섬유소를 비롯한 단백질, 지질, 녹말을 분해할 수 있는 세균을 된장으로부터 분리하여 동정한 결과 Bacillus subtilis로 분류되었으며, Bacillus subtilis CK-2로 명명하였다. 분리균주는 $40\sim45^{\circ}C$의 비교적 넓은 온도 범위와 pH 6~9의 넓은 pH 범위, 그리고 NaCl 0~3% 범위에서 잘 자랐으며, 높은 자가분해효소 활성을 갖는 것을 알 수 있었다. B. subtilis CK-2가 분비하는 가수분해효소들은 대부분 세균의 생장과 거의 비례적으로 세포외 활성을 나타내는 1차 대사산물로 확인되었다. 이상의 결과로부터 B. subtilis CK-2는 농수임산물 폐기물이나 음식물 폐기물의 퇴비화, 사료 생산 등에 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각한다.
A gene coding for mannanase (manA) from Bacillus subtilis was introduced into a shuttle vector pGK12 between Escherichia coli, B. subtilis and Lactobacillus paracasei. As a result of transferring the resultant plasmid, designated pGK12M3, into three different strains, the manA gene was found to be expressed in L. paracasei as well as in B. subtilis and E. coli. In a 4 L fermentor culture, the production of mannanase by recombinant L. paracasei (pGK12M3) reached a maximum level of 5.4 units/ml in an MRS medium with a fixed pH 6.5. Based on the zymogram of mannanase, it is assumed that mannanase produced by recombinant L. paracasei is not maintained stably with proteolytic degradation. The optimal temperature and thermostability of mannanase produced by recombinant L. paracasei were also found to be different from those of enzymes produced by B. subtilis.
The study was carried out to investigate for the property of Bacillus strains, on the native growthed microflora in Korean native soybean paste, and Bacillus strains of the high enzyme producing, were selected and identificated, from the microflora, that is, identificated Bacillus strains beared resemblance to B. subtills, on the colony, appearance was pellicle, surface's spreading, color creamy-thin browned, colony elevation flated, and edge lobated, the identfficated B. subtills strain named for the B. subtilis SCF. For the protease activity of B. subtilis SCF, according to the variation with pH, the pH stability was pH 7~8, and on the its protease activity, optimum temperature was 40$\circ$C, on the other hand, temperature of the highest stability of the protease was 50$\circ$C.
A ${\beta}$-1,4-endoglucanase gene from Bacillus subtilis H12 was cloned into Escherichia coli JM109 (pBC8) and sequenced. The endoglucanase gene with an insert DNA of 2.5 kb possessed an open reading frame of 1,500 bp encoding a mature protein of 499 amino acids with a calculated molecular mass of 55 kDa. The deduced amino acid sequence showed similarity to those of the known neutral cellulase genes of B. subtilis PAP115 (99.2%) and BSE616 (97.8%), as well as the alkaline gene of Bacillus sp. N4 (55.1%). The endoglucanase activity expressed by E. coli (pBC8) was localized in the periplasmic fraction (80%) and the cytoplasmic fraction (20%). An endoglucanase was purified from the periplasmic fraction by performing gel filtration and anion exchange chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 31 kDa by SDS-PAGE, and the maximum activity occurred at pH 7 and $40^{\circ}C$. The enzyme easily hydrolyzed soluble substrates such as carboxymethyl cellulose and barely ${\beta}$-glucan, whereas the sigmacell and xylan, the known insoluble substrates, were not entirely hydrolyzed.
Park, Sung-Yong;Yang, Yong-Jae;Kim, Young-Bae;Hong, Jae-Hoon;Lee, Chan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권2호
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pp.228-234
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2002
Bacillus subtilis CAU131 (KCCM 10257) isolated from a fermented shrimp product produces subtilein, tentatively named as a bacteriocin, which exhibited a bactericidal effect against closely related species such as Bacillus subtilis ATCC 6633, Bacillus cereus ATCC 11778, and several other strains of Bacillus sp. The purification of the subtilein was achieved by applying a mono-Q anion exchange chromatography on FPLC and $C_18$ reverse-phase chromatography on HPLC. After purification, specific activity of subtilein was increased about 3,000-fold compared with culture broth and its molecular mass was about 5,000 Da on SDS-PAGE. The antimicrobial activity of subtilein was well maintained at acidic and neutral pHs between 3 and 8. Subtilein was relatively heat stable, and its antimicrobial activity remained for 2 h at $80^{\circ}C$. However, the activity was reduced after heating at $100^{\circ}C$, and about $80\%$ of the activity was found after 1 h incubation at $100^{\circ}C$. The treatment of Bacillus subtilis ATCC 6633 with subtilein led to morphological changes in stationary-phase cells and most cells appeared to be lysed.
