• BMB Reports
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• 제41권5호
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• pp.394-399
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• 2008

Multiple sequence alignments of the Bombyx mori fibroin light chain gene (fib-L) from hybrids and from Chinese and Japanese strains demonstrated that 51.6% of the fib-L third intron is conserved. One of these conserved segments, 41 bp long, contains the sequence CGTTATTATACATATT, which is duplicated in the B. mori Nd-$s^D$ mutant. In the present work, electrophoretic mobility assays and computational analyses revealed a major peak of intrinsic bent DNA within the segment that undergoes breakage in the previously-described Nd-$s^D$ mutation. This result suggested that this intrinsically-curved region might mediate DNA cleavage and enhance recombination events in the third intron of the Bombyx mori fib-L gene.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제36권2호
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• pp.138-146
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• 1994

야잠사, Antheraea pernyi와 Antheraea yamamai의 구조특성을 살폅기 위하여 x-ray 회절 분석, IR 분광법, 편광현미경 관찰, 아미노산 분석을 행하였으며 섬유밀도, 열적 성질 및 동점탄성 성질을 살펴보았다. 그들의 구조 및 물리적 성질에 대한 결과를 가잠사(Bombyx mori)의 특성과 비교하여 요약하면 다음과 같다. 1. 작잠견사와 천잠견사의 아미노산 조성에는 큰 차이가 없었으나 천잠견사의 경우 반응성이 높은 극성아미노산이 다소 많은 것으로 나타났으며 가잠견사의 경우 glycine, 야잠사는 alanine 함량이 가장 많으므로 이들의 견사의 결정구조 특성에 관여되었다고 할 수 있다. 2. 섬유밀도 측정결과 천잠사(1.265~1.301g/㎤), 작잠사(1.308~1.311g/㎤), 가잠사(1.355~1.356g/㎤) 순으로 나타났으며 계산된 결정화도 값도 천잠사(51%), 작잠사(52%), 가잠사(64%) 순으로 나타났다. 3. 작잠사와 천잠사의 x-ray 회절곡선은 차이점이 없이 2$\theta$기호 16.7。와 20.5。에서 (002)면과 (201)면의 특징적인 double peak이 관찰되었으며 가잠사의 경우 2$\theta$기호 20.5。 부근에서 강한 회절 peak이 나타나 결정 구조가 서로 다른 것으로 나타났다. 4. IR spectrum 관찰결과 작잠사와 천잠사는 공히 alanine-alanine sequence에 관계되는 흡수 peak이 나타나며 가잠사는 glycine-alanine sequence에 관련된 group의 흡수 peak이 나타났다. IR 결정화도는 밀도측정에 의한 결과와 동일하게 천잠사(53.9%), 작잠사(54.3%), 가잠사(70.4%) 순으로 계산되었다. 5. 복굴절률은 가잠사의 경우 0.0556에 비하여 야잠사는 0.0216으로 낮은 값을 나타내며 광학배향도값도 가잠사가 2배 정도 높은 것으로 나타났다. 편광현미경에 의한 표면특성은 야잠사의 경우 섬유축방향으로 microfibril들이 줄무늬 모양으로 뚜렷하게 관찰되었다. 6. DSC 및 TGA 분석에 의하여 열분해특성을 살펴본 결과 열분해온도는 가잠사, 작잠사, 천잠사 순으로 350。 부근에서 나타났으며 각각의 구조특성에 따라 열분해가 진행되는 단계가 달리 나타나는 것으로 관찰되어 열안정성의 차이를 보여주었다. 7. Dynamic storage modulus와 loss modulus를 측정하여 얻은 유리전이온도는 가잠사 22$0^{\circ}C$, 천잠사, 24$0^{\circ}C$ 및 작잠사 255$^{\circ}C$의 값을 나타냈으며 이것은 비결정영역의 전이형상이 각 견사의 구조특성에 따라 다른 거동을 하고 있음을 의미한다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제37권1호
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• pp.21-28
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• 2018

CRISPR/Cas9 gene editing system is an efficient method to mutation in a sequence specific manner. Here we report the direct transfection of the Cas9 nuclease and gene specific guide RNA can be used in BM-N cell line derived from Bombyx mori ovarian tissue to enfeeble function of endogenous gene in vitro. We have used gene editing system to negative regulation components of major signaling cascade, the Toll pathway, which controls B. mori resistance to microbe infections, such as fungi and gram positive bacteria. We demonstrate that the $I{\kappa}B-like$ protein Cactus may controls the activation of transcription factors such as Rel A and Rel B. The direct transfection of Cas9 nuclease and Cactus-specific guide-RNA complex may be used in BM-N cells to disrupt the function of endogenous genes in vitro. A mutation frequency of 30-40% was observed in the transfected cells, and various mutations caused the target region. Moreover, RT-PCR analysis revealed that Cactus gene was down regulated after these mutations. More importantly, mutation of BmCactus stimulated expression of lysozyme, moricin, and lebocin genes. These results suggest that the CRISPR/Cas9 systems are expected to efficiently induce site-specific mutations and it was possible to produce antimicrobial peptide through the gene editing.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제7권2호
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• pp.127-131
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• 2003

