This experiment was conducted to select prominent microorganisms with a good insecticidal activity among the ten species, which isolated from soil at the near of Chung-buk, Chung-nam, and Gang-won provinces and made protein crystal endotoxin. As a result, GB-413 strain was finally selected, which showed the high insecticidal activity against susceptible diamondback moth (Plutella xylostella), beet army worm (Spodoptera exigua) and tobacco cutworm (Spodoptera litura) as well as resistant diamondback moth strains. By modifying the cultivation process f.g. lowing the glucose concentration at early cultivation stage and adding the carbon after inducing the spores, the percentage of making spore as well as the number of active spore were increased and the time for cultivation and spore forming was reduced without a reduction of insecticidal activity. These results were not only applied successfully for the optimized cultivation process for a fermentation tank containing five tons capacity, but also improved the possibility of mass cultivation for commercial production.
We evaluated grapefruit seed extract for antibacterial activity at varying time intervals and concentration levels against heat tolerant and spore-forming Bacillus stearothermophilus, mesophilic Bacillus subtilis, and food poisoning Staphylococcus aureus. Grapefruit seed extract showed growth inhibitory activity against B. stearothemophilus and B. subtilis, and S. aureus at the level of 0.01 tp 0.03% in nutrient broth. However, when applied to soymilk in a market, grapefruit seed extract at the level above 0.2% effectively inhibited the growth of B. stearothermophilus, However, it failed to completely sterilize the test organisms. On the other hand, B. subtilis and S. aureus were completely sterilized at the level of 0.2% within 48 hrs and 72 h, respectively. The higher concentration of grapefruit seed extracts showed more effective antibacterial activities against the test organisms, but caused deteriorated organoleptic quality and emulsion stability. We could conclude, by applying grapefruit seed extract (0.015%) with thermal treatment (10 min at $121^{\circ}C$) that the microbial stability of commercial soymilk was enhanced greatly.
Bacillus species are aerobic, gram-positive, spore forming rods, and they are usually found in the surrounding environment. If they are isolated in the clinical specimen, they are generally considered as contaminants rather than a true pathogen. Infection with Bacillus licheniformis is usually associated with the immunocompromised state, trauma, an indwelling intravenous catheter or an intravenous drug abuser. This infection is easily controlled by removal of the catheter and surgical debridement of the local infected tissue as well as an appropriate antimicrobial therapy. We reported here on a case of Bacillus licheniformis bacteremia associated with a bronchoscopic procedure in an immune competent patient.
A thermophilic microorganism, which is able to hydrolyze starch, was isolated from soil and compost in Korea. It was Gram-positive, rod-shaped, catalase positive, nonmotile, glucose and mannitol fermentative, xylose oxidative, and spore forming microorganism. It also has an ability to hydrolyze casein and gelatin. The color of colony was yellowish white. The sequence of 16S rDNA of strain 2719 showed 99.5% sequence homology with the sequence of 16S rDNA of Bacillus thermoglucosidasius. On the basis of biochemical and physiological properties and phylogenetic analysis, the isolated strain was named as Bacillus thermoglucosidasius 2719.
For the optimization of thermal processing conditions in soymilk process, 4 strains of thermoresistant flat-sour bacteria were isolated from soymilk. The isolates were aerobic spore-forming rods, and grew at $-65^{\circ}C$. Based on the morphological and physiological properties, all of the isolated strains were identified as Bacillus stearothermophilus. The heat resistance of spores of 3 isolates and Bacillus stearothermophillus ATCC 12980 as a reference was determined in soymilk(pH 7.0) and pH 7.0 buffer solution. For each of the spores studied, linear regression equations with standard error were presented for the thermal destruction at 110, 115, 121, and $125^{\circ}C$. It was not obvious that the components of soy milk increased the heat resistance of spores. Between the strains studied, variability was noted in the D values at the different temperature, and no one strain was consistently the most heat resistant at all the given temperatures. The average D value for the 4 strains was 77.27, 20.20, 2.76 and 1.39 min at 110, 115, 121 and $125^{\circ}C$, respectively, and the average z value was $8.36^{\circ}C$.
