국내 시판 19종의 드링크 및 18종의 액상 요구르트 제품에 함유된 2종의 유산균인 Lactobacilli 및 Bifidobacteria의 내산성을 인공위액(pH 1.5) 조건에서 비교 고찰되었다. 드링크 및 액상 요구르트 제품중 초기 Lactobacilli의 생존율은 각각 $10^8~10^{10}$ cfu/ml 및 $10^6~10^{10}$cfu/ml 범위 내에 있었다. 한편 드링크 요구르트 중 초기 Bifidobacteria의 생존율 $10^8~10^{10}$cfu/ml 이었다. 요구르트 제품중 Lactobacilli 및 Bifidobacteria의 생존율은 인공위액에 노출 시간이 증가함에 따라 점차 감소하는 경향을 나타내었으며 120분 노출시에 제품들간에 큰 차이를 나타내었다. (<$10^3~10^6$cfu/ml),캡슐을 함유한 요구르트 제품의 경우, 캡슐을 제외한 Mix는 인공위액에 30분에서 120분 노출시에 약$10^5$cfu/ml이상의 생존율을 나타내었으며 타사 제품과 유사한 거동을 보였다. 그러나 Bifidobacteria를 함유한 캡슐요구르트 제품의 경우 인공위액에 약 120문 노출시켰으때 타사 제품보다 생존율이 약10~737배 이상 증가하였다. 즉 Bifidobacteria의 내산성은 코팅물질을 사용한 캡슐로 봉입하였을 때 증가됨을 알 수 있었다.
건강한 성인의 분변에서 분리한 내산성 및 내담즙성이 우수한 B. longum BO-11을 김치 제조용 스타터로 이용하여 그 생존 능력과 김치 발효에 미치는 영향에 대해 조사하였다. 발효과정 중 bifidobacteria의 계수는 BS 배지를 사용하였으며 20일의 저장 기간 동안 균수가 약간 증가하였다. 일반 미생물은 bifidobacteria 비첨가군과 비슷하였으며 bifidobacteria 첨가군의 경우 산의 생산이 더 많았다. 김치 맛은 일반 김치보다 bifidobacteria 첨가 김치가 더 우수하였다. 이러한 결과는 bifidobacteria를 이용한 기능성 김치의 상업화 가능성을 보여준다.
Selective agar media were constructed for the counting of bifidobacteria in dairy produ- cts containing bifidobacteria, lactobacilli and streptococci. This media containing antibiotics inhibited the growth of lactobacilli and streptococci at less than 10$^{5}$ cfu/ml, but had no influence on the recovery of bifidobacteria. In order to inhibit the growth of 10$^{5}$ cfu/ml of lactobacilli and streptoco- cci, the addition of 1.0~2.0 $\mu$g/ml of tetracycline in BL agar medium was needed. When 25 $\mu$g/ml of neomycin and paromomycin were mixed with 1.0 $\mu$g/ml of tetracycline in BL agar medium, it was able to inhibit the growth of 10$^{6}$ cfu/ml of lactobacilli and streptococci but had a little negative effect on the recovery of colonies of bifidobacteria. The results revealed that the BL agar medium containing 1.0 $\mu$g/ml of tetracycline was suitable to count the cell number of bifidobacteria selecti- vely in the presence of a 1 to 10$^{5}$-fold excess of L. casei, L. acidophilus and S. salivarius subsp.thermophilus.
Bifidobacteria 또는 lactobacilli와 같은 유익균에 대해 생육촉진효과를 나타낸 쑥의 물추출물에서 생육촉진성분를 조사하였다. 쑥의 물추출물을 탄소원 생육인자 검색배지인 PYF와 비탄소원 생육인자 검색배지인 $Gy{\ddot{o}}rgy$에서 조사한 결과, 탄소원이 주요한 생육촉진인자로 나타났다. Bifidobacteria는 쑥의 가용성당류 중에서 단당류 및 중합도가 2-5인 올리고당을 잘 이용하는 것으로 나타났다. 그리고 bifidobacteria가 이용한 올리고당을 chacoal-celite column chromatography와 Bio-gel $P_2$ column chromatography로 분리한 다음, 가수분해하여 HPLC로 구성당의 조성을 조사한 결과 galactose와 glucose가 주요 구성당으로 밝혀졌다.
산양유을 섭취한 성인의 분변 내 bifidobacteria의 증식 효과 및 분변에서 분리된 bifidobacteria와 lactobacilli의 당 발효 능력을 조사하였다. 1. 산양유를 섭취한 처리군이 대조군보다 bifidobacteria 세균수가 상대적으로 높았으며, 8주에서 95% 신뢰한계에서 유의성이 있었다. 2. 분변에서 분리한 균주들을 13 균주의 16S rRNA 염기서 열로 동정한 결과, 산양유를 섭취한 처리구는 B. adolescentis, B. longum, B. pseudocatenulatum, B. dentium, L. sakei 순으로 분리되었다. 대조군의 12 균주는 B. adolescentis, B. longum, L. ruminis, L. sakei, B. pseudocatenulatum 순으로 분리되었다. 3. 산양유 올리고당과 lactulose는 모든 bifidobacteria 및 lactobacilli 균주가 발효하였다. Fructooligosaccaride는 B. adolescentis 7 균주 모두 발효하였다. 조사한 B. pseudocatenulatum 4 균주, L. sakei 3 균주, B. longum 7 균주 중에서 각각 3, 2, 1 균주가 fructooligosaccharide를 발효하였다.
