• Applied Biological Chemistry
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• 제50권1호
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• pp.18-22
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• 2007

토마토시들음병 방제균주인 Bacillus thuringiensis BK4의 항진균성 항생물질의 대량생산조건을 확립하였고, 항생물질 BK4를 조정제 수준에서 in vitro, in vivo pot 실험을 통해 실제 토마토 시들음병에 대한 토양내 방제력을 검증하였다. B. thuringiensis BK4는 탄소원으로 0.5% xylose, 질소원으로 0.2% peptone No. 3, 5 mM $CaCl_2$를 첨가하였을 때 토마토 시들음병균인 Fusarium oxysoporum에 대한 항진균활성과 균체생산량이 가장 높았으며 또한, B. thuringiensis BK4가 생산하는 항진균성 항생물질 BK4를 조정제 수준에서 in vivo pot 실험을 통해 토마토 시들음병균인 F. oxysoporum에 대한 방제력이 탁월하다는 것을 확인하였다. B. thuringiensis BK4의 균체와 조정제수준의 항생물질 BK4를 병용처리 하였을 경우 각각을 단독으로 처리하였을 때와 비교하여 상가(相加)효과를 확인할 수 있었으며, 기대했던 상승(相乘)효과는 확인하지 못하였다. B. thuringiensis BK4가 생산하는 항생물질 BK4를 Sephadex LH-20 column chromatography와 prep-HPLC를 통해 retention time이 38min인 단일물질로 정제할 수 있었으며, 정제된 항생물질의 MIC(Minimum Inhibition Concentration)를 측정한 결과 50${\mu}$g/ml이었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권4호
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• pp.240-245
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• 1991

We have constructed a promoter-probe vector pKU20 using pKT230, a derivative of broad-host-range plsmid RSF1010, as a base. The pKU20 contains structural gene for aminoglycoside phos-photransferase (aph), without promoter, and a multiple cloning site upstream the aph. Using this vector, a 412base pairs (bp) PstI fragment showing strong promoter activity both in Escherichia coli LE392 and Pseudomonas putida KCTC1644 has been cloned from Pseudomonas fluorescens chromosomal DNA on the basis of streptomycin resistance. The nucleotide sequence of the 412 bp fragment has been determined and the putative - 35 and -10 region was observed. Insecticidal protein gene of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 inserted on downstream of the promoterlike DNA fragment was efficiently expressed in E. coli and P. putida. The toxin protein was efficiently synthesized in an insoluble form in both strains.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제6권1호
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• pp.21-24
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• 2004

A modified $\delta$-endotoxin gene of Bacillus thuringiensis ssp. tenebrionis (B.t.t.), encoding a coleoptera-specific toxin, was utilized to transform citrus plants, Citrus reticulata Blanco 'Ponkan' mandarian. By co-culturing the nucelli with Agrobacterium tumefaciens harboring the modified gene in the binary vector pBinAR-Btt, the chimeric toxin gene was transferred into citrus plants. The transgenic plants were selected on modified Murashige and Skoog medium containing kanamycin. Hybridization experiments demonstrated that the transgenic plants contained and expressed the toxin protein gene.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.295-300
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• 1989

B. thuringiensis가 생산하는 살충성 독소 단백질의 생태학적 응용방법을 개발하기 위한 목적으로 우선 독소 단백질 유전자를 옮겨 발현시키기에 적합한 숙주 미생물의 분리작업을 수행하였다. 국내 주요농산물인 고추, 감자, 무우 등 7가지 농작물의 뿌리부근에 군락을 형성하는 35종의 형광성Pseudomonas들을 분리하였고 독소 단백질 유전자를 함유하는 재조합 plasmid에 대한 숙주로서의 이응가능성을 검토해 보기 위하여 분리균주 35주에 대한 형질전환을 실시한 결과 4주에 독소 단백질 유전자의 도입이 가능하였고 생물검정과 면역학적인 방법 등에 의한 결과 BT 독소 유전자의 발현을 확인하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제8권6호
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• pp.685-691
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• 1998

