• 한국응용곤충학회지
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• 제48권4호
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• pp.509-517
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• 2009

국내에서 분리된 Bacillus thuringiensis subsp. aizawai CAB109균주가 난방제 해충으로 알려진 담배거세미나방과 파밤나방에 동시에 높은 독성을 보이는 것으로 나타났다. B.t. CAB109 균주의 활성을 평가하기 위해 혈청형이 aizawai이면서 미생물농약으로 시판중인 TB-WP제품 및 SC제품과의 살충활성을 비교한 결과, B.t. CAB109균주, TB-WP제품, SC제품은 담배거세미나방 2령충에 대한 반수치사농도($LC_{50}$)가 각각 $1.3{\times}10^5cfu/ml$, $2.3{\times}10^6cfu/ml$, $5.2{\times}10^5cfu/ml$으로 나타났고 파밤나방 2령충에 대한 반수치사농도는 $1.8{\times}10^4cfu/ml$, $1.3{\times}10^6cfu/ml$, $1.5{\times}10^6cfu/ml$으로 나타나 두 종 해충 모두에서 B.t. CAB109 균주가 독성이 더 높은 것을 볼 수 있었다. B.t. CAB109균주가 이미 알려져 있는 aizawai와 비교해 차이가 나는 새로운 유전자를 소유하는지 확인하기 위해 Plasmid DNA를 추출하여 전기영동 한 결과 B.t. subsp. aizawai HD-133과 다른 패턴을 보이는 것을 확인 할 수 있었고 Cry1-Cry5의 primer를 사용하여 PCR을 진행한 결과 B.t. subsp. aizawai CAB109균주는 Cry1Aa, 1Ab, 1C, 1D를 B.t. subsp. aizawai HD-133은 Cry1Aa, 1Ab를 가지고 있음을 확인 할 수 있었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제49권2호
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• pp.151-158
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• 2010

토양에서 분리한 구형의 내독소단백질을 가지는 18개의 균주 중, 이집트숲모기와 지하집모기에 90%이상의 살충활성을 보이는 Bacillus thuringiensis subsp. israelensis CAB199 균주를 선발하였다. 이 균주는 습지에 발생한 이나도미집모기에도 높은 살충효과를 나타내었다. 모기유충의 행동패턴은 주로 호흡을 위해 수면에서 주로 활동하고 있어, Bti 균주를 유효성분으로 하는 제제가 수면 위에 장시간 부유 할 수 있는 제형을 선발하고자 하였다. 수화제와 액상수화제의 두 가지 형태의 제형을 만들어 실내에서의 살충효과 및 습지에서의 방제효과를 확인한 결과, 실내에서의 경우에는 액상수화제 제형이 실험한 3종의 모기유충에 대해 속효적이며 높은 살충율을 보여주었고, 습지에서도 이나도미집모기에 대하여 가장 좋은 활성을 나타내었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제48권4호
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• pp.519-526
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• 2009

국내 토양으로부터 파밤나방에 활성있는 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki KB100균주를 분리 동정하였다. 난방제 해충인 파밤나방에 대한 B. thuringiensis의 살충력을 강화시키기 위해 몇 개의 protease inhibitor를 조사하였으며, 이 중 단백질 분해 억제 능력이 가장 좋은 tannic acid을 선발하였다. B. thuringiensis의 배양액에 tannic acid을 혼합 처리하여 파밤나방 2령 유충을 대상으로 생물활성을 조사한 결과, B. thuringiensis 단독처리는 54.4%의 사충율을 보인 반면 B. thuringiensis와 4 mM tannic acid을 혼합하여 처리하면 64.0% 그리고 B. thuringiensis+40 mM tannic acid는 95.5%의 높은 상승효과를 각각 나타냈다. 그러나 B. thuringiensis+80 mM tannic acid 에서는 53.3%로 단독처리의 경우 보다 사충율이 낮게 나타났다. 3령 유충에서도 B. thuringiensis 단독처리는 60.0%였으며 B. thuringiensis+40 mM tannic acid는 93.3%로 사충율이 증가하는 상승효과를 보였다. 야외포장 실험에서 B. thuringiensis 단독처리는 1회, 2회, 3회 누적 처리에서 각각 61.8%, 80.4% 그리고 47.3%의 사충율을 나타낸 것에 비해 B. thuringiensis와 40 mM tannic acid의 혼합 처리구에서는 83.9%, 89.4%와 66.8%로 사충율이 증가되었다.

