Epidemiological study on the bovine mastitis was carried out on 1,493 raw milk samples from 7,406 dairy cows of dairyfarms in Chonnam province. And, it were classified by R. B. V. test during the period from July, 1984 to June, 1986. Of these positive samples, the mastitis causative agents were isolated, and examined for susceptibility to 14 antibiotics by disc method. The results are summarized as follows 1. Incidence rate of bovine mastitis from raw milk examined was observed in 1,393 dairy cows (18.8%) among 7,406 dairy cows of dairy farms. These outbreaks according to years were increased to 17.1% in 1984, 19.7% in 1985, and 20.5% in 1986. And, outbreaks of bovine mastitis according to seasons were high observed during the period from August to October. 2. Isolated rate of mastitis causative agents from raw milk was observed in the order of Staphylococcus sp. (50.2-51.7%), Streptococcus sp. (35.6-48.3%), Bacillus sp. (2.2-6.7%), Pseudomonas sp. (0.3-5.7%), and others (0.6%). 3. Generally, antibiotics susceptibility of isolated mastitis agents from raw milk was observed high susceptible in CP, CL, NB, PC, SM, NM, EM, GM etc.
The Sporosarcina psychrophilia pyrB gene, which encodes aspartate transcarbamylase (ATcase), was cloned on Sau3AI restriction endonuclease fragment inserted into pUC19 plasmid vector, S. psychrophilia pyrB gene was expressed in Escherichia coli pyrB mutant for the complementation test. The sequence of 2,606 nucleotides including putative pyrB gene was determined. The region contained one full open reading frame (ORf) and two partial ORFs. The deduced amino acid sequence of the second ORF showed 59% identity with that of Bacillus caldolyticus ATCase. The first and third partial ORFs were closely related to the uracil permease (pyrP) and dihydroorotase (pyrC), respectively. Besides, potential terminator, antiterminator, and anti-antiterminator structures were found in the intergenic region between pyrP and pyrB. These results suggested that S. psychrophilia pyrimidine nucleotide biosynthesis genes are clustered as well as other Bacillus sp. Over-expressed product of pyrB encoding ATCase was purified and analyzed by the SDS-PAGE. The purified PyrB protein turned out to be molecular mass of 27 kDa and showed ATCase activity.
Chemotactic responses of five motile saprophytic and one phytopathogenic bacteria e.g. Agrobacterium radiobacter, Bacillus subtilis, B. polymyxa, Pseudomonas aeruginosa, P. fluorescens and Xanthomonas malvacearum towards exudate of Cochliobolus sativus conidia, Fusarium of oxysporum f. sp. ciceri chlamydospores, Macrophomina phaseolina sclerotia and Phytophthora drechsleri f. sp. cajani oospores were determined in vitro at different abiotic conditions. In general, a positive correlation (r=0.76 to 0.89; P=0.05) was observed between concentration of fungal exudates and attraction of bacterial cells. Similarly, a significant (P=0.05; r=+0.82 to 0.95) positive correlation was noticed between chemotactic response and incubation period. The chemotactic response of bacteria was greatly influenced by temperature and pH of the test fungal exudate. The optimum temperature for maximum chemotaxis was $25^{\circ}C$ for A. radiobacter, $30^{\circ}C$ for B. polymyxa, P. aerugionosa, P. fluorescens and X. malvacearum and $35^{\circ}C$ for B. subtilis. Fungal exudates maintained at pH 7 attracted maximum number of bacteria. The response of bacterial cells to exudates at pH 3 and 11 was not significantly (P=0.05) different than that to the buffer (control). Chemotaxis of bacteria was observed towards attractants (fungal propagules and their exudates) when they were kept apart and bridged with the capillaries filled with non-attractant (buffer) or attractant (exudate).
