An isolate of barley yellow mosaic virus(BaYMV-HN) obtained from Haenam, Korea was compared with two BaYMV strains. BaYMV-Ⅱ-1 from Japan and BaYMV-G from Germany. The sequence of the 3'-terminal 3817nucleotides[excluding the poly (A) tail] of RNA 1 of BaYMV-HN was determined to start within a long open reading frame coding for a part of the NIa-VPg polymerase(26 amino acids). NIa-Pro polymerase (343 amino acids), NIb polymerase(528 amino acids) and the entire capsid protein(297 amino acids), which is followed by a noncoding region(NCR) of 235 nucelotides. In the partial ORFs, BaYMV-HN shows higher sequence homology with BaYMV-Ⅱ-1(99.5%) than BaYMV-G(92.7%). The 3' non-coding regions of BaYMV-HN(235nt) shows higher nucleotide sequence homology with BaYMV-G(235nt)(99.6%) than BaYMV-Ⅱ-1(231nt)(97.0%). The 3' NIa-Pro protein sequence of BaYMV-HN shows higher amino acid sequence homology with BaYMV-Ⅱ-1(95.0%) than BaYMV-G(93.6%), but, NIb protein sequence of BaYMV-HN shows same all amino acid sequence. The capsid protein sequence of BaYMV-HN(297aa) shows same with BaYMV-Ⅱ-1, and shows higher nucleotide sequence homology with BaYMV-UK (from United Kingdom)(97.3%) than BaYMV-G(96.9%) and G2(96.9%). Difference of capsid protein amino acid were 0-9 between the Japan, United Kingdom and Germany and were 2-6 between all Korean isolates. Many of the amino acid differences are located in the N-terminal regions of the capsid proteins from 1 to 74 amino acid positions.
Barley yellow mosaic virus (BaYMV-HN) occurring Haenam area was isolated by mechanical inoculation onto barley cultivars, purification and production of antibody. BaYV-HN were purified from infected plants a filamentous virus with 13 nm in diameter and 250∼300 nm and 500∼650 nm in length. Specific antibody made by injecting the purified virus to the muscle of a rabbit. In gel-diffusion tests antibody to BaYMV-HN did not make spur with tow Japanese BaYMV isolates BaYMV-II-1 or BaYMV-III. BaYMV-HN showed the symptom of yellowing and necrosis in host plants. Mechanical inoculation tests with Japanese barley cultivars showed that BaYMV-HN infected New Golden, Akagi Nijo and Tosan Kawa 73, but did not infect Amagi Nijo, Haruna Nijo, Ishukushirazu (ym3), Misato Golden (Ym1), Kashimamugi, Joshushiro Hadaka and Mokusekko 3 (ym1). In Korean barley cultivars, some of the naked barleys which are Hinssalbori, Kinssalbori, Saessalbori and Saechalssalbori were not infected by BaYMV-HN. However, it infected all the covered barley cultivars and the beer barley cultivars. BaYMV-HN had two RNAs, RNA 1 (7.6 Kb) and RNA 2 (3.5 Kb), and one coat protein (33 KDa).
Using the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), a rapid and sensitive assay method for the detection and identification of barley yellow mosaic virus (BaYMV) and barley mild mosaic virus (BaMMV) was adapted. Two units of primers from each virus were selected and used for the determination of two different viruses. PCR fragments of BaYMV (ca. 0.9kb) and BaMMV (ca. 0.8kb) were obtained from the designed method for the assay of BaYMV and BaMMV coat protein. PT-PCR fragments were cloned using vector pT7 Blue and the sequences of the selected clones were analyzed. coat protein of BaYMV and that of BaMMV consisted of 297 amino acids (891 nucleotides) and 251 amino acids (753 nucleotides), respectively. The snalysis of coat protein genes from these two viruses showed that 45.6% of nucleotides sequence ad 34.9% of amino acid in BaYMV were homologous to those in BaMMV.
