For effective exopolysaccharide production and mycelial growth by a liquid culture of Fomitopsis pinicola in an air-lift bioreactor, the culture temperature, pH, carbon source, nitrogen source, and mineral source were initially investigated in a flask. The optimal temperature and pH for mycelial growth and exopolysaccharide production were $25^{\circ}C$ and 6.0, respectively. Among the various carbon sources tested, glucose was found to be the most suitable carbon source. In particular, the maximum mycelial growth and exopolysaccharide production were achieved in 4% glucose. The best nitrogen sources were yeast extract and malt extract. The optimal concentrations of yeast extract and malt extract were 0.5 and 0.1%, respectively. $K_2HPO_4\;and\;MgSO_4{\cdot}7H_2O$ were found to be the best mineral sources for mycelial growth and exopolysaccharide production. In order to investigate the effect of aeration on mycelial growth and exopolysaccharide production in an air-lift bioreactor, various aerations were tested for 8 days. The maximum mycelial growth and exopolysaccharide production were 7.9 g/l and 2.6 g/l, respectively, at 1.5 vvm of aeration. In addition, a batch culture in an air-lift bioreactor was carried out for 11 days under the optimal conditions. The maximum mycelial growth was 10.4 g/l, which was approximately 1.7-fold higher than that of basal medium. The exopolysaccharide production was increased with increased culture time. The maximum concentration of exopolysaccharide was 4.4 g/l, which was about 3.3-fold higher than that of basal medium. These results indicate that exopolysaccharide production increased in parallel with the growth of mycelium, and also show that product formation is associated with mycelial growth. The developed model in an air-lift bioreactor showed good agreement with experimental data and simulated results on mycelial growth and exopolysaccharide production in the culture of F. pinicola.
The adventitious root of Panax ginseng C.A. Meyer is regarded as an efficient alternative to cell culture or hairy root culture for biomass production due to its fast growth and stable metabolite production. To determine optimal culture conditions for the bioreactor culture of ginseng roots, experiments have been conducted on physical and chemical factors such as bioreactor type, dissolved oxygen, gas supply, aeration, medium type, macro- and micro-elements, medium supplement during culture period, sucrose concentration, osmotic agents, medium pH and light. Elicitation is a key step to increase ginsenoside accumulation in the adventitious roots but biomass growth is severely inhibited by elicitor treatment. To obtain high ginsenoside content with avoiding biomass decrease, we applied two-stage bioreactor culture system. Ginseng adventitious roots were cultured for 40 days to maximize biomass increase followed by elicitation for 7 days to enhance ginsenoside accumulation. We also experimented on types and concentrations of jasmonate to determine optimal elicitation methods. In this paper, we discussed several factors affecting the root propagation and ginsenoside accumulation. Based on the results obtained from previous experiments we have established large-scale bioreactor system (1 ton-10 ton) for the efficient production of ginseng adventitious roots and bioactive compounds including ginsenoside. Still, experiments are on going in our laboratory to determine other bioactive compounds having effects on diet, high blood pressure, DPPH elimination and increasing memories.
A perfusion culture of transgenic Nicotiana tabacum cell suspensions, transformed to express recombinant glucuronidase (GUS), was successfully performed in a 5-1 stirred tank bioreactor. With 0.1 $day^{-1}$ of perfusion rate, the maximum dry cell weight (DCW) reached to 29.5 g/l in 16 days, which was 2.1-fold higher than the obtained in batch culture (14.3 g/l). In terms of the production of GUS, the volumetric activity could be increased up to 12.8 U/ml by using perfusion, compared with 4.9 U/ml in batch culture. The specific GUS activities in both perfusion and batch cultures were maintained at similar levels, 200-400 U/g DCW. Consequently, a perfusion culture could be a good strategy for the enhanced production of recombinant proteins in a plant cell culture system.
Large scale mammalian cell culture has become, over the past two decades, the preferred method to produce therapeutic monoclonal antibodies. In this presentation, I will introduce disposable bioreactor system and analyze key factors and points for consideration during mammalian cell culture process development. Example will be provided highlighting the selection of master cell, culture media and environmental factors based on productivity and product quality.
