Taehwan Kwak;Si-Hyung Park;Siyoung Lee;Yujeong Shin;Ki-Jun Yoon;Seung-Woo Cho;Jong-Chan Park;Seung-Ho Yang;Heeyeong Cho;Heh-In Im;Sun-Ju Ahn;Woong Sun;Ji Hun Yang
International Journal of Stem Cells
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v.17
no.2
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pp.158-181
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2024
This study offers a comprehensive overview of brain organoids for researchers. It combines expert opinions with technical summaries on organoid definitions, characteristics, culture methods, and quality control. This approach aims to enhance the utilization of brain organoids in research. Brain organoids, as three-dimensional human cell models mimicking the nervous system, hold immense promise for studying the human brain. They offer advantages over traditional methods, replicating anatomical structures, physiological features, and complex neuronal networks. Additionally, brain organoids can model nervous system development and interactions between cell types and the microenvironment. By providing a foundation for utilizing the most human-relevant tissue models, this work empowers researchers to overcome limitations of two-dimensional cultures and conduct advanced disease modeling research.
Kim, Sung Eun;Cho, Yong Woo;Kang, Eun Jung;Kwon, Ick Chan;Lee, Eunhee Bae;Kim, Jung Hyun;Chung, Hesson;Jeong, Seo Young
Fibers and Polymers
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v.2
no.2
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pp.64-70
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2001
A three-dimensional, porous collagen/chitosan complex sponge was prepared to closely simulate basic extracellular matrix (ECM) constitutes, collagen and glycosaminoglycan. The complex sponge was prepared by a lyophilization method and had the regular network with highly porous structure, suitable for cell adhesion and growth. The pores were well interconnected, and their distribution was fairly homogeneous. The complex sponge was crosslinked using 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) to increase its boilogical stability and enhance its mechanical properties. The crosslinking medium has a great effect on the inner structure of the sponge. The homogeneous, porous structure of the sponge was remarkably collapsed in an aqueous crosslinking medium. However, the morphology of the sponge remained almost intact in a water/ethanol mixture crosslinking milieu. Mechanical properties of the collagen/chitosan sponge were significantly enhanced by EDC-mediated crosslinking. The potential of the sponge as a scaffold for tissue engineering was investigated using a Chinese hamster ovary cell (CHO-K1) line.
CD28/T cell receptor ligation activates the NF-${\kappa}B$ signaling cascade during CD4 T cell activation. NF-${\kappa}B$ activation is required for cytokine gene expression and activated T cell survival and proliferation. Recently, many reports showed that NF-${\kappa}B$ activation is also involved in T helper (Th) cell differentiation including Th17 cell differentiation. In this review, we discuss the current literature on NF-${\kappa}B$ activation pathway and its effect on Th17 cell differentiation.
Striatum is involved in the control of movement and habitual memory. It receives glutamatergic input from wide area of the cerebral cortex as well as an extensive serotonergic (5-hydroxytryptamine, 5-HT) input from the raphe nuclei. In our study, the effects of 5-HT on synaptic transmission were studied in the rat corticostriatal brain slice using in vitro whole-cell recording technique. 5-HT inhibited the amplitude as well as frequency of spontaneous excitatory postsynaptic currents (sEPSC) significantly, and neither ${\gamma}-aminobutyric$ acid (GABA)A receptor antagonist bicuculline (BIC), nor $N-methyl-_{D}-aspartate$ (NMDA) receptor antagonist, $_{DL}-2-amino-5-phosphonovaleric$ acid (AP-V) could block the effect of 5-HT. In the presence non-NMDA receptor antagonist, 2,3-dioxo-6-nitro-1,2,3,4-tetrahydrobenxo[f] quinoxaline-7-sulfonamide (NBQX), the inhibitory effect of 5-HT was blocked. We also figured out that 5-HT change the channel kinetics of the sEPSC. There was a significant increase in the rise time during the 5-HT application. Our results suggest that 5-HT has an effect on both pre- and postsynaptic site with decreasing neurotransmitter release probability of glutamate and decreasing the sensitivity to glutamate by increasing the rise time of non-NMDA receptor mediated synaptic transmission in the corticostriatal synapses.
