감나무 (Diospyros kaki Thunb.)의 기내번식에 효과적인 배지 및 생장조정제를 구명하고자 일목계차랑 (Ichikikeijiro), 도근조생 (Tonawase), 평핵무 (Hiratenenasi) 3품종을 공시재료로 하여 시험한 결과, 신초의 생존에 가장 효과적인 배지는 MS 배지였으며 MS 배지내 질소원의 함량을 1/2∼1배로 조정한 경우가 신초의 증식 및 신장에 효과적이었다. 1/2N-MS배지에 2 mg/L zeatin 처리시 0.9 cm로 가장 많은 신초 신장을 보였고, 5 mg/L 처리시 증식된 신초수가 6.2개로 가장 많았다. 증식된 신초의 발근은 동일 배지에 1 mg/L IBA 처리시 가장 효과적이었다.
미선나무의 기내번식을 위하여 MS배지에 세 가지 싸이토키닌 (zeatin, kinetin 및 BA)을 세 가지 농도로 처리하여 액아 배양을 실시하였다. 줄기유도는 BA가 가장 효과적이었고, 생장은 zeatin이 좋았다. Kinetin은 2.0 및 5.0 mg/L 처리에서 줄기발생 효과가 있었으나 그 효과는 zeatin, BA에 비해 저조했다. 500 lux정도의 약광 하에서 배양은 싸이토키닌 처리에 관계없이 줄기의 생장을 촉진하였다. 발근은 IBA가 첨가된 1/2 GD배지에서 주효했다. 발근된 개체는 인공배양토에서 100% 활착되었고, 정상 생장이 가능했다. 이상의 결과에서 미선나무의 기내 번식이 가능함을 보여 주었다.
본 연구는 윤판나물의 효과적인 기내 증식을 위한 배양 최적 조건을 구명하기 위해 수행되었다. 신초 유도 및 생장에 영향하는 배지(MS, B5 및 WPM) 및 절편체 종류에 따른 실험에서 줄기 유도는 액아 절편을 식물생장조절물질 무첨가 MS 배지에 배양 시 절편 당 2.5개로 가장 좋았고, 줄기 신장은 정아 절편을 식물생장조절물질 무첨가 MS 배지 배양 시 7.2 cm로 가장 효과적이었다. BA 침지 처리 시 신초 유도 효과는 액아배양 유래 신초를 BA 침지 무처리구에서 신초 유도(2.29개/절편) 및 신초 신장(7.28 cm)이 가장 효과적이었으며, BA 침지 시간이 길어짐에 따라 신초 유도 및 길이 생장은 감소하였다. 발근에 영향하는 IBA 농도 효과는 정아유래 신초를 1.0 mg/L 처리구에서 배양 시 최대 발근율(100%) 및 뿌리 유도수(21.3개/절편)를 보였으며, 정아 혹은 액아 유래 신초지 종류에 따른 발근율의 차이는 크지 않은 것으로 관찰되었다. 발근된 식물체는 상토로 이식하여 형태적인 변이 없이 정상적인 생장을 보였다.
Forest medicinal resources, which constitute one of the non-timber forest products, have been regarded as healthy and highly valued products. To meet the increasing demand of the medicinal resources, it is necessary to improve the propagation methods of medicinal plants. In vitro propagation not only allows an opportunity for propagating plants in large numbers but also allows for enhancing the quality and quantity of the desired functional component of a plant by altering the growth factors, such as medium, carbon source, and plant growth regulators influence plant. There have been several studies of in vitro propagation methods, such as axillary bud culture, shooting, and embryogenesis, on Kalopanax septemlobus, Eleutherococcus sessiliflorus, Hovenia dulcis, and Schisandra chinensis in Korea between from 2000 through 2010. Furthermore, there have been attempts to proliferate callus and plantlets for producing useful natural compounds by using bioreactors. Here, we provide an account of the in vitro propagation methods of medicinal trees in Korea based on a review of several micropropagation studies.
