Canola(Brassica napus) 엽에서 추출한 미세막으로부터 PEG-dextran 2상분획법을 이용하여 세포막과 세포내막을 분리하였다. U$_2$ 상에 있는 원형질막의 $K^{+}$-ATPase의 특이활성도가 미세막에 비하여 $25^{\circ}C$에서 자란 canola는 6.6배, 1$0^{\circ}C$에서 4.6배 각각 증가되었다. 원형질막(U$_2$)은 미세막이나 세포내막(L$_2$) 보다 cytochrome-c-oxidase 활성이 적게 나타난 반면, 세포내막에서는 $K^{+}$-ATPase의 특이활성도가 가장 적게 나타났다. 1$0^{\circ}C$에서 생장한 canola의 18:3/18:2 률은 $25^{\circ}C$보다 29.2% 더 높게 나타났다. 원형질막의 2중결합지수는 1$0^{\circ}C$에서 생장한 canola가 $25^{\circ}C$에서 생장한 것보다 8.9% 더 증가되었으며 세포내막에서도 같은 경향으로써 1$0^{\circ}C$에서 19.7% 더 증가되는 현상을 보였다. 또한 엽록소 함량은 1$0^{\circ}C$에서 생장한 것이 $25^{\circ}C$에 비하여 17.3% 낮았다. Canola가 저온에서 생장시 주로 $C_{18}$ 지방산들이 변화되어, 세포막 내에 불포화 지방산이 많았으며, 그 중에서도 리롤렌산(18:3)이 크게 변화되는 현상을 보였다. 이러한 변화는 생리적으로 canola의 세포막이 저온에 살아가기 위한 하나의 수단으로 추정된다.
화석에너지의 고갈과 지구 온난화 현상으로 인해 재생 가능한 식물자원으로부터 바이오에너지를 얻고자 하는 관심이 높아지고 있다. 이에 바이오디젤의 원료로 사용 되기 적합한 형질전환이 된 유채를 개발하기 위한 첫 단계로 한국 고유 유채 품종을 이용한 형질전환 체계를 구축하였다. 내한, 영산, 탐미, 한라 유채의 종자를 분양 받아 지방산 분석을 실시한 결과, 종자의 약 32-40% 식물성 오일이 포함되어 있었고, 그 중 올레인산의 함량은 60mole% 이상 존재하는 것으로 확인되었다. 그 중 오일 함량 및 올레인산 함량이 높고, 형질전환 효율이 비교적 높은 한라 유채품종이 그리고 $\beta$-glucuronidase (GUS)와 phosphinothricin acetyltransferase (PAT) 유전자가 포함된 pCAM-BIA3301 벡터가 도입된 Agrobacterium tumefaciens GV3101균주가 형질전환에 사용되었다. 형질전환이 된 유채 식물체는 제초제에 대한 내성, PCR을 이용한 PAT 유전자의 도입 여부 및 GUS 활성 분석을 통하여 선별하였다. 그 결과 한라 유채의 경우, 10. 4% 형질전환 효율을 보였고, 제초제 저항성이 다음 세대 ($T_1$ 식물체)로 안정되게 유전됨을 확인하였다. 이러한 연구는 바이오디젤 원료로 사용될 다양한 유채 품종에 교배를 통해 제초제 저항성 유전자를 쉽게 도입할 수 있는 가능성을 제시하였다.
유채는 월동작물로 내한성이 약해 남부지역에서만 재배가 가능하다. 따라서 재배면적 확대 및 안정적 생산성 확보를 위해 내한성 증진 품종 육성이 절실하다. 본 연구에서는 유채의 내한성을 증진시키기 위해 보리에서 유래한 HvIRIP 유전자를 CaMV35S 프로모터 조절하에서 전신발현되도록 운반체를 제작하였고, 아그로박테리움을 이용하여 유채에 형질전환하였다. Southern 분석을 통해 HvIRIP 유전자가 유채 Genome 안으로 전이 되었음을 확인하였다. 또한 Northern 분석을 통해 $4^{\circ}C$에서 2주간 처리된 유묘에서 HvIRIP 유전자의 발현이 크게 증대되는 것을 알 수 있었다. 본엽 3-4매 전개 유채 형질전환체를 영하 $5^{\circ}C$에서 2일간 저온에 노출한 후 회복여부를 조사한 결과, 대조구는 회복하지 못하고 죽은 반면, 형질전환체는 회복이 정상적으로 이루어졌다. 또한 저온스트레스가 진행되는 동안에 스트레스를 극복하는데 필요한 Proline 함량이 형질전환체에서 크게 증대되는 것이 관찰되었다. 이 외에도 저온스트레스 과정 중에 생성되는 활성산소의 독성을 감소시키는 항산화제 효소인 CAT, SOD 그리고 ADH 활성을 측정한 결과, 대조구에 비해 형질전환체에서 그 함량이 현저히 증가됨을 알 수 있었다. 따라서 이러한 결과를 통해 HvIRIP 유전자가 함유된 유채 형질전환체의 내한성이 증진되었음을 확인하였다.
