To determine the prevalence of bovine rotavirus Infection in Chungbuk area, fecal specimen were collected from calves nth diarrhea and tested using ELISA. The positive rates were 53.8%(1 to 30days old), 19.0%(31 to 60days old), and 3.2%(over 60days old). Electrophoretic migration patterns of genomic RNA from field isolates were similar to that of NCDV strain, prototype of bovine rotavirus. Bovine rotavirus field isolate showed characteristic morphology of rotavirus particle with 80nm in diameter, using EM.
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to detect rotavirus antigen in fecal samples using VP6-specific monoclonal antibody(2B12). The ELISA for rotavirus antigen detection found to have specificity to all bovine and porcine rotaviruses tested but not to bovine viral diarrhea virus and bovine coronavirus. The ELISA appeared to have similar sensitivity and specificity compared to fluorescence antibody assay(FA) and electropherotyping (PAGE).
This study was carried out to investigate the toxicity of exopolysaccharides (EPS) from kefir toward MA104 cells and evaluate the inhibitory effects of kefir EPS on rotavirus infection. The results obtained are summarized as follows: Lactic acid bacteria (Lactobacillus fermentum, L. acidophilus, L. brevis) and yeasts (Candida kefyr, Cryptococcus albidus, Pichia ohmeri) were isolated and identified from kefir grain and culture. At 1% EPS, the inhibitory effects of EPS on the infection of MA-104 cells using the MTT assay were $72.52{\pm}6.48%$ for human rotavirus (KU), $36.06{\pm}7.63%$ for bovine rotavirus (NCDV), and $81.66{\pm}1.11%$ for porcine rotavirus (OSU). At 1/128% EPS, the effects were $24.98{\pm}4.58%$ for human rotavirus (KU), $4.71{\pm}6.16%$ for bovine rotavirus (NCDV), and $4.05{\pm}14.90%$ forporcine rotavirus (OSU). EPS isolated from kefir have inhibitory effects on rotaviruses of various serotypes and rotaviruses from different animals.
Nucleotide sequence homology between bovine, simian, and porcine rotavirus was determined by the RNA:RNA hybridization technique. Single stranded RNA, prepared in vitro with EDTA activated endogeneous viral RNA polymerase, was hhbridized with tritium labeled bovine rotavirus genomic RNA. The heteroduplex RNA was treated with single stranded RNA specific ribonucleases and the RNase resistant hybrid RNA was precipitated, and collected by filtration on a filter paper. Seventy four percent RNA sequence homology between bovine and simian rotavirus and 8 percent RNA sequence homology between bovine and porcine rotavirus was confirmed by hybridization between tritium labeled single stranded RNA and viral genomic RNA.
The nonstructural protein NSP4, encoded by gene 10 of rotavirus, has been shown to playa role in viral assembly and known to be an enterotoxin, causing diarrhea in mouse pups. NSP4 gene was cloned from CBNU-2 (virulent bovine rotavirus/diarrheic fecal sample) and CBNU-1 (cell-culture adapted bovine rotavirus/isolated from CBNU-2 and 75 times passaged on MA104 cells), respectively, by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and sequenced and compared. The sequence data indicated that the NSP4 genes of bovine rotavirus (BRV) were 751 bases in length and encoded one open reading frame of 175 amino acids beginning at base 42 and terminating at base 569. Differences in nucleotide sequence between CBNU-2 and CBNU-1 were observed at 6 positions (base 274, 296, 391, 394, 396 and 579). NSP4 gene of BRV exhibited a high degree of nucleotide (90% and 94%) and amino acid sequence (91% and 97%) homology with those of SA11 and UK but a low degree of nucleotide (77% and 79%) and amino acids sequence (81% and 85%) homology with those of Wa and OSU.
It has long been known that lactoferrin prevents human beings from infection of virus. To prove this activity of lactoferrin, we evaluated the activities of different lactoferrins to an isolate human rotavirus K-21. Bovine lactoferrin inhibited infection of K-21 to MA-104 cell at the concentration of $25.9\;{\mu}M$ whereas bovine hydrolysed lactoferrin prevented rotavirus infection at $103.8\;{\mu}M$. However human lactoferrin prevented infection of K-21 at the concentration of $217.5\;{\mu}M$. These data suggested that lactoferrin activity may be unaffected by the intestinal digestive enzymes and bovine lactoferrin is more active than human lactoferrin with respect to prevention of rotavirus infection.
