In this paper, a rapid and reliable gene-targeted species-specific polymerase chain reaction (PCR) technique based on a two-step process was established to identify bifidobacteria in dairy products. The first step was the PCR assay for genus Bifidobacterium with genus specific primers followed by the second step, which identified the species level with species-specific primer mixtures. Ten specific primer pairs, designed from nucleotide sequences of the 16-23S rRNA region, were developed for the Bifidobacterium species including B. angulatum, B. animalis, B. bifidum, B. breve, B. catenulatum, B. infantis, B. longum, B. minimum, B. subtile, and B. thermophilum. This technique was applied to the identification of Bifidobacterium species isolated from 6 probiotic products, and four different Bifidobacterium spp. (B. bifidum, B. longum, B. infantis, and B. breve) were identified. The findings indicated that the 16S-23S rDNA gene-targeted species-specific PCR technique is a simple and reliable method for identification of bifidobacteria in probiotic products. PCR combined with Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) for identification of the bifidobacteria was also evaluated and compared with the gene-targeted species-specific technique. Results indicated that for fermented milk products consistency was found for both species-specific PCR and PCR-DGGE in detecting species. However, in some lyophilized products, the bands corresponding to these species were not visualized in the DGGE profile but the specific PCR gave a positive result.
Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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1997.04a
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pp.83-83
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1997
사람의 장내에 서식하는 장내세균은 사람의 건강을 지켜주는 유용균과 나쁜 영향을 주는 유해균이 있으며 이들 양자의 균형에 의하여 건강상태가 조절되고 있다. 사람의 건강에 대단히 중요한 역할을 하는 유용균의 대표적인 것이 Bifidobacterium이다. 이 Bifidobacterium은 장내에서 lactic acid 및 acetic acid를 생산하여 장내의 pH를 산성으로 유지시키고 부패균의 증식을 억제하는 역할을 하며 신체를 유해세균의 작용으로부터 방어하는 역할을 하고 있다. 현재 우리나라에서 사용하고 있는 Bifidobacterium은 대부분 외국에서 개발된 것으로 한국인에게 어느 정도 효과가 있는지에 대해서는 아직 정확한 보고가 없으며 한국인의 장내균총으로부터 유산균이 분리된다면 한국인에게 가장 잘 정착될 수 있는 균주일 것으로 생각된다.
Bifidobacteria comprises up to 25% of the cultivable fecal bacteria in adults and 80% in infants. Many in vivo and clinical research results supporting its efficacy in the prevention and improvement of gastrointestinal health have been accumulated. As a consequence, expert committee WHO/FAO expert committee recommended Bifidobacterium as representative probiotics together with Lactobacillus acidophilus. In this review, research trends in bifidobacteria concerning the classification and identification of the genus Bifidobacterium, modulation of intestinal microflora, improvement of constipation, prevention of diarrhea, alleviation of atopy and allergy, barrier function through antimicrobial activity andimmune enhancement of the host will be introduced. Several gene expression systems based on bifidobacterial plasmids have been developed and successfully used to express several heterologous genes including anticancer proteins in Bifidogacterium. In animal test, bifidobacteria was proven to be a promising candidate for safe gene delivery system which can specifically colonize in the solid tumor.
Park, Myeong-Soo;Yoon, Hyeon-Jin;Rhim, Seong-Lyul;Ji, Geun-Eog
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.11
no.1
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pp.106-111
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2001
A ${\beta}-galactosidase$ gene of Bifidobacterium adolescentis Int57 (INT57) was cloned using the shotgun method. The sequence of the ${\beta}-galactosidase$ gene existing in the sequenced 3,260-bp fragment showed higher than 40% homology with other bacterial ${\beta}-galactosidase$ genes. The expression in Escherichia coli suggested that the ${\beta}-galactosidase$ might have a monomeric, dimeric, or tetrameric protein structure. This is probably the first peer-reviewed sequence analysis of the ${\beta}-galactosidase$ gene of the genus Bifidobacterium.
Park, Hae-Young;Han, Myung-Joo;Choi, Eung-Chil;Kim, Dong-Hyun
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.31
no.4
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pp.1096-1100
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1999
The protective effect of Bifidobacterium breve K-110, K-111 and B. infantis K-525 on carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats was investigated. Among them, B. infantis K-525 had the most potent hepatoprotective activity. It reduced serum aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase levels to 51% and 80% of the $CCl_{4}-treated$ groups, respectively. In rat liver homogenate intoxificated with $CCl_{4}$, B. infantis K-525 inhibited in vitro as well as in vivo lipid peroxidation more than the other Bifidobacteria.