본 연구의 목적은 국내의 자생식물 중 살초활성이 있는 식물 종을 선발하는데 있다. 국내의 자생식물 73과(科) 200종(種) 시료로부터 MeOH 조추출물을 얻은 다음 24-well plate에서 유채 (Brassica napus L.) 에 대한 살초효과를 검정하였다. 실험에 사용한 200종 식물 중 6종 식물 - 고추나무 (Staphylea bumalda), 등나무(Wistaria floribunda), 산마늘(Allium victorialis), 소리쟁이(Rumex crispus), 이팝나무(Chionanthus retusa), 참느릅 나무 (Ulmus parvifolia)는 높은 살초활성을 나타내었고 ($GR_{50}$ 값, < $1,000{\mu}g\;g^{-1}$), 17종 식물 - 갈퀴덩굴(Galium spurium), 느티나무(Zelkova serrata), 능소화(Campsis gradiflora), 두충(Eucommia ulmoides), 마가목(Sorbus commixta.), 물참대(Deutzia glabrata), 박태기나무(Cercis chinensis), 산오리(Alnus hirsuta), 산초나무(Zanthoxylum schinifolium), 상수리나무(Quercus acutissima), 아까시나무(Robinia pseudoacacia), 주엽나무(Gleditsia japonica), 죽단화(Kerria japonica), 쥐똥나무(Ligustrum obtusifolium), 측백나무(Thuja orientalis), 편백(Chamaecyparis obtusa), 할미꽃(Pulsatilla koreana)은 중정도의 살초활성을 나타내었으나($GR_{50}$ 값, $1,000-2,000{\mu}g\;g^{-1}$), 나머지 177종 식물은 살초활성을 나타내지 않았다. 높은 살초활성을 나타낸 식물로부터 분리되는 천연활성물질들은 향후 새로운 제초제 개발을 위한 모화합물 제공, 상호대립억제 작용성을 갖는 작물 품종 개발 혹은 개량에의 활용, 그리고 친환경 유기농업용 잡초방제에의 활용이 기대된다.
본 연구의 목적은 국내의 자생식물 중 살초활성물질을 함유하고 있는 식물종을 선발하는데 있다. 국내의 자생식물 38과 81종 시료로부터 메탄올 조추출물을 얻은 다음 24-well plate에서 유채(Brassica napus L.)에 대한 살초검정을 수행하였다. 본 연구에 사용된 81종 시료 중 높은 살초활성($GR_{50}$ 값 < 1,000 ${\mu}g\;g^{-1}$) 을 나타낸 식물은 곤드레(Cirsium setidens), 구상나무(Abies koreana WILS.), 남오미자(Kadsura japonica DUNAL), 살갈퀴(Vicia angustifolia var. segetilis K. KOCH), 새비나무(Callicarpa mollis Sieb. et ZUCC.), 암대극 (Euphorbia jolkini BOISS.), 얇은잎고광나무(Philadelphus tenuifolius RUPR. et MAXIM.), 조구나무(Sapium sebiferum), 좁은잎참빗살나무(Euonymus maackii RUPR.), 캐모마일(Anthemis nobilis L.), 함박꽃(Paeonia aliflora Pall var. tricocarpa BUNGE)이었다. 자생식물 81종 중 50종 식물은 중정도의 살초활성을 나타내었으나(1,000 ${\mu}g\;g^{-1}$ < $GR_{50}$ 값 < 2,000 ${\mu}g\;g^{-1}$), 20종 식물은 살초활성을 전혀 나타내지 않았다. 본 연구를 통하여 살초활성이 검정된 국내의 자생식물로부터 얻어지는 살초활성물질은 새로운 제초제 개발을 위한 모화합물로 활용될 수 있을 것이다.
