The skc gene encoding streptokinase (SK) with a molecular mass of approximately 47.4 kDa was cloned from Streptococcus equisimilis ATCC 9542 and heterologously overexpressed in Streptomyces lividans TK24 and E. coli using various strong promoters. When the promoter for sprT [Streptomyces griseus trypsin (SGT)] was used in the host S. lividans TK24, a 47.4-kDa protein was detected along with a smaller hydrolyzed protein (44 kDa), suggesting that posttranslational hydrolysis had occurred as has been reported in other expression systems. The casein/plasminogen plate assay revealed that the plasmid construct containing the SGT signal peptide was superior to that containing the SK signal peptide in terms of SK production. Maximal production of SK was calculated to be about 0.25 unit/ml of culture broth, a value that was five times higher than that obtained with other expression systems using ermE and tipA promoters in the same host. When the skc gene was expressed in E. coli BL21(${\Delta}DE3$)pLys under the control of the T7 promoter, a relatively large amount of SK was expressed in soluble form without hydrolysis. SK activity in E. coli/pET28a-$T7_pSK_m$ was more than 2 units/ml of culture broth, even though about half of the expressed protein formed an inactive inclusion body.
Kim, Tae-Wan;Choi, Choon-Young;Cao, Qing-Ri;Kwon, Kyoung-Ae;Lee, Beom-Jin
Journal of Pharmaceutical Investigation
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v.32
no.3
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pp.191-197
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2002
Polymer based physical mixtures or solid dispersions containing solubilizing compositions[OA, tween80 and SLS] were prepared using a spray-dryer. Lovastatin(LOS), simvastatin(SIMS), aceclofenac(AFC) and cisapride(CSP) were selected as poorly water-soluble drugs. Dextrin, poly(vinylalcohol) (PVA), poly(vinylpyrrolidone)(PVP) and polyethylene glycol(PEG) were chosen as solubilizing carriers for solid dispersions. The solid dispersions containing solubilizing compositions without drug were prepared without using organic solvents or tedious changes of formulation compositions. This system could be used to quickly screen the dissolution profiles of poorly water-soluble drugs by simply mixing with drugs thereafter. In case of solid dispersion containing drug, organic solvent systems could be used to solubilize model drugs. The dissolution rates of the drugs were higher when mixed with drug and solid dispersions containing solubilizing compositions. However, solid dispersions of LOS, AFC, and CSP simultaneously containing drug and solubilizing compositions in organic solvent systems were more useful than physical mixtures of drug and solid dispersions without drug except SIMS. Based on solubilizing capability of polymer based physical mixtures in gelatin hard capsules, optimal solid dispersion system of poorly water-soluble drugs could be formulated. However, it should be noted that dissolution rate of poorly water-soluble drugs were highly dependent on drug properties, solubilizing compositions and polymeric carriers.
Kim, Yu-Min;Yang, Yun Gyeong;Kim, Hye-Lim;Park, Young Shik
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.25
no.6
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pp.782-787
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2015
In this study, we developed an assay system for missense mutations in human phenylalanine hydroxylases (hPAHs). To demonstrate the reliability of the system, eight mutant proteins (F39L, K42I, L48S, I65T, R252Q, L255V, S349L, and R408W) were expressed in a mutant strain (pah-) of Dictyostelium discoideum Ax2 disrupted in the indigenous gene encoding PAH. The transformed pah - cells grown in FM minimal medium were measured for growth rate and PAH activity to reveal a positive correlation between them. The protein level of hPAH was also determined by western blotting to show the impact of each mutation on protein stability and catalytic activity. The result was highly compatible with the previous ones obtained from other expression systems, suggesting that Dictyostelium is a dependable alternative to other expression systems. Furthermore, we found that both the protein level and activity of S349L and R408W, which were impaired severely in protein stability, were rescued in HL5 nutrient medium. Although the responsible component(s) remains unidentified, this unexpected finding showed an important advantage of our expression system for studying unstable proteins. As an economic and stable cell-based expression system, our development will contribute to mass-screening of pharmacological chaperones for missense PAH mutations as well as to the in-depth characterization of individual mutations.