Baculovirus Hyphantrin. cunea nuclear polyhedrosis virus (HcNPV) insecticide containing the insecticidal protein (ICP) gene from Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD1 was constructed using a lacZ-HcNPV system. The ICP ($\delta$-endotoxin) gene was placed under the control of the polyhedrin gene promoter of the HcNPV. A polyhedrin-negative virus was derived and named ICP-HcNPV insecticide. Then, the insertion of the ICP gene in the ICP-HcNPV genome was confirmed by Southern hybridization analysis. Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) analysis of the Spodoptera frugiperda cell extracts infected with the ICP-HcNPV showed that the ICP was expressed in the insect cells as 130 kDa at 5 days post-infection. The ICP produced in the cells was present in aggregates. When extracts from the cells infected with the ICP-HcNPV were fed to 20 Bombyx mori larvae, the following mortality rate was seen; 8 larvae at 1 h, 10 larvae at 3 h, and 20 larvae at 12 h. These data indicate that the B. thuringiensis ICP gene was expressed by the baculovirus insecticide in insect cells and there was a high insecticidal activity. The biological activities of the recombinant virus ICP-HcNPV were assessed in conventional bioassay tests by feeding virus particles and ICP to the insect larvae. The initial baculovirus insecticide ICP-HcNPV was developed in our laboratory and the significance of the genetically engineered virus insecticides is discussed.

• Applied Microscopy
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• 제13권1호
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• pp.63-70
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• 1983

The cell division of Bacillus thuringiensis are studed by a electron microscope. It was observed that when the cell division was occurred, the bacterial transverse septeum was centripetally formed, and the bacterial spore was divided into two daughter cells. The fore spore septum was initiated by invagination from either sides of the cell membranes, and was easily distinguished it from the transverse septum of the vegetative cell division. The large vesicular mesosome was. observed at one end of the cell membrane. The nucleoids were of variously irregular shapes and had no a nuclear membrane. The morphology of the bacteria was visualizd by a scanning electron microscope. The surface of the cell was generally rough and had a single polar flagellum, which was appeared to be $0.2{\mu}$ in width and $13{\mu}$ in length.

• 한국응용곤충학회지
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• 제48권1호
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• pp.101-108
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• 2009

벼에 발생하여 잎을 가해하여 피해를 주는 혹명나방(Cnaphalocrosis medinalis)과 벼애나방(Naranga aenescens)의 곤충병원성미생물을 이용한 친환경적 방제를 위해, 국내토양에서 분리된 Bacillus thuringiensis 균주들을 대상으로 생물검정을 수행하였다. 실험에 이용한 Bt 53균주 중, 약 18개 균주가 혹명나방에 90% 이상의 살충률을 나타내었고, 13개 균주가 벼애나방에 살충활성을 보였는데, 두 종 모두에 90% 이상의 살충률을 보이는 균주도 CAB141균주를 비롯해 11균주나 확인되었다. 이러한 균주들은 혹명나방에 대한 실내방제실험결과, 96%이상의 방제효과를 나타내기도 하였다. 또한 Bt 포자현탁액에 노출된 유충의 용화율, 용길이, 우화율이 감소되는 경향이 나타났는데, 혹명나방의 경우, 번데기 길이에서도 정상개체와 처리 후 생존개체가 현저한 차이를 나타내었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제47권1호
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• pp.87-93
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• 2008