• 농약과학회지
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• 제13권4호
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• pp.315-324
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• 2009

배추좀나방(Plutella xylostella L.)의 효과적인 방제를 위해서 현재 상용화되고 있는 친환경 농자재인 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki($30{\times}10^8\;cfu/mg$)와 Neem oil(0.5% azadirachtin)을 사용하였다. 두 약제를 추천농도로 처리했을 때 배추좀나방 1. 2령 유충에서 B. thuringiensis는 2일만에 100%의 사충률을 보였으며, Azadirachtin은 7일까지 지효적 효과를 보였다. 배추좀나방 1, 2, 3, 4령 유충에 대한 B. thuringiensis의 $LC_{50}$ 값은 각각 $2.8{\times}10^4$, $3.1{\times}10^4$, $3.4{\times}10^4$, $1.5{\times}10^5\;cfu/ml$이였으며, Azadirachtin은 2.7, 3.9, 4.7, 7.1 ppm이였다. B. thuringiensis와 Azadirachtin를 배추좀나방 성충에 처리하였을 경우에 산란수는 무처리와 비교하여 Azadirachtin 25 ppm에서 57.5개의 감소를 보였다. 또한 알의 부화율은 무처리와 비교하여 B. thuringiensis는 큰 차이가 없었고, Azadirachtin 50 ppm에서 45.4%의 부화율 감소를 나타냈다. 배추좀나방은 B. thuringiensis와 Azadirachtin을 혼합처리할 경우, 각각의 처리구에서 각각을 단독으로 처리하였을 때보다 높은 방제효과를 나타내었다. 포트시험의 경우에서도 B. thuringiensis와 Neem oil의 혼합처리 사용은 배추좀나방 알, 유충, 번데기, 성충의 친환경적인 방제에 효과를 나타냈다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권6호
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• pp.679-684
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• 1994

For a biological control of root-knot nematode (Meloidogyne incognita) in tomato, efficiency of Bacillus thuringiensis subsp. indiana strain TH109 (BtTH109) on the nematode control was investigated. After the mixture of strain BtTH109 and wheat bran was treated into rhizosphere of the tomato plants with nematode eggs, the stem height and root growth of plants increased. And the juveniles and eggs of nematode are not found in both roots of tomatoes and pot soil after cultured broth of the strain BtTH109 treated 4 times at 3 day-interval into rhizosphere of the infected tomatoes.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제6권5호
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• pp.326-330
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• 1996

To illustrate whether a hemolysin in $\delta$-endotoxins of Bacillus thuringiensis strain 73E10-2 and subsp. israelensis had immunological identity, a cyt gene of the strain 73E10-2 which encodes a hemolysin was cloned to B. subtilis (transformant 2753). The transformant 2753 containing cyt gene produced the hemolysin which lysed sheep erythrocytes after treatment of proteinase K. The hemolysin was proved also to be toxic against mosquito larvae (Aedes aegypti). The molecular weight of the hemolysin produced from the transformant 2753 was determined to be about 25 kDa by SDS-PAGE and immunoblot. The hemolysin in $\delta$-endotoxin of subsp. israelensis and subsp. kyushensis did not react on immunoblot using polyclonal anti-$\delta$-endotoxin of the strain 73E10-2, but 70-140 kDa mosquitocidal toxins in $\delta$-endotoxin of subsp. kyushuensis reacted.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제1권2호
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• pp.115-122
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• 2000

A Bacillus thuringiensis designated NT0423, belonging to B. thuringiensis subsp. aizawai (H 7), was isolated from samples of dust and soil of sericultural farms. B. thuringiensis NT0423 having dualspecificity against Lepidoptera and Diptera produced bipyramidal inclusions consisting of two major polypeptides of approximately 130- and 70-kDa. Proteolytic processing by trypsin and gut juice of Bombyx mori yielded predominant proteins with molecular masses of about 66-kDa. The whole crystal protein of B. thuringiensis NT0423 immunologically was related to that of B. thuringiensis subsp. aizawai. PCR analysis showed that B. thuringiensis NT0423 has at least five crystal protein genes including cryIA(a), cryIA(b), cryIC, cryID and cryIIA, and southern blot was determined the location of each gene on intact and enzyme-digested plasmid DNA fragments. Except for cryIA(a) gene on the high molecular weight plasmid of 165-kb, all of four genes were located on the plasmid of 66-kb. The production of $\beta$-exotoxin from B. thuringiensis NT0423 was identified by the HPLC analysis. In addition, the $\beta$-exotoxin showed its ability to prevent pupation of treated larvae of house flies (Musca domestica) from developing into normal adults.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제25권6호
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• pp.566-570
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• 1997