Protein disulfide isomerase (PDI) found in the endoplasmic reticulum (ER) catalyzes disulfide bond exchange and assists in protein folding of newly synthesized proteins. PDI also functions as a molecular chaperone and has been found to be associated with proteins in the ER. In addition, PDI functions as a subunit of two more complex enzyme systems: the prolyl-4-hydroxylase and the triacylglycerol transfer proteins. A cDNA that encodes protein disulfide isomerase was previously isolated from Bombyx mori (bPDI), in which open reading frame of 494 amino acids contained two PDI-typical thioredoxin active site of WCGHCK and an ER retention signal of the KDEL motif at its C-terminal, and we report its functional characterization here. This putative bPDI cDNA is expressed in insect Sf9 cells as a recombinant proteins using baculovirus expression vector system. The bPDI recombinant proteins are successfully recognized by antirat PDI antibody, and shown to be biologically active in vitro by mediating the oxidative refolding of reduced and scrambled RNase. This suggests that bPDI may play an important role in protein folding mechanism of insects.

• 동의생리병리학회지
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• 제24권3호
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• pp.463-469
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• 2010

This research is performed to obtain positive evidences of Mori cortex, a kind of oriental medicinal herbs, in the cellular levels. The extracts of M. cortex have shown anti-inflammatory effects against cutaneous inflammation and clinical effects on pulmonary asthma and congestion in oriental medicine. Thus BV2 cells were chosen because microglia are considered as the main immunocompetent cells in the central nervous system. Lipopolysaccharide (LPS)-induced microglial activation of cultured BV2 cells and subsequent release of nitric oxide (NO) and Prostaglandin E2 (PGE2) were effectively suppressed by methylene chloride extract of Morus alba L. (MEMA). From the inflammation-mediated mRNA and protein analyses, we showed that inducible NO synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$) and tumor necrosis alpha (TNF-${\alpha}$) induced by LPS were markedly decreased by MEMA treatment. From the observation of nuclear factor-kB (NF-${\kappa}B$) which is controlling and mediating inflammation through COX-2 and iNOS, there showed that p65, a subunit of NF-${\kappa}B$, was increased in nuclear and $I{\kappa}B$, a competitor of NF-${\kappa}B$, was recovered in cytosol after MEMA treatment. These are corresponding with results of iNOS, COX-2, IL-$1{\kappa}$ and TNF-${\alpha}$, and confirm some suppressive effect against transcriptional activation of NF-${\kappa}B$. In conclusion, the anti-inflammatory action of M. cortex against BV2 microglia cells is expected to protect nerve tissues through suppression of neuronal inflammation in various neurodegenerative diseases.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제23권2호
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• pp.223-229
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• 2011

Cyclophilins are originally identified as cytosolic binding protein of the immunosuppressive drug cyclosporine A. They have an activity of peptidyl prolyl cis/trans-isomerases (PPIase), which may play important roles in protein folding, trafficking, assembly and cell signaling. In this study, we report the cloning and characterization of a Bombyx mori cyclophilin A (bCypA) cDNA. The full-length cDNA of bCypA consist of 947 nucleotides with a polyadenylation signal sequence AATAAA and contain an open reading frame of 498 nucleotides encoding a polypeptide of 166 amino acids. The deduced amino acid sequence of bCypA shares a central peptidyl prolyl cis/trans-isomerase and a cyclosporin-A-binding domain with other cyclophilin sequences. Relative quantification real-time (RT) PCR analysis shows that mRNA transcripts of bCypA are detected in all the investigated tissues and highest expression level in the skin of 3-day-old 5 instar larva. Also, bCypA had PPIase activity on the proline-containing peptides. Accordingly, we suggest that bCypA is a new member of the cyclophilin A (CyPA) family and will be useful for quality control of bioactivity recombinant proteins with proline-containing peptides.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제33권2호
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• pp.75-81
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• 1991