국내 토양으로부터 분리한 Bacillus thuringiensis 균주에서 담배거세미나방(Spodoptera litura)에 선택적으로 살충효과를 나타내는 새로운 균주를 선발하였다. 이 균주의 결정성 독소단백질은 위상차 현미경과 주사전자현미경으로 관찰한 결과 전형적인 이중피라미드 형태이며 H serotype으로 동정한 결과 Bacillus thuringiensis subsp. CAB 109로 동정되었다. 난방제 해충인 담배거세미나방 3령충에 대해 B. t. subsp. aizawai CAB 109균주외 분리된 다른 3균주의 생물활성을 비교 검토하였다. 살충활성 결과에서 B. t. subsp. aizawai CAB 109 균주가 $1.3{\times}10^7$ (cfu/ml)에서 100% 사망률로 다른 균주에 비해 높은 활성을 나타내었다. 담배거세미나방은 배추좀나방과 다르게 7일 이상 경과한 뒤에야 100% 사충률을 나타내었다. 한편, 담배거세미나방 2령, 3령, 4령충에 대한 살충활성의 검정에서 B. t. aizawai subsp. CAB 109 균주의 $LD_{50}$값이 각각 $9.78{\times}10^5,\;6.87{\times}10^6,\;1.83{\times}10^7$ (cfu/ml)으로 살충활성을 나타내었다. B. t.를 섭식한 담배거세미나방 유충의 사망 현상은 지효성이며 대조군보다 무게가 $6{\sim}7$배정도 적으며 다음 령기로 성장하지 못하고 죽었다. 또한 B. t. subsp. aizawai CAB 109 균주의 SDS-PAGE에서의 단백질 패턴과 trypsin을 처리한 단백질의 결과에서 기존의 B. t. subsp. aizawai와 CAB 109균주와의 차이점은 발견할 수 없었다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제18권1호
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• pp.18-27
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• 2009

B. thuringiensis strain LY-99 belonging to subsp. alesti (H3a3c), was isolated from Chinese tobacco warehouse and showed significantly high toxicity to Plutella xylostella. For the identification of the cry1-type genes from B. thuringiensis LY-99, an extended multiplex PCRrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) method was established by using two pairs of universal primers based on the conserved regions of the cry1-type genes to amplify around 2.4 kb cry1-type gene fragments. Then the DNA fragment was cloned into pGEM-T Easy vector and digested with EcoRI and EcoRV enzymes. Through this method, a known cry1-type gene was successfully identified from the reference strain, B. thuringiensis subsp. alesti. In addition, the RFLP patterns revealed that B. thuringiensis LY-99 included a novel cry1A-type gene in addition to cry1Aa, cry1Ac, cry1Be and cry1Ea genes. The novel cry1A-type gene was designated cry1Ah2 (Genbank accession No DQ269474). An inverse PCR method was used to amplify the flank regions of cry1Ah2 gene. Finally, 3143 bp HindIII fragment from B. thuringiensis LY-99 plasmid DNA including 5' region and partial ORF was amplified, and sequence analysis revealed that cry1Ah2 gene from LY-99 showed 89.31% of maximum sequence similarity with cry1Ac1 crystal protein gene. In addition, the deduced amino acid sequence of Cry1Ah2 protein shared 87.80% of maximum identity with that of Cry1Ac2. This protein therefore belongs to a new class of B. thuringiensis crystal proteins.

• KSBB Journal
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• 제15권3호
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• pp.219-225
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• 2000

Bacillus thuringiensis를 생물농약으로 이용하기 위해서는 고농도의 포자형성에 의한 높은 살충성의 8 -endotoxin를 생산하는 것이 중요하다. 따라서 본 연구에서는 B. thuringiensis의 고농도 배양에 의한 높은 포자형성 수율을 얻기 위하여 40%의 용존산 소량과 $28^{\circ}C$에서 여랴 가지 방법의 유가식 배양법을 검토하였다. 최종 배양액의 glucose 농도가 50 g/L가 되도록 하는 경우의 유가식 배양에서는 continuos fed-batch culture의 linear gradient f feeding 법에 의하여 $9.37{\times}109$ cell/mL의 최대 생존 세포 수와 8 8.33 X 109 spore/mL의 최대 포자 수를 얻었으며, 이때의 포자 형 성율은 88.9% 이었다 최종 배양액의 glucose 농도가 100 m/L가 되도록 하는 경우의 유가식 배양에서는 intermittent fed-batch culture의 pH-stat 법에 의하여 $1.35{\times}1010$cell/mL의 최대 생존 세포 수와 $1.35{\times}1010$ spore/mL의 최대 포자 수를얻었으며, 이 때의 포자 형성율은 97.8% 이엇다.