Adewumi, Gbenga Adedeji;Grover, Sunita;Isanbor, Chukwuemeka;Oguntoyinbo, Folarin Anthony
한국미생물·생명공학회지
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제47권4호
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pp.498-508
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2019
Bacillus species were isolated from iru, a traditional fermented condiment in Nigeria. Polyphasic approach was used to evaluate the phylogenetic relationship and strain sub-type of the isolated species. Additionally, the phylogenetic profiles of the species isolated from iru were compared with those of bacilli isolated from different continents. The phylogenetic diversity analysis was performed using the combination of 16S rRNA gene sequencing, ITS-PCR, ITS-PCR-RFLP, and M13 RAPD-PCR. The analysis revealed that Bacillus subtilis U170B and B. subtilis U146A isolated from iru were the closest relatives of strains belonging to the phylogeny of B. subtilis sensu stricto and were related to other bacilli isolated from different continents that had functional benefits. The two isolated species exhibited resistance to acidic pH (pH 2.0). The survival rates of B. subtilis U170B, B. subtilis U146A, and B. clausii UBBC-07 (commercial probiotic strain) cultured at pH 2.0 for 3 h were 33.45, 12.44, and 9.53%, respectively. The strains were highly tolerant to bile salts [0.3% (w/v)]. B. subtilis U170B exhibited the highest cell viability (43.45%) when cultured for 3 h in the presence of bile salts, followed by B. subtilis U146A (25%) and B. clausii UBBC-07 (18.94%). B. subtilis U170B and B. subtilis U146A did not exhibit haemolytic activity and were susceptible to different antibiotics. Additionally, these two strains exhibited weak antagonistic activity against B. cereus. The diverse wild strains of B. subtilis can be used as a safe multifunctional starter culture for the industrial production of condiments with health benefits.
한국재래간장으로부터 혈전용해효소를 강하게 생산하는 균주를 선발하고 이를 Bacillus subtilis K7로 동정하였다. B. subtilis K7이 생산하는 혈전용해성 protease를 정제하여 분자량을 확인한 결과 21,500 Da이었다. 정제된 효소의 최적반응조건은 $40^{\circ}C$와 pH 9.0이었으며 pH 5.0라서 12.0까지 안정하고 $50^{\circ}C$에서 20분간 열처리한 후에도 50%이상의 효소활성을 가지며 EDTA, CDTA 및 iodoacetat에 실활하는 효소이었다. 이 효소의 fibrin에 대한 Km 값은 $1.8{\times}10^{-2}$ M이었다.
Maillard 반응 중 생성된 Maillard 반응생성물(MRPs)에 대한 세균의 생육 패턴을 조사하고자 반응표면분석을 적용하였으며, 세균의 생육배지에 MRPs를 첨가시 균의 생육에 대한 반응표면회귀식의 $R^{2}$는 Bacillus subtilis 및 Bacillus natto 균에서 각각 0.9544 및 0.9598였다(p<0.01). Bacillus subtilis의 생육에 관한 MRPs의 영향에서 Maillard 반응온도가 높고 반응시간이 긴 MRPs 첨가군은 생육이 감소하다가 반응시간이 $8{\sim}12\;hrs$ 범위 및 반응온도가 $150^{\circ}C$ 이상의 생성조건에서 크게 감소하였다. Bacillus natto균에 대한 생육에서는 Maillard 반응시간의 영향을 거의 받지 않았고, $150^{\circ}C$보다 낮은 반응온도에서는 온도가 낮고 용매 pH가 낮아질수록 생성된 MRPs에 대한 균의 생육이 증가하였으나 $150^{\circ}C$ 이상에서는 pH의 영향을 받지 않고 온도가 증가할수록 생성된 MRPs에 대한 균의 생육이 감소하였다. 능선분석에서 Bacillus subtills 균에 대한 생육은 $159.10^{\circ}C$, 9.69시간 및 용매 pH 12.21에서 생성된 MRPS가 가장 생육억제 효과가 컸으며, Bacillus natto균의 생육은 $169.94^{\circ}C$, 9.22시간 및 용매 pH 9.66에서 생성된 MRPs에 의해 가장 크게 억제되었다.
토양으로부터 chitinase를 생성하는 균주를 분리하여 동정한 결과 Bacillus subtilis로 판명되었으며, 분리한 균주를 Bacillus subtilis JK-56이라 명명하였다. B. subtilis JK-56의 chitinase 생산 최적 조건을 검토한 결과 1% chitin, 0.5% polypeptone, 0.1% KCI, 0.05% MnS $O_4$.4$H_2O$이며 초발 pH 7.0, 배양온도 37$^{\circ}C$에서 가장 많은 효소를 생산하였다. 본 균주가 생산하는 chitinase를 정제하기 위해서 native-PAGE를 이용해 효소활성 band를 확인한 결과, 1개의 강한 활성 band와 2개의 약한 활성 band를 가지는 isozyme으로 확인되었다. 확인된 isozyme을 정제한 결과, isozyme 중 1개의 강한 활성 band를 정제하였고 정제된 효소를 Chi-56A라고 명명하였다 Chi-56A의 효소 특성에 관해서 실험한 결과 분자량은 약 53kDa, pI는 4.3으로 확인되었다. 본 효소는 $65^{\circ}C$까지 상당히 안정하였으며 효소의 최대활성 온도도 $65^{\circ}C$로 확인되는 등 열에 대해 상당히 안정한 효소로 확인되었다. Collidal chitin에 대한 정제효소 Chi-56A의 $K_{m}$ 값은 17.33g/L였다. 그리고 pH 6.0에서 최대의 활성을 나타내었고, 산성범위보다 알칼리범위에서 안정한 것으로 나타났다. 또한 $Mn^{2+}$ 존재 하에서 높은 활성을 나타내었고 C $O^{2+}$와 $Mg^{2+}$ 존재 하에서도 활성이 약간 증가한 반면에 H $g^{2+}$ 존재 하에서는 상당한 저해를 받았다. Chito 올리고당에 대한 분해 산물을 HPLC로 확인해 본 결과 짝수개의 올리고당의 분해산물은 (GlcNAc)$_2$만을 생산하였고 홀수개의 올리고당에 대해서는 GlcNAc와 (GlcNAc)$_2$를 생산하는 것으로 비환원성 말단으로부터 이당체인 diacetyl chitobiose ((GlcNAc)$_2$)를 생산하는 exo형 chitinase로 추정 된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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