Various antimicrobial drug screen tests have been used in order to ensure food safety. However, the conventional screen tests, the Swab Test on Premises(STOP, USA), the Calf Antibiotic and Sulfa Test(CAST, USA) and the European Economic Community 4-plate Test(FPT, EU) are not sufficiently rapid or sensitive enough to detect low levels of sulfa drugs in meat. We developed a new screen test kit for the determination of the antimicrobial residues in meat called the Bacillus megaterium Disk Assay(BmDA). A comparison of BmDA with the older screen tests showed BmDA was as good as the older ones with several advantages. The new test kit is faster-it can be read in 4∼6 hours instead of 16∼18 hours. Moreover, BmDA can discriminate sulfa drugs from other antimicrobial drugs because p-aminobenzoic acid countacts the inhibiting action of sulfa drugs. Minimum detectable levels of sulfa drugs were significantly improved at the lever of 0.025*0.1 pp, compared with the level of 1.0 ppm in FPT. A comparison of BmDA with the older screen tests in HPLC confirmed meat samples exceeded the Korean tolerance value of 0.1 ppm showed BmDA was the most sensitive in the microbiological screen tests. As the microbiological screen tests have already known, a person familiar with simple laboratory techniques should have no difficulty in using it to detect antimicrobial residues in meat. This would be a simple, economic method of antimicrobial residues detection which might be succesfully used by many laboratories.
In our previous studies, Bacillus megaterium KU143, Microbacterium testaceum KU313, and Pseudomonas protegens AS15 have been shown to be antagonistic to Aspergillus flavus in stored rice grains. In this study, the biocontrol activities of these strains were evaluated against Aspergillus candidus, Aspergillus fumigatus, Penicillium fellutanum, and Penicillium islandicum, which are predominant in stored rice grains. In vitro and in vivo antifungal activities of the bacterial strains were evaluated against the fungi on media and rice grains, respectively. The antifungal activities of the volatiles produced by the strains against fungal development and population were also tested using I-plates. In in vitro tests, the strains produced secondary metabolites capable of reducing conidial germination, germ-tube elongation, and mycelial growth of all the tested fungi. In in vivo tests, the strains significantly inhibited the fungal growth in rice grains. Additionally, in I-plate tests, strains KU143 and AS15 produced volatiles that significantly inhibited not only mycelial growth, sporulation, and conidial germination of the fungi on media but also fungal populations on rice grains. GC-MS analysis of the volatiles by strains KU143 and AS15 identified 12 and 17 compounds, respectively. Among these, the antifungal compound, 5-methyl-2-phenyl-1H-indole, was produced by strain KU143 and the antimicrobial compounds, 2-butyl 1-octanal, dimethyl disulfide, 2-isopropyl-5-methyl-1-heptanol, and 4-trifluoroacetoxyhexadecane, were produced by strain AS15. These results suggest that the tested strains producing extracellular metabolites and/or volatiles may have a broad spectrum of antifungal activities against the grain fungi. In particular, B. megaterium KU143 and P. protegens AS15 may be potential biocontrol agents against Aspergillus and Penicillium spp. during rice grain storage.
To investigate the effect of long term application of organic matter in upland soils, plots for treatments of NPK, NPK+pig manure compost, rape seed cake, rice straw compost, and green manure were set up. Populations of Bacillus and Gram negative bacteria were high in the plot treated with green manure application, but microbial biomass was increased with chemical fertilizer or pig manure compost in upland soils. Activities of phosphomonoesterase and dehydrogenase were high with organic matter application comparing to control. Cluster patterns analysed using phospholipid fatty acid of plots treated with rice straw and or pig manure compost were clearly different comparing with other treatments. Dominant bacteria in upland soils were Bacillus flexus, B. subtilis and B. megaterium. And the strains isolated from upland soils had amylase, protease and lipase activities.
The results of re-examination for the isolates D-28, D-28a from Kimchi and 88-3 from laver are summarized as follows: 1). All these isolates were proved to be Gram positive, catalase positive and spore-forming. 2). While these strains were not consistent with Bacillus megaterium group with respect to Voges-Proskauer reaction and methyl red test, their cultural characteristics were well consistent with this group. 3). These isolates showed the similar suger-fermentability as B. megaterium group with a slight difference. 4). It is proved that, according to the forgoing results and vitamin $B_{12}$ producibility, the isolate 88-3 is identical with B. megaterium NRRL-B 938 and D-28, D-28a, with B. megaterium 425-1 and 425-2, respectively.