Bifidobacteria의 효과적인 이용을 위해서는 산소에 내성을 갖는 균주를 선발하는 연구 외에도 산소 스트레스에 대한 방어 기작에 대한 기초적인 연구가 필요하다. 인체로부터 분리된 산소 내성 bifidobacteria는 산소제거활성을 가지고 있었으며 이는 열처리 및 극단적인 pH(pH 2.0)하에서 산소제거활성이 소실되는 것으로 보아 효소가 관여 할 가능성을 확인하였다. 또한 산소제거활성을 보이는 주된 효소를 탐색해본 결과 NADH를 공급하였을 때만 산소제거활성을 보여 NADH oxidase가 주된 역할을 하는 효소임을 알 수 있었다. 또한 산소 내성 균주는 높은 NADH peroxidase 활성을 보유한 것으로 보아 NADH oxidase의 작용에 의해 생성되는 $H_2O_2$는 NADH peroxidase에 의해 무독화 되는 것으로 판단되었다. 배양 중 산소를 공급하여 산소스트레스를 주었을 경우 NADH oxidase와 NADH peroxidase 활성이 1시간 이내에 급격히 증가하였고 산소 공급 후 2시간 동안 배양액 중 용존 산소가 크게 증가하지 않았다. 산소공급 후 2시간 이상이 경과하면 NADH oxidase와 NADH peroxidase활성이 감소하고 용존 산소가 급격히 증가하였고 산소스트레스에 대한 방어 체계가 붕괴되는 현상이 관찰되었다. 즉, 산소 내성 bifidobacteria는 일정 한계까지는 환경중의 산소를 NADH oxidase로 제거하고 생성되는 $H_2O_2$는 NADH peroxidase에 의해 제거시키는 방어 체계를 갖고 있음을 알 수 있었다.
Bifidobacteria are probiotic organisms that provide both flavor and health benefits when incorporated as live cultures into commercial dairy products. Because bifidobacteria are very sensitive to environmental conditions (acids, temperature, oxygen, bile salts, the presence of other cultures, etc.), their viability in human gastrointestinal tract is limited. The microencapsulation of bifidobacteria is a process to protect them against harsh environmental conditions, thereby increasing their viability while passing through human gastrointestinal tract. To confirm the survival rate of microencapsulated Bifidobacterium breve CBG-C2 in milk, their survival rate was compared with several kinds of free bifidobacteria and lactic acid bacteria in commercial yogurt products under simulated gastric and small intestinal conditions. Double-microencapsulation of the bacteria was employed to increase the survival rate during digestion. The outer layer was covered with starch and gelatin to endure gastric conditions, and the inner layer was composed of a hard oil for the upper small intestinal regions. Almost all microencapsulted bifidobacteria in the milk survived longer than the free bifidobacteria and lactic acid bacteria in the commericial yogurt products under the simulated gastric conditions. Numbers of surviving free bifidobacteria and lactic acid bacteria in the commercial products were significantly reduced, however, the viability of the microencapsulated bificobacteria in the milk remained quite stable under gastric and small intestine conditions over 3$\sim$6 hrs. Thus double-microencapsualtion of bifidobacteria in milk is a promising method for improving the survival of bifidobacteria during the digestive process.
To study the relationship between oxygen tolerance and enzyme activity in the oxygen metabolism of bifidobacteria, the activities of catalase, superoxide dismutase (SOD), NADH oxidase and NADH peroxidase from six typical bifidobacteria and other bacteria were assayed by spectrophotometry. Catalase activity was hardly detected in any of the bifidobacteria tested. SOD activity was detected in every species including the Clostridium species. In particular SOD activity was notably high in the aerosensitive Bifidobacterium adolescentis. This fact indicates that SOD activity is not a critical factor to ensure aerotolerance. Aerosensitive B. adolescentis showed very low NADH oxidative enzyme activity whereas other aerotolerant bifidobacteria exhibited considerable activity for the enzymes. It seems that detoxification of $H_2O_2$ by NADH oxidative enzymes might be an important factor in improving for aerotolerant bifidobacteria survival rates in an oxygen environment.
In recent years, the knowledge about bifidobacteria has considerably evolved thanks to recent progress in molecular biology. The analysis of the whole genome sequences of 48 taxa of bifidobacteria offers new perspectives for their classification, especially to set up limit between two species. Indeed, several species are presenting a high homology and should be reclassified. On the other hand, some subspecies are presenting a low homology and should therefore be reclassified into different species. In addition, a better knowledge of the genome of bifidobacteria allows a better understanding of the mechanisms involved in complex carbohydrate metabolism. The genome of some species of bifidobacteria from human but also from animal origin demonstrates high presence in genes involved in the metabolism of complex oligosaccharides. Those species should be further tested to confirm their potential to metabolize complex oligosaccharides in vitro and in vivo.
Bifidobacteria have been known as beneficial inhabitant of human intestine. Therefore, bifidobacteria began to be noticed as a starter in the manufacture of fermented dairy products. Perhaps the key for effective use of bifidobacteria in commercial dairy products is the maintenance of viability of bifidobacteria during large scale preparation of starter culture and distribution of products. So we tried to obtain the bifidobacteria having suitable characteristics for using as a starter in the manufacture of fermented dairy products. Among bifidobacteria isolated from Korean, E-4 strain showed the highest resistance to oxygen. To know whether the selected strain will be fit for manufacture of fermented dairy products, we also investigated resistance of the selected strain to HCI. The selected strain, E-4, was more resistant to environmental stresses such as oxygen, H2O2 and HCI than Bifidobacterium longum known as resistant strain to environmental stresses. According to carbohydrate fermentation patterns and morphological characteristics, E-4 strain was identified as B. bifidum. In conclusion, the selected strain, E-4, was thought to be fit for manufacture of fermented dairy products.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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