포도당 수송을 증가시키는 것으로 밝혀진 brazilin의 작용이 지방세포의 단백질과 결합하여 나타나는지 알아보기 위한 실험으로 brazilin의 단백결합 성질을 살펴보았다. Brazilin의 단백결합 실험에는 [$^3$H]-brazilin을 사용하여 결합된 양을 방사선 동위원소량으로 확인하였다. 먼저 일반적인 단백결합을 알아보기 위하여 산침전을 이용한 brazilin의 BSA에 대한 결합을 살펴보았다. 그 결과 brazilin은 시간의 경과에 따라 BSA에 결합하는 양이 증가하여 2시간에 최고치에 달했으며 그 양은 약 80% 정도였다. 세포내 단백과의 결합은 BSA에 대한 결합과는 달리 1시간만에 최고치에 달하였다. 세포내 분획에 분포하는 brazilin의 양을 알기 위하여 brazilin처리 후 세포내 분획을 원심분리로 얻어 brazilin의 양을 확인하였다. 그 결과 brazilin은 cytosol에 대부분 존재하며 microsomal membrane과 nuclear에 많은 양이 존재하는 것으로 확인되었다. SDS-PAGE를 이용하여 brazilin과 결합한 각 분획의 단백질을 살펴본 결과 brazilin은 cytosol의 30, 65KD, microsomal membrane의 45, 130KD, nucear의 26, 35KD, plasma membrane의 46, 228KD protein과 반응하는 것으로 확인되었다.
Brazilin shows hypoglycemic effect in diabetic animals through enhancement of glucose metabolisms in insulin responsive tissues. One of the major mechanisms of brazilin to enhance glucose metabolism is stimulation of glucose transport in adipocytes. In this study, the essential molecular moiety of brazilin for the stimulation of glucose transport was investigated. We found that brazilin undergoes a structural change in physiological buffer and produces hydrogen peroxide. Methylation of hydroxyl group of brazilin or addition of catalase along with brazilin resulted in the complete inhibition of brazilin-induced glucose transport in adipocytes. Because hydrogen peroxide increases glucose transport by inhibition of phosphatases, we examined the effect of brazilin on phosphatase activity. Brazilin inhibited phosphatases in a wide range of activity, and protein phosphatase 1 and 2A were also inhibited. These results suggest that the production of hydrogen peroxide by oxidation of catechol hydroxyl group of brazilin mediates glucose transport through inhibition of phosphatases which otherwise decrease glucose transport in adipocytes.
Brazilin was examined for its effects on the induction of immunological tolerance. Brazilin was administered to C57BL/6 female mice for 2 consecutive days before the immunization with high dose SRBC (109 cells) which can produce immunological tolerance. Delayed type hypersensitivity, IgM plaque forming cells, ConA induced IL-2 production and mitogen- or antigen-induced proliferation of lymphocytes were measured as evaluation parameters. Administration of brazilin prior to immunization could keep the DTH and IL-2 production almost optimaly immunized levels. Brazilin also inhibited the elevation of non-specific suppressor cell activity. ConA induced proliferation of splenocytes in high dose SRBC immunized mice was significantly decreased by pretreatment of brazilin. And this might be one of the reason for augmentation of DTH by brazilin. However, IgM plaque forming cells were not affected by the treatment of brazilin. These results indicate that brazilin prevents the induction of mmunological tolerance caused by high dose SRBC by suppressing the elevation of suppressor cell activity and by inhibiting the decrease in IL-2 production in C57BL/6 female mice.
Brazilin, an active principle of Caesalprenia sappan, was examined for its immunopotentiating effects in multiple low dose streptozotocin (MLD-STZ) induced type diabetic mice. Brazilin was intraperitoneally administered for 5 consecutive days to MLD-STZ induced type 1 diabetic mice. Delayed type hypersensitivity, Con A-induced proliferation of splenocytes and mixed lymphocyte reaction, which had been decreased in diabetic mice, were significantly recovered by the administration of brazilin. Brazilin increased IL-2 production without affecting suppressor cell activity. Con A-induced and IL-2-induced expression of high affinity IL-2 receptors were also enhanced by brazilin. These results indicate that brazilin augments cellular immune responses, which are suppressed in the MLD-STZ induced type I diabetic mice, by increasing IL-2 production and responsiveness of immune cells to IL-2.
The present study was performed to evaluate the hypoglycemic mechanism of brazilin. Brazilin significantly reduced plasma glucose level in streptozotocin induced diabetie rats and this effect seems to be mediated by extrapancratic effects rather than by pacreatic effect because no significant changes were observed in plasma insulin levels. The rates of glycogen synthesis, glycolysis and glucose oxidation in soleus muscle were markedly increased following brazilin treatment to diabetic animals. Glucose transport seemed to be increased by the treatment of brazilin. Brazilin did not affect insulin binding to muscles from streptozotiocin induced diabetic rats. These results suggest that potentiation of periopheral glucose utilization may be one of the major causes of hypoglucemic action of brazilin.