An efficient regeneration protocol for stem disc culture of Populus euramericana, which is important species for bioenergy resource in agroforestry, was established. The number of explants that were obtained and the number of explants that regenerated varied with the genotypes. However, in all the genotypes, stem disc culture produced more regenerated shoots than did in axillary bud culture. A comparison of the effects of cytokinin type and concentration on shoot regeneration in different explants (i.e., petiole, leaf, and root segments of P. euramericana) revealed that a concentration of $0.002mg\;l^{-1}$ thidiazuron (TDZ) used on petiole segments resulted in the greatest shoot regeneration (95.83%). The hormonal requirements for the greatest shoot regeneration in the three explant types varied. Different concentrations of $AgNO_3$ and $CoCl_2$ were added separately to the medium to stop the yellowing and subsequent necrosis of the regenerated shoots. Lower concentrations (3 and $5mg\;l^{-1}$) of these compounds improved shoot regeneration and elongation, compared with the control. The in vitro-regenerated shoots were transferred to rooting medium and subsequently acclimatized. The highly efficient regeneration system of P. euramericana reported here can be used for mass propagation of this recalcitrant for regeneration, economically important tree species.
본 연구는 야생 백하수오를 대상으로 기내증식의 최적 조건을 구명하기 위해 수행되었다. 기내 종자발아를 위하여 야생 백하수오 종자를 $GA_{3}$ 용액(100 ppm)에 24시간 침지처리 후 1.0 mg/L BA가 첨가된 WPM 배지에 치상하였을 때 91.6%의 발아율을 보였다. 신초 증식은 1.0 mg/L $GA_{3}$가 첨가된 배지에서 최대 5.2 cm까지 신초가 신장하였으나 비정상적으로 생장하여 결국 고사하였고, 신초를 0.1 mg/L BA가 첨가된 배지에 치상 4 주 후 2.4개의 신초를 획득하였다. 발근은 식물생장조절제(Plant Growth Regulators, PGRs)를 첨가하지 않은 환기처리 배지에 치상하였을 때 3개의 뿌리가 분화되었고, 0.1 mg/L NAA가 첨가된 환기처리 배지에 치상하였을 때 2 cm로 가장 높게 유도되었다. 기외이식 후 생존율은 기내에서 환기 전처리한 개체군이 70%로 가장 높게 나타났다.
인삼의 기내 개화가 결정되는 시점을 조사하기 위하여 접합자배, 유식물체, 자엽마디 절편을 BA와 GA$_3$가 각각 5 $\mu$M 첨가된 MS 배지(화아유도 배지)에 배양하였다. 재료를 화아유도 배지에 다양한 기간 동안 배양하였다가 각각 생장조절제가 첨가되지 않은 기본배지로 옮기게 되면 화아유도가 결정된 재료에서만 개화가 가능하게 된다. 인삼의 기내 개화가 결정되는 데에는 10일간의 배양을 필요로 하였다. 조직학적 관찰 결과, 화아유도 배지에서 배양 10일째의 액아에 존재한 분열조직은 화아로 발달되도록 운명되었음에도 불구하고 형태적으로는 엽아의 상태로 남아있었다. 이러한 분열조직은 배양 15일 경과한 후에야 비로소 전형적인화아의 외형을 갖추었다. 이러한 결과는 식물체에서 영양생장으로부터 생식생장으로의 전환시 일어나는 생화학적 혹은 분자생물학적 연구에 이용될 수 있을 것이다.