해충의 미생물적 방제를 위하여 Bacillus thuringiensis 살충제 개발에 관한 기초자료를 얻고자 3종의 B. thuringiensis var. Kurstaki, dendrolimus, aizawai와 2종의 공시충으로 누에와 흰불나방에 대한 독성을 검정하여 아래와 같은 연구결과를 얻었다. 1. B. thuringiensis의 누에에 대한 독성검정에서는 kurstaki를 제외하고 3령에 비해 4령의 경우 LD50이 5배의 증가량을 보였고, 변종간 독성의 세기는 dendrolimus, kurstaki, aizawai 순이었다. 2. Bacillus thuringiensis의 흰불나방에 대한 독성검정에서는 kurstaki를 제외하고 4령에 비해 6령의 경우 LD50이 3배의 증가량을 보였고, 변종간 독성의 세기는 dendrolimus, kurstaki, aizawai 순이었다. 3. 령기에 관계없이 사망시간이 큰 차이를 나타내지 않았는데 그 이유는 충체가 증가됨에 따라 단위시간당 섭식량도 증가하므로 치사에 필요한 철대량을 섭식한 것으로 추정된다. 4. B. thuringiensis 변종 중에서 kutstaki는 독성의 세기가 령기에 관계없이 가장 안정된 것으로 나타났다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제34권4호
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• pp.344-349
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• 1995

해충의 방제에 효과적으로 이요할 수 있는 Bactllus thuringiensis 균주를 분리하기 위하여 전국의 다양한 토양을 채취하여 B. thuringiensis의 분포와 독성을 조사하였다. 총 548개의 토양을 전국 각지에 채취하여 포자와 내독소 단백질을 생산하는 64개의 B. thuringiensis를 분리했다. 분리된 64개의 B. thuringiensis를 나비목의 누에(Bombyx mori), 파리목의 빨간집모기(Culex pipens), 딱정벌레목의 쌀바구미(Sitophilus oryzae)의 세 종에 대해서 독성을 검정한 결과, 누에에 독성을 띠는 균주가 42.2%로 가장 많았으며, 누에와 빨간집모기에 동시에 독성을 띠는 균주가 31.3%, 빨간집모기에 독성을 띠는 균주는 20.3%의 비율로 분리되어 다양한 독성 분포를 보였다. 그러나 쌀바구미에 독성을 띠는 균주는 분리되지 않았고, 내독소 단백질은 형성하지만 독성이 없는 무독성 B. thuringiensis가 62%의 비율로 분리되었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제42권4호
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• pp.353-360
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• 2003

곤충병원세균이 효과적으로 병원력을 발휘하는 데 대상 곤충의 면역저하가 요구될 수 있다. 본 연구는 대상곤충의 면역저하가 병원세균의 살충능력에 직접 연관된다는 가설을 세웠다. 곤충병원세균을 5령 누에(Bombyx mori)의 혈강에 접종하였을 때, X. nematophilus는 다른 곤충병원세균인 Staphyiococcus gallinarum 보다 1,200배 높은 병원력을 보였다. 비록, 두 곤충병원세균은 누에의 혈구세포에 대해서 독성효과를 가지고 있지만, X. nematophiius는 S. gallinarum과 비교해보다 빠르고 높은 세포독성 영향을 보였다. 세포성 면역반응에서 5${\times}$$10^{5}$농도로 세균이 접종되었을 때, 누에는 약 20개 정도의 소낭을 형성하였다. 특히, 살아있는 X. nematophilus가 접종된 누에에서 소낭 형성은 크게 감소하였지만, S. gullinarum은 소낭 형성 감소에 영향을 주지 않았다. 두 세균 모두는 prophenoloxidase (proPO)의 활성화를 억제시켰다. 그러나 X. nematophilus.가 S. gallinarum보다 높게 PO 활성화를 억제시켰다. 라이소자임의 활성유도는 S. gallinarum접종 후 4시간에서 관찰되었으나, X. nematophilus를 접종하였을 때는 라이소자임의 활성이 전혀 관찰되지 않았다 이러한 결과들은 누에에서 X. nematophilus가 S. gallinarum보다 더 큰 면역저하를 유발하여 병원성을 높였다는 것을 보여준다. 따라서 본 연구는 곤충병원세균에 의해서 유발된 면역저하는 곤충병원세균의 병원성과 연관되어 있다는 것을 제시한다.다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제3권1호
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• pp.83-88
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• 2001

The effect of topical application with 200,400 and 600 $\mu$g/ml 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) on the fifth larval stadium of the silkworm, B. mori, was analyzed. Larvae treated during fifth larval stadium enhanced larval, cocoon and adult parameters. The larval period was significantly decreased with increase in silk gland weight at 400 and 600 $\mu$g/ml, male cocoon weight and shel1 weight in all the treated groups and filament length and weight at 200 $\mu$g/ml treated group. Length of the ovariole, eggs per ovariole and hatching percentage increased significantly in all the treated groups when compared with those of the carrier control. This suggests that the plant growth regulator 2,4-D in addition to affecting silk production also affect reproductive performance.