본 연구는 소목(C. sappan L.)으로부터 분리된 Brazilin이 S. mutans의 생장 및 배양 환경 에 미치는 영향을 측정하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Methanol에 의해 분리된 소목의 수율은 총 4.8%로 나타났으며, 여러 분획물 가운데 brazilin이 포함된 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물에서 3.94%로 가장 높은 수율을 보였다. 2. 소목으로부터 분리된 brazilin의 S. mutans 생장에 대한 효과는 대조군이 24시간에서 0.816으로 최대 생장률을 보였으나, brazilin (0.3 mg/ml, 1 mg/ml, 3 mg/ml)을 투여한 배지는 32시간 만에 최대생장을 보였다. 3. S. mutans를 16시간 동안 배양한 후 배지 내 pH를 측정한 결과 대조군은 5.25이었으며, brazilin (0.3 mg/ml, 1mg/ml, 3 mg/ml)을 투여한 배지는 각각 pH 7.00, pH 7.01, pH 6.98로 유지하여 산 생성을 억제하였다. 4. S. mutans를 48시간 동안 배양한 후 배지 내 탄수화물 변화량을 측정한 결과 대조군보다 소목의 brazilin이 투여된 배지의 탄수화물의 소모량이 적었다. 5. S. mutans를 24 시간 동안 배양한 후 배지 내 단백질 변화량을 측정한 결과, 최대 생장량을 보인 24 시간에서 대조군은 2.46 mg/ml 이었으며, 소목의 brazilin이 투여된 배지는 2.54 mg/ml 이었다. 6. S. mutans의 다당류 생성에 미치는 효과는 대조군의 경우 배양 8 시간에 300 mg/100 ml을 생성하였으나, 소목의 brazilin이 투여된 배지에서는 200 mg/100 ml을 생성하였다. 이상의 결과를 볼 때, 소목의 EtOAc 분획에 존재하는 brazilin은 배지 내 S. mutans 균주의 생육을 억제하는 효과가 있어, 향후 구강 내 우식원성 세균의 억제물질로 활용을 제시한다.
본 연구는 brazilin의 항산화 효과 및 구강암세포에 대한 암세포 증식억제 효과를 확인하고자 활성산소 소거능력을 측정하고, KB cell에 brazilin을 처리하여 세포 성장억제 등을 측정하였다. 시행된 실험결과를 분석한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. Brazilin은 소목의 다른 유기용매 추출물에 비하여 최저 농도에서도 9%의 전자공여능 소거효과를 보이고 최고농도에서 90%의 소거효과를 나타내었다. 또한 리놀레산 자동 산화 방지 효과를 측정한 결과 26%에서 66%까지 억제하였다. Hydroxyl radical 소거효과 측정 결과 1 mg/ml에서 86%의 소거효과를 나타내었고, 0.001 mg/ml에서도 5%의 소거효과를 나타내었다. 2. Brazilin은 KB cell의 성장을 1시간 처리했을 경우 최저 5%에서 최대 23%까지 억제하였으며, 24시간 처리했을 경우 5%에서 최대 64%까지 억제하였고, 48시간 처리 후에는 최소 3%, 최대 79%까지 억제하였다. 3. KB cell에 LPS 처리 시 NO를 $250\;{\mu}M$ 이상 생성시켰으며, 세포증식률을 231% 증가시켰고, LPS를 처리한 KB cell에 brazilin을 처리한 결과 세포의 증식률을 -7%에서 78%까지 감소시켰다. 또한 KB cell에 $H_2O_2$를 처리한 결과 세포증식률이 감소되었으며, brazilin을 첨가하였을 때 $H_2O_2$에 대한 소거작용으로 인해 생존 억제율이 72%에서 58%로 감소하였다.
소목으로부터 분리한 brazilin을 potato chip 제조시 사용하는 튀김유에 첨가하여 항산화 활성 정도를 시험하였다. 이때 현재 사용중인 항산화제도 동일 조건에서 시험하였다. 저장 30일 후 potato chip에서 추출한 유지의 과산화물가는 대조구(control), BHA(50 ppm)-BHT(50 ppm), $\delta$-tocopherol(100 ppm) 및 brazilin(100 ppm)이 각각 134 meg/kg oil, 84.06 meg/kg oil, 117.10 meg/kg oil 및 68.56 meg/kg oil을 나타내었다. 각 처리구는 대조구에 비하여 BHA(50 ppm)-BHT(50 ppm)가 1.6배, $\delta$-tocopherol(100 ppm)이 1.14배, brazilin(100 ppm)이 1.97배의 항산화 효과를 나타내었다. 위 결과에서 brazilin(100 ppm)의 경우, BHA(50 ppm)-BHT(50 ppm)보다도 과산화 물가가 낮아 과산화물 생성 억제력이 효과적임을 알 수 있다. 또한 유도기간연장 효과는 Rancimat을 이용한 고온가열시험($180^{\circ}$, 100 ppm)에서 대조구에 비하여 BHA(50 ppm)-BHT(50 ppm)가 1.4배, brazilin (100 ppm)이 1.53배로 brazilin이 상업용 항산화제보다 보다 항산화 효과가 높게 나타났다. 또한 brazilin(100 ppm)은 palmitic acid($C_{16:0}$)/linoleic acid($C_{18:2}$) 값의 감소를 억제하는 능력과 conjugated dienoic acid 함량의 증가 억제력이 상업용 항산화제보다 우수하였다.
Experiments were undertaken to evaluate the effects of brazilin and hematoxylin on immune functions in normal young mice. Brazilin and hematoxylin decreased the circulating leucocyte counts. Brazilin and hematoxylin decreased the cirulating leucocyte counts. Both compounds did not produce a significant change of immunoorgan weights in comparison with those in the control group. Brazilin decreased significantly IgM plaque forming cells. Brazilin and hematoxylin decreased significantly Arthus reaction at 3 hours-post challenge with respect to aggregated bovine serum albumin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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