Bifidobacterium bifidum, one strain of medical preparations being on the market for human intestinal disorder, is very sensitive to rifampicin. If this preparation is taken with rifampicin, its therapeutic effect can't be expected. To develope rifampicin resistant mutants, B. bifidum was treated with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG). All of thirty strains grown on the plates containing 10 $\mu\textrm{g}$/ml rifampicin were over 1, 000 times more resistant to rifampicin than parental strain and they were identified as B. bifidum by fructose-6-phosphoate phosphoketolase test. Three strains out of thirty, which produced almost same amount of organic acid as parental strain, were selected for further studies. They showed identical growth inhibition activity aganist E. coli compared with that of parental strain. And rifampicin was not inactivated.
Proteins secreted from bifidobacteria are believed to play important roles in human intestines via interacting with different host cells. In this respect, proteins secreted from Bifidobacterium pseudocatanulatum BP1, which has been rarely studied, were analyzed by two-dimensional gel electrophoresis (2DE). Using this approach, approx-imately 21 protein spots on a 2DE gel were detected and 10 of these spots were identified by mass spectrometry. Five spots were identified as hypothetical proteins and the remaining 5 spots were identified as a putative iron-side-rophore binding lipoprotein, a short-chain dehydrogenase/reductase SDR, an exonuclease, cytochrome P450 hydroxylase, and a putative dehydrogenase. The identification of secreted putative iron-siderophore binding lipoprotein was highly interesting since it is an important protein that is involved in ferric iron uptake in pathogenic bacteria. This finding could accelerate studies on the probiotic effect of Bifidobacterium by explaining the competition between bifidobacteria and intestinal pathogens for ferric iron.
Bifidobacterium infantis K-525 isolated from healthy Korean was susceptible to rifampicin and fluoroquinolones and resistant to other antituberculosis agents. When the preparation of this strain is taken as a therapeutics for human intestinal disorders with rifampicin or fluoroquinolones, its therapeutic effect can not be expected. So, B, infantis RFR-525 resistant to rifampicin was obtained by treating the parent B. infantis 525 with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. B. infantis OFR-525 was produced by serial passage of B. infantis RFR-525 on agar with 2-fold minimal inhibitory concentration of ofloxacin. B. infantis OFR-525 was resistant to antituberculosis agents and fluoroquinolones up to 4∼128 fold higher than that for the original strain. The resistance of B. infantis OFR-525 against rifampicin and ofloxacin was maintained in vivo and in vitro. Conclusively, B. infantis OFR-525 can be regarded as a promising strain which can be developed as the preparation for the treatment of the intestinal disorders of the tuberculosis patients under rifampicin and ofloxacin therapy.
Phytase activity was examined with various bifidobacterial strains cultured statically in MRS broth at $37^{\circ}C$ for 48 hr. Seven Bifidobacterium species showed mostly an intracellular phytase activity, though their specific activities were very low. The highest specific activity was found in Bifidobacterium animalis B33 strain, among 7 bifidobacteria tested. The specific activity was highest during the exponential growth phase. Carbohydrates and the concentration of phosphorus sources had an effect on the phytase activity and bacterial growth. Glucose was the most favorable carbohydrate for the phytase activity. Phytate inhibited the cell growth, and phytase activity decreased with increase of phytate concentration. The phytase activity was even higher in the static microaerophilic growth than that in anaerobic state, despite the stimulated growth in anaerobic growth. The optimal pH ranges were comparatively broad, but the optimal temperatures were $50^{\circ}C$ for all tested strains. The phytase activity was most active at pH 6.5 and $50^{\circ}C$ for B. animalis B33 strain.
The polysaccharide (BB-pol) extracted from Bifidobacterium bifidum BGN4 showed growth inhibitory effects on several colon cancer cell lines such as HT-29 and HCT-116. To increase the yield of polysaccharide, B. bifidum BGN4 was cultured in various culture media with different compositions. When B. bifidum BGN4 was cultured in modified MRS broth containing phytic acid, the cells showed increased branch formation and enlarged morphology. The content of total carbohydrate and the ability of adhesion to intestinal epithelial cells were also increased by phytic acid. The polysaccharide obtained from the cells grown in the presence of phytic acid inhibited the proliferation of cancer cell lines such as HT-29 and MCF-7 cells but not normal colon cell line, FHC. Taken together, Bifidobacterium grown in the presence of phytic acid may confer enhanced beneficial function for the host.
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