1999년부터 2001년까지 전국42개 지역에서 토양전염성 맥류바이러스를 조사한 결과 강원도 영월, 전라북도 무주, 충청남도 공주, 보령, 서천 포장을 제외한 37개 포장에서 BaYMV, BaMMV 및 SbWMV가 발생하고 있었다. 또한 토양전염성 맥류바이러스 상습 발병지 10개 장소에 겉보리 10품종, 쌀보리 16품종, 맥주보리 6품종, 밀 2품종을 파종하고 저항성 조사를 실시한 결과 겉보리는 조강보리, 쌀보리는 내한쌀보리 및 논산과1-6품종이 비교적 여러지역에서 저항성 높은 품종으로 나타났다. 그리고 일본에서 분양 받은 15품종도 대부분이병성으로 나타났으나 특이하게 익산, 영광 및 예산지역에서 저항성 품종이 많았다. 지역간 품종에 따른 바이러스 혼합 감염을 조사한 결과 조사 10개 지역 모두 BaYMV, 및 BaMMV가 혼합 감염되어 있었고, BbWMV는 예산, 진주, 나주 및 익산지역에 혼합감염되어 있었다. 그러나 영광지역에서는 사천6호 품종을 제외하곤 BaYMV만이 발생하였다. 일본 분양 품종은 예산에서만 BaYMV가 감염되었고 나머지 지역에서 모두 BaMMV 및 BaYMV에 혼합 감염되 어 있었다.
The two viruses of barley yellow mosaic(BaYMV) and barley mild mosaic virus (BaMMV) were detected by ELISA from barley plants with virus-like symptoms which were collected from 16 locations in southern Korea, during 1995 and 1996. Both viruses occurred in southern Korea. Barley plants at Chongdo and Koseong were infected with BaMMV, while those infected with BaYMV were at Kurye and Taegu. After sowing 50 barley cultivars at habitually infected fields in 10 locations, the susceptibility and resistance to BaYMV and BaMMV were screened with antiserum tests. The cultivars of Albori, Alchanbori, Daejinbori, Jokangbori, Milyangbori, Boeunkwamek, Naehanssalbori, Olssalbori, Weossalbori, Dusan 29 and Deogndohyangchonkwa showed positive reaction to BaYMV antiserum, while Saeolbori, Chalbori, Jinjukwa and Baegjinkwa showed positive reaction to BaMMV. Nonsankwa 1-6 and wheat cultivars of Chongkeymil, Dahongmil, Grumil, Urimil, Jochonhomil, Sinkeyhomil showed negative reactions to both viruses. The rest cultivars were infected both with BaYMV and BaMMV. Sap inoculations to barleyplants with the two viruses of BaYMV isolated in Haenam and BaMMV isolated at National Honam Agricultural Station, expressed lower infection rate than those grown in the virus-infected fields.
2단계의 nested PCR 방법을 이용하여 보리 및 벼 재배 토양에서 Barley yellow mosaic virus (BaYMV)를 검출하였다. BaYMV 분절 RNA1 외피단백질 영역의 특이 프라이머로 1차 PCR을 하고 내부서열로부터 작성된 프라이머로 2차 PCR을 실시하여 확보된 372 bp의 PCR 산물이 BaYMV 외피단백질 영역과 98%-100% 염기서열이 일치하여 BaYMV를 검출할 수 있음을 확인하였다. 이 결과는 토양으로부터 BaYMV 검출에 관한 최초의 보고이며 토양전염성 바이러스의 정확한 진단과 예찰에 적용될 수 있을 것으로 생각한다.
맥류 주 재배지인 전남북 및 경남북을 중심으로 국내에서 밀, 보리 등 맥류에 심각한 피해를 일으키는 바이러스인 BaYMV, BaMMV 그리고 SBWMV를 대상으로 바이러스 발병 현황 조사를 실시하였다. RT-PCR 방법을 이용하여 진단 한 결과 2014년과 2015년 발병포장 내 이병면적율은 5% 미만에서 90% 이상까지 지역에 따라 다양하게 확인되었다. 2014년 조사 결과 전북지역의 부안과 김제에서 90% 이상으로 가장 높은 이병면적율을 보였고, 전남 지역의 보성, 강진, 해남, 장흥 지역은 30%의 이병면적율을 보였다. 2014년 조사결과 전남북 및 경남북 모든 지역에서 BaYMV가 확인되었고, 전남의 일부 지역에서는 BaYMV가 우점하면서 BaMMV와 복함 감염되어 피해를 주고 있는 양상을 보였다. 2015년의 전체적인 발생상황은 군산지역에서 70%로 높은 이병면적율을 보임과 동시에 전북의 다양한 지역에서 BaYMV 감염이 확인되었다. 또한 전남 지역 중 영광지역이 BaYMV와 BaMMV의 복합 감염으로 나타났다. SBWMV 감염이 확인된 고성지역을 제외하고 조사기간 동안 경남북의 모든 조사 지역에서 BaYMV 단독 감염으로 확인되었다. 본 실험 결과 지역별 기온차이에 의해 복합감염 형태의 발병양상의 차이가 나타났으며, 지구 온난화에 의한 기온상승을 대비하여 관련 연구가 더 필요할 것으로 사료된다.