Ha, Dae-Geun;Koo, Jun-Mo;Park, Dam-Dae;Han, Chong-Hun
Journal of Institute of Control, Robotics and Systems
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v.21
no.9
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pp.875-880
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2015
Traditional semiconductor process control has been performed through statistical process control techniques in a constant process-recipe conditions. However, the complexity of the interior of the etching apparatus plasma physics, quantitative modeling of process conditions due to the many difficult features constraints apply simple SISO control scheme. The introduction of the Advanced Process Control (APC) as a way to overcome the limits has been using the APC process control methodology run-to-run, wafer-to-wafer, or the yield of the semiconductor manufacturing process to the real-time process control, performance, it is possible to improve production. In addition, it is possible to establish a hierarchical structure of the process control made by the process control unit and associated algorithms and etching apparatus, the process unit, the overall process. In this study, the research focused on the methodology and monitoring improvements in performance needed to consider the process management of future developments in the semiconductor manufacturing process in accordance with the age of the APC analysis in real applications of the semiconductor manufacturing process and process fault diagnosis and control techniques in progress.
Proceedings of the Korean Society of Crop Science Conference
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2017.06a
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pp.236-236
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2017
Low soil pH causes from $H^+$ rhizotoxicity results in nutrients unavailability in the growing media, inhibits plant growth, development and reduces crop yields. The present study was carried out to reveal morpholophysiological and biochemical responses of wheat (Triticum aestivum L.) to acidity stress. Four wheat varieties viz. BARI Wheat-21, BARI Wheat-25, BARI Wheat-26 and BARI Wheat-30 were used in the study. Eight-day-old seedlings were exposed to different pH levels (3.5, 4.5, 5.5 and 6.5) of growing media. Acidity stress at any level reduced biomass, water, and chlorophyll contents in all the varieties; whereas BARI Wheat-26 showed the least damage. $H^+$ rhizotoxicity also caused oxidative stress through excess production of reactive oxygen species and methylglyoxal which increase lipid peroxidation in all the varieties but the lowest oxidative damage was observed in BARI Wheat-26 due to better performance of the antioxidant defense and glyoxalase systems. Considering the growth, physiological and biochemical attributes BARI Wheat-26 may be considered as acidity stress tolerant, among the variety examined.
The purpose of this study was to assess biological river water quality by using epilithic diatoms at 40 selected sites in Geum, Youngsan, and Seomjin River systems. The sampling and analyses were performed during three seasons including January, April and June in 2005. Various water quality parameters also were analyzed. We attempted to classify the water quality condition by epilithic diatom indices (DAIpo and TDI) with the results of corresponding analyses of various chemical water quality parameters. A five class system was delivered to describe the water quality condition ranged from "very good" to "very poor." We also proposed a way of classifying water quality condition by combining two diatom indices of DAIpo and TDI. Our results showed that biomass of epilithic diatoms varied not only seasonally but spatially; it was not likely that winter diatoms represent average water quality condition, due to high concentration of nutrients. Water quality status assessed by diatom indices was generally worse than that assessed by BOD, indicating that BOD standard likely underestimates the biological condition of the water body. Importantly, nutrient-based diatom index (TDI) generally overestimated organic matter-based index (DAIpo) at most study sites, indicating that diatoms in studied rivers were likely more affected by nutrients than organic matter. Thus, management strategy to improve river water quality in Korea is suggested to emphasize more on the nutrients than organic matters.