Throughout the world, rotavirus infections cause extensive morbidity in human infants and diarrhea in animals such as white scour caused by bovine rotavirus in calves. We isolated three rotavirus strains designated KV0407, KV0418, and KV0426 from 103 fecal samples of diarrheic calves. The genes coding for proteins VP4, VP6, VP7, and NSP4 from strain KV0407 were sequenced and compared with the nucleotide sequences of other known strains of rotavirus. The KV0407 VP4 gene was highly homologous to the OSU (99.4%) and JL94 (99.4%), but not the B223 (62.4%) and K33 (62.4%) VP4 genes. The KV0407 and KV0418 VP7 genes were most similar to the OSU and super-short type VMRI VP7 genes. Based on nucleotide sequence analysis, the KV0407 strain was tentatively assigned to A serogroup (SG I), G5P[7], NSP4 genotype B and the KV0418 and KV0426 strains were assigned to A serogroup (SG I), G6P[5], NSP4 genotype A. The genetic characterization of these bovine rotavirus isolates could be useful for the diagnosis and prevention of diarrhea in calves.
Yu, Jae-Hyeun;Lee, Young-Kun;Ju, Ji-Sun;Kim, You-Seong;Kim, Soon-Jae;Ebina, T.;Nakagomi, O.;Urasawa, S.;Taniguchi, K.;Greenberg, Harry B.
The Journal of Korean Society of Virology
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v.26
no.2
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pp.181-189
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1996
Fecal samples of calf diarrhea were taken on farms in Jeju island, rotavirus was isolated and cytopathic effect (CPE) was determined after infection to MA104 cell. Morphological evaluation on electron microscopy proved it as rotavirus. Also, its infection to MA104 cell was reidentified using a fluorescence antibody method. Genotype of Jeju island bovine rotavirus (JBR) analyzed through PAGE was 4: 2: 3: 2 pattern, which was unique in bovine and that analyzed through general PAGE was somewhat different from NCDV, UK, KK3, A5-3A, 61A, B223 and similar to N stool-5, N culture-5 and Kawatabi (Japan). By titration after plaquing, the level was $1-3\;{\times}\;10^6\;PFU/ml$, which was lower than those of NCDV and UK. Electrophoresis analysis of RNA-RNA hybridization, ELISA, and first and second PCR products of VP7 and VP4 in 1% agarose ($TAE+1{\mu}l$ EtBr) revealed that the rotavirus was a serotype of G6P11.
Rotavirus infection is the leading cause of severe diarrhea disease in infants and young children worldwide. Rotavirus infects every child at least once by her/his $5^{th}$ birthday. It has been known that single episode of rotavirus infection can protect or alleviate subsequent illness caused by both homotypic and heterotypic rotaviruses. There are two currently licensed rotavirus vaccines. One is human-bovine rotavirus reassortant pentavalent vaccine ($RotaTeq^{TM}$), which contains five reassortant rotavirus (expressing protein G1, G2, G3, G4 and P[8]) and was licensed in Korea for use among infants in 2007. Another is live-attenuated human rotavirus vaccine ($Rotarix^{TM}$) derived from 89-12 strain which represents the most common of the human rotavirus VP7(G1) and VP4(P[8]) antigens. $Rotarix^{TM}$ was licensed in Korea in 2008. Both live oral rotavirus vaccines are efficacious in preventing severe rotavirus gastroenteritis.
Journal of Practical Agriculture & Fisheries Research
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v.5
no.1
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pp.57-63
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2003
The bovine rotavirus(BRV), bovine coronavirus(BCV) and bovine viral diarrhea virus(BVDV) are main viruses of bovine viral diarrhea disease. These viruses could be rapidly amplified by the reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR). This study was conducted to develop rapid and accurate diagnostic methods of these viral diseases by multiplex RT-PCR. Specific primers were designed based on the sequences reported by Chang KO et. al. (1997) and Schroeder BA, et. al. (1990), RNA were prepared from the cultured viruses, first-stranded DNAs were synthesised by reverse transcriptase. PCR were conducted to amplify specific regions of the viruses by multiplex. Three bands such as 1,062bp for BRV, 458bp for BCV, and 300bp for BVDV were successfully produced by multiplex RT-PCR. In conclusion, this result suggested that these viruses could be diagnosed rapidly and accurately by multiplex RT-PCR.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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