을 나타내었으며, kiwi PEI의 PE에 대한 저해작용 방법은 noncompetitive inhibition인 것으로 나타났다. 오렌지 주스 저장시 주스를 열처리하지 않고 PEI 조추출액을 첨가하면 저장기간동안 열처리한 주스와 같이 혼탁도 유지에 효과적이었다. 사과 주스 저장 시 PEI 조추출액 첨가는 비타민 C 함량을 감소시켰으며 오히려 열처리한 주스가 비타민 C함량이 높게 유지되었으며 갈변현상도 적게 일어났다.

• Journal of Microbiology
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• 제34권3호
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• pp.255-262
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• 1996

The lipopolysaccharide (LPS) yields were measured in Rhodobacter capsulatus under several conditions by the ELISA method. The purification of LPS was done by affinity chromatography of IgG coupled CNBr-activated sepharose-4B instead of ultra-centrifugation. The purity of the LPS didn't show much difference between affinity chromatography and ultra-centrifugation method, but affinity chromatography method required much fewer organisms and was more convenient. LPS yield was measured in ng units by the ELISA method. Mannitol was a better single carbon source than other sugars, but mixing two carbon sources resulted in greater LPS yields than any sugar alone. LPS yield was directly proportional to $NH_ 4CI$ concentration, with optimum yields at 0.05% nitrogen. In contrest to LPS yields, which decreased at 0.005% nitrogen concentration total protein was increased 16 times. Calcium influenced LPS yields. At 0.7 mM $CaCI_ 2$, the LPS yield was 16.5 $\mu$g/mg DW, five times the yield without calcium.