We tested how adjuvants effect in a cancer vaccine model using an epitope derived from an autoactivation loop of membrane-type protease serine protease 14 (PRSS14; loop metavaccine) in mouse mammary tumor virus (MMTV)-polyoma middle tumor-antigen (PyMT) system and in 2 other orthotopic mouse systems. Earlier, we reported that loop metavaccine effectively prevented progression and metastasis regardless of adjuvant types and TH types of hosts in tail-vein injection systems. However, the loop metavaccine with Freund's complete adjuvant (CFA) reduced cancer progression and metastasis while that with alum, to our surprise, were adversely affected in 3 tumor bearing mouse models. The amounts of loop peptide specific antibodies inversely correlated with tumor burden and metastasis, meanwhile both TH1 and TH2 isotypes were present regardless of host type and adjuvant. Tumor infiltrating myeloid cells such as eosinophil, monocyte, and neutrophil were asymmetrically distributed among 2 adjuvant groups with loop metavaccine. Systemic expression profiling using the lymph nodes of the differentially immunized MMTV-PyMT mouse revealed that adjuvant types, as well as loop metavaccine can change the immune signatures. Specifically, loop metavaccine itself induces TH2 and TH17 responses but reduces TH1 and Treg responses regardless of adjuvant type, whereas CFA but not alum increased follicular TH response. Among the myeloid signatures, eosinophil was most distinct between CFA and alum. Survival analysis of breast cancer patients showed that eosinophil chemokines can be useful prognostic factors in PRSS14 positive patients. Based on these observations, we concluded that multiple immune parameters are to be considered when applying a vaccine strategy to cancer patients.
Succinic acid is an important precursor in industries producing biopolymers, pharmaceutical and food additives and green solvents. However, due to the high price of petroleum and the global $CO_2$ emission, the biological production of succinic acid from renewable biomass is a novel process due to the fixation of $CO_2$ into succinate during fermentation. In this study, aqueous two phase systems based on imidazolium ionic liquids/$K_2HPO_4$ were used as an effective separation and concentration process for succinic acid. Experimental results show that aqueous two phase systems can be formed by adding appropriate amount of imidazolium ionic liquids to aqueous $K_2HPO_4$ solutions in the presence of succinic acid. It can be found that the ability of imidazolium ionic liquids for phase separation followed the order [HMIm][Br]${\fallingdotseq}$[OMIm][Br]>[BMIm][Br]>[EMIm][Br]. The maximum value of extraction efficiency for succinic acid was about 90% and the amount of coextracted water into top phase is proportional to the chain length of cation in imidazolium ionic liquids. It was concluded that the aqueous two phase systems composed of imidazolium ionic liquids/$K_2HPO_4$ was effective for the selective extraction and concentration of succinic acid.
Lee, Yong Hwa;Lee, Woo Youn;Kim, Ki-Sub;Hong, Yeon Ki
Korean Chemical Engineering Research
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v.52
no.5
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pp.627-631
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2014
As an effective method for extraction of acrylic acid, aqueous two-phase systems based on morpholinium ionic liquids were used in this study. Effects of the alkyl chain length of cation in morpholinium ionic liquids on phase diagram and extraction efficiencies were investigated. Experimental results show that aqueous two phase systems can be formed by adding appropriate amount of morpholinium ionic liquids to aqueous $K_2HPO_4$ solutions. It can be found that the ability of morpholinium ionic liquids for phase separation followed the order [HMMor][Br]>[OMMor][Br]>[BMMor][Br]>[EMMor][Br]. There was little difference between binodal curves of imidazolium ionic liquids and those of morpholinium ionic liquids. 50~90% of the extraction efficiency was observed for acrylic acid by aqueous two phase extraction of acrylic acid with morpholinium ionic liquids. It can be concluded that morpholinium ionic liquids/$K_2HPO_4$ were effective for aqueous two phases extraction of acrylic acid comparing to imidazolium ionic liquids/$K_2HPO_4$ systems because of their lower cost.
To examine the taxonomic position and affinities of Isopyrum mandshuricum (Ranunculaceae) and related taxa, genetic analysis were carried out on the basis of isozyme patterns and ITS sequences. Molecular data, both isozyme patterns and ITS sequences suggest that I. mandshuricum is closely related to Enemion raddeanum than to Semiaquilegia adoxoides. The estimation of genetic identities by isozyme analysis reveals that I. manshuricum is genetically distant from E. raddeanum. The phylogenetic tree based on molecular data is rather congruent with the phenogram based on quantitative morphological characteristics, but not consistent with one based on qualitative morphological characteristics. Incongruencies between molecular and qualitative morphological data provide clues to re-evaluate several morphological features.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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