Lee, H. G;Lee, P. Y.;Lee, Y. K.;Kim, S. J.;H. K. Chung;M. K. Seo;Park, J. K.;K. S. Min;W. K. Chang
Korean Journal of Animal Reproduction
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v.27
no.4
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pp.299-307
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2003
The effects of additions/deletions in glycosylated residues of recombinant human EPO (rhEPO) produced in CHO-K1 on their secretion were examined. hEPO cDNA was amplified from human liver mRNA and cloned into the pCR2.1 TOPO. Using overlapping-extension site-directed mutagenesis method, glycosylation sites at 24th, 38th, 83rd, and 126th were respectively or accumulatively removed by substituting its asparagine (or serine) with glutamine. To add novel glycosylation sites, 69 and 105th leucine was mutated to asparagine. Mutant and wild type rhEPO constructs were cloned into the pcDNA3 expression vector with CMV promoter and transfected into CHO cell line, CHO-K1, to produce mutant rhEPO mutant rhEPO proteins. Enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) and Western analysis with monoclonal anti-EPO antibody were performed using supernatants of the cultures showing transient and stable expressions respectively. Addition of novel glycosylation reduced rhEPO secretion dramatically while deletion mutants had little effect except some double deletion mutants ($\Delta$24/83 and $\Delta$38/83) and triple mutant ($\Delta$24/38/83). This fact suggests that not single but combination of changes in glycosyl groups affect secretion of rhEPO in cell culture, possibly via changes in their conformations.
This study was conducted to examine the effect of IRES controlled reporter gene on screening and production of recombinant human erythropoietin (EPO) proteins from cultured CHO cells. The cDNA was cloned for EPO from human liver cDNA Using site-directed mutagenesis, we generated recombinant human EPO (rhEPO) with two additional N-glycosylations (Novel erythropoiesis-stimulating protein: NESP). Wild type hEPO and NESP were cloned into expression vectors with GFP reporter gene under regulatory control of CMV promoter and IRES so that the vectors could express both rhEPO and GFP. The expression vectors were transfected to cultured CHO-K1 cells. Under microscopy, expression of GFP was visible. Using supernatant of the culture, ELISA assay, immunocytochemistry and in vitro assay using EPO dependant cell line were performed to estimate biological activity to compare the production characteristics (secretion levels, etc.) between rhEPO and NESP. The activity of NESP protein, obtained by mutagenesis, was described and compared with its rhEPO counterpart produced under same conditions. Although NESP had less secretion level in CHO cell line, the biological activity of NESP was greater than that of rhEPO. These results are consistent with previous researches. We also demonstrated that rhEPO and GFP proteins expressed simultaneously from transfected CHO cell line. Therefore we conclude that use of GFP reporter gene under IRES control could be used to screen and produce rhEPO in cultured CHO cells.
In hybridoma cell culture, $NH_4\;^+$ is the most important toxic byproduct so far identified. It has been postulated that $NH_4\;^+$, which is similar to $K^+$ in size, is taken up non-specifically by the cells through a potassium transport system, and that the addition of $K^+$ to the culture medium may have a detoxifying effect of $NH_4\;^+$. Thus, in this study the effects of varying $Na^+/K^+$ ratios by adding potassium were investigated for hybridoma physiology and CHO cell morphology respectively. The possible use of potassium addition for the adaptation of CHO cells to suspension culture is discussed.
BAY11-7082 was initially found to be an anti-inflammatory drug with NF-${\kappa}B$ inhibitory property. In this study, we evaluated modulatory function of BAY11-7082 on U937 cell-cell adhesion induced by CD29 (${\beta}1$-integrins). BAY11-7082 strongly blocked functional activation of CD29 (${\beta}1$-integrins), as assessed by cell-cell adhesion assay. However, this compound did not block a simple activation of CD29, as assessed by cell-fibronectin adhesion assay. In particular, to understand molecular mechanism of BAY11-7082-mediated inhibition, the regulatory roles of CD29-induced actin cytoskeleton rearrangement under cell-cell adhesion and surface level of CD29 were examined using confocal and flow cytometic analysis. Interestingly, this compound strongly suppressed the molecular association of actin cytoskeleton with CD29 at cell-cell adhesion site. Moreover, BAY11-7082 also diminished surface levels of CD29 as well as its-associated adhesion molecule CD147, but not other adhesion molecules such as CD18 and CD43. Therefore, our data suggest that BAY11-7082 may be involved in regulating immune responses managed by CD29-mediated cell-cell adhesion.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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