지황 기내 식물체의 줄기 조직을 재료로 생물반응기에서 부정아 발생 과정을 통하여 기내 종묘를 생산하기 위해 본 실험을 수행하였다. 공기부양형 생물반응기가 교반형에 생물반응기의비해 신초 형성에 유리하였다. 2.5L 규모의 생물반응기에서 적절한 배양 밀도는 배지 1.5L에 시료 50g(줄기절편 90개)이었고, 이 때 공기의 주입량은 0.5 v.v.m으로 조절하는 것이 효과적이었다. 신초의 생산 효율을 높이기 위해 배지에 pH 완충제인 MES를 첨가한 결과, 생성된 신초의 수가 증가하였다. 유리화 억제제를 5g/1의 농도로 배지에 첨가하였을 경우 신초의 유리화 현상이 뚜렷하게 억제됨과 동시에 신초의 형성도 증가되었다.
Monoclonal antibodies are widely used as diagnostic reagents and for therapeutic purposes, and their demand is increasing extensively. To produce these proteins in sufficient quantities for commercial use, it is necessary to raise the output by scaling up the production processes. This review describes recent trends in high-density cell culture systems established for monoclonal antibody production that are excellent methods to scale up from the lab-scale cell culture. Among the reactors, hollow fiber bioreactors contribute to a major part of high-density cell culture as they can provide a tremendous amount of surface area in a small volume for cell growth. As an alternative to hollow fiber reactors, a novel disposable bioreactor has been developed, which consists of a polymer-based supermacroporous material, cryogel, as a matrix for cell growth. Packed bed systems and disposable wave bioreactors have also been introduced for high cell density culture. These developments in high-density cell culture systems have led to the monoclonal antibody production in an economically favourable manner and made monoclonal antibodies one of the dominant therapeutic and diagnostic proteins in biopharmaceutical industry.
송이버섯 균사체의 biomass를 위한 최적조건을 규명한 결과, 균사체 spot배양을 위한 최적 조건은 MMN배지를 사용하여 pH 5.5에서 탄소원으로 현미를 3% 첨가 하여 $24^{\circ}C$에서 35일 배양 시 최적인 것으로 판단하였으며, 송이버섯 균사체 Biomass를 위한 bioreactor의 배양 최적조건은 PDMP배지를 사용하여 $18^{\circ}C$에서 60일 배양 시 reactor의 반응은 최적의 상태를 나타낼 수 있을 것이라 판단되었다.
It is reported that mechanical stimulation takes a role in improving cell growth in skeletal system. And various research groups have showed that developed bioreactor to stimulate cell-seeded and threedimensional scaffold. In this study, we designed a custom-made bioreactor capable of applying controlled compression to cell-seeded agarose gel. This device consisted of a circulation system and compression system. In circular system, culture chamber was sealed for prohibiting contamination and media solution was circulated by pump. In compression system, mechanical stimuli were controlled by LabVIEW software and mechanical transfer system. Cell-encapsulated agarose gels were cultured for up to 7 days. There were significant differences between the number of cells grown in dynamic cell culture and in static cell culture from 3 days to 7 days.
식물조직배양용 바이오리액터 8개의 배양액 P보, DO 농도를 on-line으로 계측하고 pH 농도 및 주입공기 량을 제어할 수 있는 시스템을 개발하였다. 시스템 제어용 컴퓨터 프로그램은 나리구근의 성장단계에 맞는 주입공기량을 추종제어방식으로 제어하며, 바이오리액터 내부의 pH 변화를 감지하여 오염을 감시하는 오염경보기능이 포함되어있다. 성장단계에 따라 적절한 주입공기량의 선정을 위하여 시뮬레이션 한 결과 배양초기에는 300 cc/min, 20일 경과 후에는 400 cc/mim, 40일 경과 후에는 500 cc/min, 60일 경과 후에는 600 cc/min, 그리고 80일 경과 후부터는 700 cc/min의 공기를 주입할 경우 바이오리액터내 나리구근의 분포가 고르게 나타났으며, 이 결과를 바이오리액터 배양실험에 이용하였다 배양액의 pH 농도 제어 시스템은 배양 전 기간동안에 제어 목표 값 (5.5$\pm$0.5)로 제어할 수 있었다.
Transgenic Nicotiana tabacum cells were cultivated for the production of murine granulocyte macrophage-colony stimulating factor (mGM-CSF) in both a stirred tank bioreactor and an airlift bioreactor with draft tube. Cell growth and mGM-CSF production in the airlift bioreactor were found to be better than those achieved in the stirred tank bioreactor. In the airlift bioreactor, 9.0g/L of cells and 2.2ng/mL of mGM-CSF were obtained (11.0g/L and 2.4ng/mL, respectively in shake flasks). Although the lag period was prolonged and mGM-CSF production was lowered by 33% in the stirred thank bioreactor as compared to the control culture, the maximum cell density was increased up to 12.0g/L due to better mixing by agitation at the higher cell density.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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