The compositions of the four madia and their pHs for delta endotoxin production by B. thuringiensis serovar kurstaki 3a3b were examined. In the M-4 media out of the 4 media at pH8, the production of the endotoxin and spore formation were maximal. The mean generation times of the bacterium were 53.4 minutes in the M-1 media, 98 in the M-2, 132 in the M-3, and 127.5 in the M-4. The proper pHs of the media for the endotoxin production appeared to be pH 7 to 8. In the M-4 media, the lag time lasted about 5 hours.
An alkalophilic mi.croorganism (strain YB380), which produces yeast cell wall hydrolase extracellulary, was isolated from Korean soil. The rod-shaped cells were 0.3~0.4 by 2~4${\mu}{\textrm}{m}$ long, motile, aerobic, gram-positive, and spore-forming. The color of the colony was light yellow. The temperature range for growth at pH 9.0 was 25 to $45{\circ}C, with optimum growth at $35{\circ}C. The pH range for growth at $35{\circ}C was 8 to 11 with an optimum pH of 9.0. Therefore, the strain YB380 is an obligate alkalophile. The 16S rRNA of strain YB380 has a 99% sequence similarity with that of Bacillus alcalophilus. On the basis of physiological properties, cell wall fatty acid composition, and phylogenetic analysis, we propose that the isolated strain is Bacillus alcalophilus. The yeast cell wall hydrolase from Bacillus alcalophilus subsp. YB380 has been purified and partially characterized. The molecular weight was estimated to be 27,000 daltons with an optimum temperature and pH of $60{\circ}C and 9.0, respectively. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme was analyzed as Gln- Thr- Val- Pro- Trp- Gly- Ile- Asn- Arg- Val.
Bacillus thringiensis strain 108 was isolated from soil and had nematicidal activity against second stage juvenile of plant root-knot nematode, Meloidogyne incognita. The strain 108, a rod shape, spore forming and Gram positive bacterium, produced lecithinase, catalase, and ${\delta}$-endotoxin. The strain 108 belongs to H serotype 3, Bacillus thuringiensis var. kurstaki. A nematicidal substance of the strain 108 was partially purified on Sephadex G-25 gel filtration, activated carbon adsorption, silica gel adsorption, and Sephadex G-10 gel filtration. $LC_{90}$ of the partially purified substance against M incognita was $1.2\;{\mu}g/ml$. The nematicidal substance was stable by heat treatment at $100^{\circ}C$ for 1hr, but was perfectly lost nematicidal activity after autoclave ($110^{\circ}C$, 30 min).
An alkalophilic microorganism named DK-2386, which produces xylanase, was isolated from soil of Taejo-mountain, Cheonan-si, Chungnam, Korea. The isolated strain was characterized as Gram-positive, with size of 0.4${\times}$2.5 ${\mu}$m, spore forming, anaerobic, catalase positive, possessed with hydrolysis abilities of casein, starch, sodium carboxy methyl cellulose, and xylan, reduction of nitrate to nitrite, resistant against lysozyme, urease positive, and motility positive. The color of culture broth was reddish yellow. The strain DK-2386 was identified as Bacillus agaradhaerens by whole cell fatty-acid composition analysis and 16S rDNA sequence analysis. However, it was not identical to Bacillus agaradhaerens 40952 obtained from the Korean Culture Center of Microorganism in its colour of culture broth. Therefore, we have named the newly isolated strain as Bacillus agaradhaerens DK-2386.
The carbon utilizations of Bacillus species and Pythium species were investigated by using a Biolog$^{(R)}$ microplate assay to determine if there are differences in the carbon utilizations of selected strains of these species. It may be possible to afford a competitive advantage to bacterial biological control agents by providing them with a substrate that they can readily use as a carbon source, for example, in a seed coating formulation. Microplates, identified as SFP, SFN and YT were used to identify spore-forming bacteria, nonspore-forming bacteria, and yeast, respectively. Bacterial and mycelial suspensions were adjusted to turbidities of 0.10 to 0.11 at 600 nm. One hundred microliters of each of the bacterial and mycelial suspension were inoculated into each well of each of the three types of microplates. L-arabinose, D-galactose, D-melezitose and D-melibiose of the 147 carbohydrates tested were found to be utilized only by bacteria, and not by Pythium species, by Biolog$^{(R)}$ microplate assay, and this was confirmed by traditional shake flask culture. Thus, it indicated that the Biolog$^{(R)}$ microplate assay could be readily used to search for specific carbon sources that could be utilized to increase the abilities of bacterial biological control agents to adapt to contrived environments.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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