월동 후 맥류 재배지에서 나타나는 이상 증상으로는 주로 잎에 황화등의 변색과 모자이크성 반점 등이 조사되었다. 이들 증상을 가진 잎의 바이러스 검정 결과 $78\%$이상에서 바이러스 감염이 확인되었으며, 주로 BaYMV와 BaMMV에 의해 발생하였다. 전국일원의 맥류 재배지에서 4개년간 BaYMV, BaMMV SBWMV와 BYDV-MAV(2003년) 등 4종의 바이러스의 발생율을 조사한 결과 대상 바이러스 중 BaYMV가 가장 높은 감염율을 나타내었다. BaYMV는 조사 4개년 동안 평균 발생율이 $70\%$이상으로 전국적으로 큰 차이 없이 가장 높은 발생율을 보였다. 그러나 경기지역의 경우는 $20\%$정도로 다른 지역의 $65\~85\%$에 비해 낮은 발생율을 보였다. BaMMV는 전북, 전남, 경기, 강원, 경남지역에서 $20\~40\%$를 보인 반면, 경북, 충남, 경기지역에서는 발생이 적었다. SBWMV와 BYDV-MAV는 현재까지 국내 보리 재배지에서 다발생되고 있지는 않았다. 저항성 유전자원에 대해 바이러스에 대한 저항성 반응을 검정한 결과 BaYMV와 BaMMV가 단독 또는 복합 감염되는 형태로 나타났으며, SBWMV는 감염이 확인되지 않았다. 저항성 유전자별 반응을 검정한 결과에서 익산 발생하고 있는 BaYMV-Ik strain과 BaMMV에 대해 모두 저항성인 유전자는 확인되지 않았으나 국내 맥류 재배지에서 가장 발생이 많은 BaYMY-lk체 대해 저항성 반응을 보인 유전자는 Ishukushirazu, Chosen에 들어있는 rym 3, Tokushima Mochi Hadaka의 rym 4y 및 Hakei I-41의 rym 5a로 나타났다. 그러나 BaYMY-lk에 대해 저항성으로 확인된 rym 3, rym 4y 및 rym 5a의 경우 BaMMV에는 모두 감염이 확인되었으며, rym 1+5 두개의 저항성 유전자를 가지고 있으며 일본의 모든 BaYMV strain에 저항성인 Mokusekko 3도 감염이 확인되었다. 유전자에 따른 병징 발생 양상을 조사한 결과 일반적인 바이러스 병징과 같이 대부분 모자이크나 황화가 발생하였다. 그러나 저항성 유전자에 따라 고사, 괴사 반점, 조직 괴사, 줄무늬성 증상과 잎 말림등의 다양한 증상이 확인되었다.
보리호위축병 피해지역에 대한 수량감소의 예측을 위하여, 보리호위축병(BaYMV)에 대한 저항성 품종과 이병성 품종간 수량구성요소, 수량 및 증질 변이를 건전구와 이병구에서 비교 조사하였다. 1. 보리호위축병의 이병주는 BaYMV에 감염된 것으로 나타났으며, 이병정도는 감수성 품종인 백동에서 9, 저항성 품종인 내한쌀보리에서 1정도 발병하였다. 2. 감수성 품종인 백동은 천립중을 제외한 간장, 수당립수, $\textrm{m}^2$당 수수 등의 수량구성요소가 유의하게 감소하였으며, 수량은 대조구의 20%수준으로 현저히 감소하였다. 3. 보리호위축병 감염구에서 종자의 발아율은 감수성 품종과 저항성 품종간에 차이가 없었으나, 정립률은 감수성 품종인 백동에서 설립중이 유의하게 증가하였으며, 대조구에 비하여 정립률과 조단백질 함량 모두 유의한 차이를 보였다. 4. 보리호위축병은 간장, 수량, 정립률, 수수, 천립중, 1수립수 등의 피해와 부의 상관을, 조단백질 함량과는 정의 상관을 보여 보리호위축병에 이병이 되면 수량 및 품질에 크게 피해를 주는 것으로 나타났다.
A rapid and sensitive assay for specific detection and identification of barley yellow mosaic virus(BaYMV) was set up using the reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR). A couple of primers was select to discriminate the viruses. PCR fragments of BaYMV(ca.0.9 kb) were obtained by using the method designed for BaYMV capsid protein. RT-PCR fragments were cloned with vector pT7 Blue and the resulting clones were sequenced. Capsid protein of BaYMV consisted of 297 amino acids and 891 nucleotides. The capsid protein sequence of BaYMV showed that 98% of nucleotides and 99% of amino acids homology.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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