한국식물학회 1987년도 식물생명공학 심포지움 논문집 Proceedings of Symposia on Plant Biotechnology
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pp.213-237
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1987
In vitro flowering system may minimize the confounded influence of non-floral meristem parts of plants in studying the relationship of a given treatment and flowering responses. We have induced flower buds from plantlets regenerated from zygotic embryo-derived somatic embryos of ginseng, which circumvented the normal 2-year juvenile period before flowering. The result suggests that the adulthood of ginseng root explants in the experiment previously conducted by Chang and Hsing (1980; Nature 284: 341-342) is not prerequired to flowering of plantlets regenerated through somatic embryogenesis. We have also induced flower buds from elongated axillary brandches from cotyledonary nodes by culturing ginseng zygotic embryos, seedlings, and excised cotyledonary nodes. It was found that 6-benzyladenine (BA) supplemented to the medium was essential for flowering, whereas abscisic acid (ABA) was inhibitory. Gibberellic acid(GA3) was also required for flowering when ABA was present with BA in the medium. The results suggest that cytokinins, gibberellins, and inhibitors play primary, permissive, and preventive roles, respective-ly, in the induction of flowering of ginseng. Tran Thanh Van (1980; Int. Rev. Cytol., Suppl. IIA: 175-194) has developed the "thin cell layer system" in which the induction of shoots, roots, or flower buds from epidermal layer explants were controlled by culture conditions and exogenous growth regulators in the medium, Utilizing the thin cell layer system, Meeks-Wagner et al. (1989; The Plant Cell 1: 25-35) have cloned genes specifically expressed during floral evocation. However, the system is too tedious for obtaining a sufficient amount of plant materials for biochmical and molecular biological studies of flowering. We have developed a garlic callus culture system and one obvious advantaging over the thin cell layer system is that an abundant cells committed to develope into flower buds proliferate. When the above cells were compared by two-dimensional gel electrophoresis with those which have just lost the competence for developing into flower buds, a few putative proteins specific to floral evocation were detected. The garlic callus culture system can be further explored for elucidation of the molecular biological mechanism of floral evocation and morphogenesis.hogenesis.
Plant micropropagation techniques include bud cultures using apical or axillary buds, organogenesis through callus culture or adventitious bud induction, and somatic embryogenesis. In Korea Forest Research Institute (KFRI), the first tissue culture trial in woody plant was initiated from the bud culture of hybrid poplars (Populus alba x P. glandulosa) in 1978. Since then several mass propagation techniques have developed from conifer and hardwood species, resulting in allowing practical application to Poplars, Birches and some oak species. In addition, useful micropropagation and genetic resources conservation techniques were established in some rare and endangered tree species including Abeliophyllum distichum. Among various in vitro propagation techniques, somatic embryogenesis is known to be the most efficient plant regeneration system. Since the first somatic embryo induction was reported in Tilia amurensis by KFRI in 1986, various protocols for direct or indirect somatic embryogenesis systems have developed in conifer and hardwood species including Larix leptolepis, Pinus rigida x P. taeda F1, Kalopanax septemlobus and Liliodendron tulipifera, etc. However, most of these technologies have been developed using juvenile tissues, i.e. immature zygotic embryos or mature embryos. Therefore it has been difficult to directly application to tree breeding program due to their unproven genetic background. Recently remarkable progresses and new approaches have been achieved in mature tree somatic embryogenesis. In this article we reviewed several micropropagation techniques, which have been mainly developed by KFRI and recent international progresses.
Somatic embryos were formed from calli obtained from axillary shoots (raised from nodal segments of glasshouse-grown plants under aseptic conditions), internodal segments (from in vitro-raised plants), and root and coty-ledonary leaf segments (from in vitro-raised seedlings) after 8 weeks of initial culture. Embryo formation was the highest (97.33%) from cotyledonary leaf callus on Mura-shige and Skoog's (MS) medium containing kinetin (KN) (3 mg/L). Somatic embryo induction was lesser with different combinations of auxins while it increased to 100% in internodal segment and cotyledonary leaf calli with 6-benzyladenine (BA) (2mg/L) along with 2,3,5-triiodobenzoic acid (TIBA) (2mg/L). The shoots were induced from somatic embryos raised from root, coty-ledonary leaf and internodal segment calli grown on MS medium containing BA in combination with indole-3-acetic acid (IAA). Maximum of 66.67% cultures formed shoots on MS medium containing BA (1mg/L) in combination with IAA (2mg/L). The shoots raised from somatic embryos were rooted on MS medium supplemented with indole-3-butyric acid (IBA) (2mg/L). The plantlets transferred to the field showed 70% survival rate after one year.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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