본 연구의 목적은 국내의 자생식물 중 살초활성물질을 함유하고 있는 식물종을 선발하는데 있다. 국내의 자생식물 36과 55종 시료로부터 메탄올 조추출물을 얻은 다음 24-well plate에서 유채(Brassica napus L.)를 대상으로 살초활성을 수행하였다. 본 연구에서 사용된 55 시료 중 유채에 대하여 높은 살초활성($GR_{50}$ 값 < 1,000 ${\mu}g\;g^{-1}$)을 나타낸 식물은 말오줌때(Euscaphis Japonica (THUNB.) KANITZ; $GR_{50}$값, 867 ${\mu}g\;g^{-1}$), 부용(Hibiscus mutabilis L; $GR_{50}$값, 988 ${\mu}g\;g^{-1}$), 사위질빵(Clematis apiifolia A. P. DC.; $GR_{50}$값, 811 ${\mu}g\;g^{-1}$), 유카(Yucca recurvifolia; $GR_{50}$값, 857 ${\mu}g\;g^{-1}$), 죽순대(Phyllostachys pubescens MAZEL; $GR_{50}$값, 778 ${\mu}g\;g^{-1}$)의 순으로 전체 식물종의 9.0%에 해당하는 5종이었다. 중정도의 살초활성(1,000 ${\mu}g\;g^{-1}$ < $GR_{50}$값 < 2,000 ${\mu}g\;g^{-1}$)을 나타낸 식물은 28종이었으며, 살초활성을 나타내지 않은 식물은 23종이었다. 본 연구를 통해서 살초활성이 검정된 국내의 자생식물로부터 얻어지는 살초활성물질은 새로운 제초제 개발을 위한 선도화합물로 활용될 수 있을 것이라 판단된다.
녹비 작물의 이용은 화학비료의 사용을 대체하고 물질순환에 의한 안전한 농작물 생산을 가능하게 할 수 있다. 이에 본 연구는 바이오디젤 생산의 원료로 이용되는 유채 종자의 유채의 녹비 환원에 의한 질소무기화 및 옥수수의 질소 흡수 389 수확 후 잔유물의 녹비 이용 가능성을 평가하였다. 유채 수확 후 잔류물의 질소함량은 0.53%로 낮았으며 탄질율은 63으로 나타났다. 유채 잔유물의 부숙기간 없이 환원 직후 파종한 처리구는 옥수수의 질소 흡수를 지연시켰으며, 생육에서도 30일간 부숙기간을 설정한 처리구의 옥수수보다 억제되어 유채 잔유물의 녹비 환원 직후 후작물의 파종은 주의해야 할 것으로 판단되었다. 유채 잔유물의 녹비 환원 90일 후 질소무기화는 암모늄태 질소(24.2mg/kg)보다 질산태 질소(58.4mg/kg)에서 높았으며, 방출된 무기태 질소에 대한 옥수수의 흡수 및 이용량은 부숙기간 없이 환원 직후 파종한 처리구와 30일간 부숙기간을 설정한 처리구에서 각각 86%와 88%로 나타났다.