For the biological control of Phytophthora blight of red-pepper caused by Phytophthora capsici, an antibiotic-producing plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) Bacillus sp. KL 39 was selected from a local soil of Kyongbuk, Korea. The strain KL 39 was identified as Bacillus megaterium by various cultural, biochemical test and API and Microlog system. B. megaterium KL 39 could produce the highest antifungal antibiotic after 40 h of incubation under the optimal medium which was 0.4% fructose, 0.3% yeast extract, and 5 mM KCl at 30 C with initial pH 8.0. The antifungal antibiotic KL 39 was purified by Diaion HP-20 column, silica gel column, Sephadex LH-20 column, and HPLC. Its RF value was confirmed 0.32 by thin-layer chromatography with Ethanol:Ammonia:Water = 8:1:1. The crude antibiotic KL39 was active against a broad range of plant pathogenic fungi, Rhizoctonia solani, Pyricularia oryzae, Monilinia fructicola, Botrytis cinenea, Alteranria kikuchiana, Fusarium oxysporum and Fusarium solani. The purified antifungal antibiotic KL39 had a powerful biocontrol activity against red-pepper phytophthora blight disease with in vivo pot test as well as the strain B. megaterium KL 39.
The bacterial diversity in Korean soybean-fermented foods was investigated using a PCR-based approach. 16S rRNA sequences were amplified and cloned from two different soybean-fermented foods such as doenjang (soybean paste), and ganjang (soybean sauce). Staphylococcus equorum (60.6%), Tetragenococcus halophila (21.2%), Leuconostoc mesenteroides (9.1%), Lactobacillus sakei (6.1%), and Bacillus subtilis (3.0%) were detected among clones isolated from soybean paste samples and Halanaerobium sp. (37.5%), Halanaerobium fermentans (37.5%), T. halophila (12.5%), Staphylococcus sp. (6.3%), S. equorum (3.1%), and B. subtilis (3.1%) were detected among clones isolated from soybean sauce. Our approach revealed different bacterial distributions and diversity from those previously obtained using culture-dependent methods.
Herein, we cloned and expressed an endo-β-1,4-glucanase gene (celA1805) from Bacillus subtilis B111 in Escherichia coli. The recombinant celA1805 contains a glycosyl hydrolase (GH) family 8 domain and shared 76.8% identity with endo-1,4-β-glucanase from Bacillus sp. KSM-330. Results showed that the optimal pH and temperature of celA1805 were 6.0 and 50℃, respectively, and it was stable at pH 3-9 and temperature ≤50℃. Metal ions slightly affected enzyme activity, but chemical agents generally inhibited enzyme activity. Moreover, celA1805 showed a wide substrate specificity to CMC, barley β-glucan, lichenin, chitosan, PASC and avicel. The Km and Vmax values of celA1805 were 1.78 mg/ml and 50.09 µmol/min/mg. When incubated with cellooligosaccharides ranging from cellotriose to cellopentose, celA1805 mainly hydrolyzed cellotetrose (G4) and cellopentose (G5) to cellose (G2) and cellotriose (G3), but hardly hydrolyzed cellotriose. The concentrations of reducing sugars saccharified by celA1805 from wheat straw, rape straw, rice straw, peanut straw, and corn straw were increased by 0.21, 0.51, 0.26, 0.36, and 0.66 mg/ml, respectively. The results obtained in this study suggest potential applications of celA1805 in biomass saccharification.
Proceedings of the Korean Environmental Sciences Society Conference
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2006.11a
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pp.285-289
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2006
In screening of algicidal bacteria, we isolated a marine bacterium which had potent algicidal effects on harmful algal bloom (HAB) species. This organism was identified as a strain very close to Bacillus subtilisby 16S rRNA gene sequencing. This bacterium, Bacillus sp. SY-1, produces very active algicidal compounds against the harmful dinoflagellate Cochlodinium polykrikoides. We isolated three algicidal compounds (MS 1056, 1070, 1084) and identified them by amino acid analyses, fast atom bombardment mass spectrometry (FAB-MS), infrared spectroscopy (IR), $^1H$, $^{13}C$, and extensive two-dimensional nuclear magnetic resonance (2D NMR) techniques including $^1H-^{15}N$ HMBC analysis. One of them, MS 1056, contains a b-amino acid residue with an alkyl side chain of $C_{15}$. MS 1056, 1070, and 1084 showed algicidal activities against C. polykrikoides with an $LC_{50}$ (6 hrs) of 2.3, 0.8, $0.6\;{\mu}g/ml$, respectively. These compounds also showed significant algicidal activities against other harmful dinoflagellates and raphidophytes. In contrast, MS 1084 showed no significant growth inhibition against various organisms coexisting with HAB species in natural environments, including bacteria, eukaryotic microalgae, and cyanobacteria, although it inhibited growth of some fungi and yeasts. These observations imply that algicidal bacterium Bacillus sp. SY-1 and its algicidal compounds could play an important role in regulating the onset and development of HABs in the natural environments.