During sporulation, Bacillus thuringiensis strains produce crystals consist of toxin proteins highly specific against insect pests. Their host specificities are desirable from a standpoint of environmental safety, but also limit market potential. Thus, development of improved Bacillus thuringiensis strains having broad host spectrum will contribute to increase its use. For the construction of Bacillus thuringiensis strain having broad host spectrum, we cloned cry1C gene encoding a toxin protein highly toxic against Spodoptera exigua from a B. thuringiensis isolate and constructed two recombinant plasmids, pUBClC and plC60. The plasmid PUBC1C has a replication origin of the natural plasmid pBC16 from B. cereus which is closely related species to B. thuringiensis, and the pBC16 was known to be replicated by rolling-circle mechanism. The plasmid pIC60 has a replication origin of a resident 60 MDa plasmid from B. thuringiensis subsp. kurstaki HD263, and it is believed that the pIC60 is replicated in a theta mode. The two plasmids were introduced into B. thuringiensis subsp. kurstaki cryB strain, and the transformed strains produced well-shaped bipyramidal crystals. We confirmed the expression of the cry1C gene by SDS-PAGE, and Western blotting. By investigating the segregational stability, it was found that the plasmid pIC60 is more stable than the pUBC1C.

• 한국응용곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.85-90
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• 1996

국내에서 분리된 Bacillus thuringiensis NT0423은 나비목과 파리목 곤충에 독성을 보이는 130 kDa의 전형적인 다이아몬드형 내독소 단백질을 생성한다. 이 균주의 파리목에 대한 독성을 강화하기 위하여, B. thuringeinsis NT0423에 모기 유충에 강한 독성을 보이는 B. thuringiensis subsp. morrisoni PG-14의 cryVID유전자를 가지고 있는 pCG10 플라스미드를 electroporation 방법을 이용하여 형질전환하였다. 형질전환체인 B. thuringiensis PT1227내에서 cryIVD와 숙주가 생성하는 원래의 다이아몬드형 130kDa 내독소 단백질 유전자는 그 자신의 형태로 잘 발현되었다. 형질전환체의 모기 유충에 대한 독성은 원래 숙주의 내 독소 단백질과ㅏ 도입된 CryIVD의 상승효과에 의해 현저히 증가하였다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제18권1호
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• pp.18-27
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• 2009

B. thuringiensis strain LY-99 belonging to subsp. alesti (H3a3c), was isolated from Chinese tobacco warehouse and showed significantly high toxicity to Plutella xylostella. For the identification of the cry1-type genes from B. thuringiensis LY-99, an extended multiplex PCRrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) method was established by using two pairs of universal primers based on the conserved regions of the cry1-type genes to amplify around 2.4 kb cry1-type gene fragments. Then the DNA fragment was cloned into pGEM-T Easy vector and digested with EcoRI and EcoRV enzymes. Through this method, a known cry1-type gene was successfully identified from the reference strain, B. thuringiensis subsp. alesti. In addition, the RFLP patterns revealed that B. thuringiensis LY-99 included a novel cry1A-type gene in addition to cry1Aa, cry1Ac, cry1Be and cry1Ea genes. The novel cry1A-type gene was designated cry1Ah2 (Genbank accession No DQ269474). An inverse PCR method was used to amplify the flank regions of cry1Ah2 gene. Finally, 3143 bp HindIII fragment from B. thuringiensis LY-99 plasmid DNA including 5' region and partial ORF was amplified, and sequence analysis revealed that cry1Ah2 gene from LY-99 showed 89.31% of maximum sequence similarity with cry1Ac1 crystal protein gene. In addition, the deduced amino acid sequence of Cry1Ah2 protein shared 87.80% of maximum identity with that of Cry1Ac2. This protein therefore belongs to a new class of B. thuringiensis crystal proteins.