사초용유채의 품종선별선급실험과 유채용유채와 사초용유채품종들 간에 있어서 생산성과 영양가치를 비교한 실험에서 사초용유채 도인품종중 우리나라 남부지역의 특성에 적합한 품종으로 Velox가 사초생산성 및 영양가치면에서 가장 유망하다고 생각되었다. 따라서 Velox를 공시하여 고립적배와 실행群落培 사이에 생산성과 영양가치에 있어서 어떤 차이가 있는가를 비교하였으며 또한 생육과정중의 영양가치의 변화를 조사하였는데 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 수당 생산성에 있어서 생체중과 건물중의 개체간 변이가 매우 컸으나 고립적배가 군락적배보다 1%수준의 유의차로 우수하였다. 孤립적배에 있어서 생체중과 건물중의 구성은 분지에 크게 의존되었으며 군락적배에 있어서는 분치와 주경이 비슷한 영향을 주었다. 건물율은 고리적배와 군락적배사이에 큰 차이가 없었으며 부위별로는 주경이 가장 높았다. 2. 粗蛋白質含量은 生育期間이 經過됨에 따라 점차 저하되었으며, 播種後 90일부터 120일까지에는 孤立적배가 群落적배보다 높은 반면 180일以後 개화기까지는 군락적배가 고립적배보다 높았다. NDF, ADF, cellulose 및 lignin등의 鐵維含量은 生育초기에는 낮은 水준이었으며 생育期間이 經過됨에 따라 점차 높아지면서 생育後期에는 孤立적배가 군락적배보다 높게 變化되었다. 3. In vitro 乾物소화率은 줄기나 잎 모두 生育기간이 경과됨에 따라 점차 저하되었으며, 줄기는 군락적배가 고립적배보다 높았으나 잎은 고립적배와 군락적배간에 유의차가 인정되지 않았다.
유채의 황 이용성에 대한 영향을 조사하기 위하여 유채 2 품종(cv. Akela, Colosse)을 2.0mM ${SO_4}^{2-}$와 0.2mM ${SO_4}^{2-}$에서 ${SO_4}^{2-}$ 흡수, ATP sulfurylase의 활성과 염조직내의 glutathione(GSH) 함량을 측정하였다. 0.2mM ${SO_4}^{2-}$에서 두 품종 모두 2.0mM ${SO_4}^{2-}$에 비해 현저하게 낮은 ${SO_4}^{2-}$ 흡수율을 나타냈다. 0.2mM ${SO_4}^{2-}$에서 APT sulfurylase의 활성은 어린잎에서 두 품종 모두 증가하였으나 성숙된 잎에서의 활성은 큰 변화가 얼었다. 0.2mM ${SO_4}^{2-}$에서 glutathione의 함량은 어린잎에서 두 품종 모두 증가하였으나 성숙된 잎에서는 Akela에서만 현저하게 감소하였다. 이러한 결과들은 유채품종간의 ${SO_4}^{2-}$ 흡수와 ATP sulfurylase의 특이성 뿐만 아니라, ${SO_4}^{2-}$ 흡수가 glutathione과 같은 황을 포함하고 있는 화합물로의 동화와 밀접한 관련이 있음을 나타낸다.
유채는 십자화과로 분류되는 유지작물로써 전 세계적으로 재배되는 작물이다. 이전 연구결과에서 가뭄저항성을 증대시키는 것으로 보고된 애기장대의 ${\beta}$-glucosidase 1 (AtBG1) 유전자를 도입함으로써 가뭄저항성 형질전환 유채를 개발하였다. 새로 개발된 형질전환 작물들은 그 이용에 대한 안전성에 대하여 어떠한 정보도 제공되지 않기 때문에 작물의 안정성에 대한 증명이 필수적이다. 이러한 안정성 평가는 작물의 역사적 사용과 과학적 증거를 기초로 한다. 이번 연구에서는 AtBG1이 도입된 형질전환 유채의 급성투여독성시험을 통하여 암수 마우스 각각에서 한계투여 용량을 확인하는 것을 목적으로 하였다. 이를 위해 OECD의 급성독성의 권고안에 따라 AtBG1 단백질을 암수 각각 5마리의 ICR 마우스에 몸무게 1 kg 당 2,000 mg을 부형제에 녹여 강제구강투여 하였다. 투여일부터 14일 동안 운동성, 병리학적 이상, 몸무게를 측정하였고 마지막 14일에는 안락사 후에 부검을 통해 AtBG1 투여군과 비투여군의 차이를 확인하였다. 이상의 실험을 통하여 AtBG1 단백질이 운동성, 병리학적 이상, 몸무게 및 부검 결과에서 대조구와 실험구, 두 그룹간의 특이적인 차이를 보이지 않음을 확인하였다. 또한 AtBG1 단백질은 급성독성의 측면에서 안전한 물질로 판단되며, 한계허용치 용량이 2,000 mg을 상회함을 확인하였다. 따라서, 이는 차후 AtBG1 도입 유채의 인체위해성 평가 자료로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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