Reinforced Calcium-alginate gel entrappment method for enzyme immobilization is described with an example of penicillin amidase from Bacillus megaterium KFCC 10029, a partially constitutive mutant of B. megaterium ATCC 14945. Penicillin amidase recovered from the fermentation broth by adsorption on celite is mixed with alginate and gelatin solution, and cast into a pellet or noodle form by coagulation in calcium salt solution followed by crosslinking with glutaraldehyde. Optimum pH and temperature of the immobilized enzyme preparation were 8.0 and 6$0^{\circ}C$, respectively. Kinetic constants such as Km value and the inhibition constant of 6-APA and phenylacetic acid were 2.6 mM, 7.4 mM and 21.2 mM, respectively. The enzyme leakage from the adsorbent during operation was successfully prevented owing to the increase of physical strength of gel coat. The half lives in a column reactor were 6 and 30 days at the respective temperature of 4$0^{\circ}C$ and 3$0^{\circ}C$, which were the 6-8 fold increased values as compared with those of without entrappment. The results highly recommended the use of reinforced Calcium-alginate gel entrappment method for the enhancement of physical strength and the operational stability of alginate gel entrapped enzyme.
Choi, Hak Joo;Kim, Dong Hee;Ji, Joong Gu;Miyamoto, Tomofumi;Shin, Kwang Soo
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.27
no.1
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pp.107-111
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2013
To investigate the possible usage as probiotics, we isolated and identified one strain of bacillus from Korean traditional food, Jeotgal. The isolate was identified as Bacillus megaterium KS12 by examining its biochemical properties and 16S rRNA sequence analysis (99% similarity). B. megaterium KS12 exhibited high viability in artificial gastric juice for 3 h and in artificial bile salts for 24 h, about 14.4 and 14%, respectively. The herbal digestive medicine containing the isolate showed high starch hydrolytic activity and proteolytic activities (about 6-fold) compared to traditional herbal digestive medicine. The viable cells in the herbal digestive medicine containing the isolate were higher than those of traditional herbal digestive medicine.
The complete nucleotide sequence of the cloned pga gene encoding the penicillin G acylase of Bacillus megaterium ATCC 14945 and its 5'- and 3'-flanking regions was determined. The sequence revealed only one large open reading frame (2,406 hp) of the penicillin G acylase (pga) gene. Upstream from ATG of the pga gene, there was a putative ribosome binding site, Shine-Dalgarno sequence. The promoter-like structure, - 10 and - 35 sequences, was also found. Following the stop codon, TAG, a structure reminiscent of the E. coli rho-independent transcription terminator was present. The amino acid sequence was deduced from the nucleotide sequence. The molecular mass of the polypeptide was 91,983 Da. There was a potential signal sequence in its amino-terminal region. A comparison of its deduced amino acid sequence with other characterized penicillin G acylases and the result of SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of the purified enzyme showed that a precursor polypeptide of 92 kDa was processed into two dissimilar ${\alpha}$ and ${\beta}$-subunits of 25 and 61 kDa.
Whole soybean meju was fermented with four Bacillus strains for 45 hr in its model system. The pH range of the product was $7.98{\sim}8.68$, the contents of amino nitrogen and ammoniacal nitrogen were $286{\sim}439\;mg%,\;0.11{\sim}0.23%$, respectively and that of reducing sugar ranged $0.65{\sim}2.24%$. During fermentation, the enzyme activities increased up to $30{\sim}40\;hr$ of fermentation and slightly decreased after 45 hr. Stachyose was special sugar components for B. licheniformis and raffinose was for B. natto. The components of the organic acid showed distinctive patterns among four products and the patterns of amino acids and fatty acids were almost similar to those of other reports. The main and common odor concentrates of meju were pyrazine components, 3-methyl-1-butanol, acetic acid and ethanol. Chunggukjang, mixed with B. natto and B. licheniformis showed more acceptabilities than other combinations. Soybean paste, mixed with B. megaterium and B. subtilis, soysauce, mixed with B. megaterium and A. oryzae showed excellent acceptability, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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