For preparation of high quality kochujang by the traditional fermentation method, 4 types of kochujang were prepared with brick- or grain-shaped meju fermented with different strains (Aspergillus sojae, Aspergillus oryzae+Bacillus subtilis). After 100 days of fermentation at $25^{\circ}C$, the moisture, pH, salt, and ethanol content of kochujang were 40.52-43.20%, 4.71-4.82, 8.7-9.1%, and 0.75-0.94%, respectively, showing slight differences according to the strains and shapes of meju. Titratable acidities were slightly increased for up to 60 days of fermentation. The amino-type nitrogen content of kochujang prepared with brick-shaped meju (A. oryzae+B. subtilis) was the highest (164.20 mg%) among all of the kochujang types. The redness (a) value of kochujang prepared with brick-shaped meju (A. sojae) were higher (19.08) than those of other treatments (18.37-18.59). Sensory evaluation of kochujang prepared with grain-shaped meju (A. sojae) showed the highest scores for color and overall acceptability, 'at $6.43{\pm}1.87$ and $6.29{\pm}1.44$, respectively. It was estimated that high quality kochujang could be made by using meju fermented with selected strains.
Changes in chemical characteristic, microflora, and sensory evaluation of fish sauce extracted at an interval of one week from fermented solution were investigated. pH was reduced from 6.0 to 4.5, and trimethylamine oxide from 132.5 to 87.2 mg/100g during fermenting periods. Trimethylamine increased from 5.6 to 50.2 mg/100g, and volatile basic nitrogen from 48.3 to 232.5 mg/100g. Bacterial flora isolated from the fish sauce were 70% Lactobacillus sp. and 13% Bacillus sp. Among the free amino acids, alanine, glutamic acid, valine, and methionine contents constitute 40% of the total free amino acids. Major non-volatile organic acid of the fish sauce was lactic acid (76%). Sensory evaluation results of the fish sauce were higher than the traditional soybean sauce after 28 days of fermentation.
This study was performed to select protease-producing Bacillus sp. as a potential probiotic starter for fermented meat products. In order to isolate protease-producing bacterium from meju, measured the diameter of the clear zone on agar plate (TSA, 1% (w/v) skim milk) and analyzed for intracellular protease activity, then 10 Bacillus-like strains were isolated. Three Bacillus-like strains (P19, P27, and P33) among 10 strains were able to tolerate in acidic condition (TSB, pH 2.5, 2 h incubation). These 3 strains were showed antimicrobial activity against food-borne pathogenic bacteria. These vegetative cells of 3 strains were showed a survival rate of 0.04% to 0.08% under the artificial gastric acidic condition (TSB, pH 2.5 with 1% (w/v) pepsin), but spore-forming cells were 56.29% to 84.77%. Vegetative cells of 3 strains were the least bile-resistant, while spore-forming cells of 3 strains showed higher survival rate more than 76% under artificial bile condition (TSB, 0.1% (w/v) oxgall bile). In these strains, P27 strain was finally selected as a good probiotic strain. P27 strain was tentatively identified as Bacillus amyloliquefaciens by API CHB kit and 16S rDNA sequence analysis. The results of this study suggest that B. amyloliquefaciens P27 can be used as a potential probiotic starter for fermented meat product.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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