• 미생물학회지
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• 제22권4호
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• pp.265-269
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• 1984

E. coli $P^{RDI}$에서 DAP-영양요구성 변이주를 분리하였으며 이 변이주가 갖고 있는 plasmid의 안정성과 활성도를 확인하는 살험을 통하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. Mutagen인 NG를 처리 후 DAP-변이주를 보다 쉽게 분리하기 위하여 항생제처리를 하였다. 이때 사용균주가 갖고 있는 plasmid내의 내성인자들 중에 carbr인자로 인하여 같은 계열에 있는 penicillin유도체들에 대해서는 교차내성을 갖고 있음이 확인되었다. 그러냐 penicillin과 같은 기능을 갖고 있으나 그 구조가 다른 cephalexin, cycloserine에 대해서는 교차 내성을 잘 나타내지 않았으므로 항생제처리로서는 cephalexin을 사용하였다. 2. 세균 접합을 통하여 DAP-균주의 특성을 동정하였다. 즉 nif-gene의 안정성과 활성도는 DAP-균주로 부터 plasmid를 전이반은 전이체에서 6-cyanopurine첨가로 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권5호
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• pp.427-432
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• 1986

The regulation of three ammonia assimilatory enzymes, GDH (glutamate dehydrogenase), GS (glutamine synthetase) and GOGAT (glutamate synthase), has been examined in C. glutamicum. Three kinds of arginine auxotrophs blocked in each step of arginine biosynthetic pathway from glutamate were selected as arg 5, arg 6, arg 8. Histidine and tryptophan auxotrophs were also selected because histidine and tryptophan repressed GS biosynthesis in E. coli. These strains were cultured on the media containing nitrogen-excess and limited conditions, to compare the specific activities of ${\alpha}$-ketoglutarate dehydrogenase(${\alpha}-KGDH$), GDH, GS, GOGAT from the cell-free extracts. These results showed that enzyme levels of ${\alpha}-KGDH$ and GDH from 3 kinds of arginine auxotrophs, histidine and tryptophan auxotrophs in nitrogen-excess condition and those of GS and GOGAT in nitrogen limited condition were increased compared with opposite condition. The tryptophan and histidine auxotrophs showed higher level of glutamate and glutamine than parental strains and other mutants. it is assumed that the higher levels of ${\alpha-KGDH}$ and GDH from mutants in nitrogen-excess condition promoted the accumulation of glutamate and glutamine in fermentation broth. The inhibition of GS activities by ADP suggested that GS is regulated by energy charge in C. glutamicum. The results with histidine, tryptophan, glycine, alanine, serine and GMP implied that a system of feedback inhibition were effective. The GDH, GS and GOGAT biosynthesis in culture broth was markedly repressed by the nature and kinds of available nitrogen sources such as tryptophan, proline, glycine, alanine, serine and tyrosine.

• 한국균학회지
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• 제19권4호
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• pp.276-281
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• 1991

UV에 의해 유도된 P. tannophilus 영양요구주는 Iysine요구성, arginine요구성, methionine요구성, cysteine요구성 등이었다. Protoplast의 생성조건은 Zymolyase농도 0.5 mg/ml, pH 6.5-8.5, 온도는 $37{\sim}47^{\circ}C$, 삼투안정제는 KCI로 하여 1시간 배양이 최적이었다. 세포융합에 의해 생성된 융합주는 체적이 친주의 약 4배이고 형태적으로는 친주와 비슷한 구형 또는 난형이었으나 위균사의 형성이 자주 관찰되었다. 그리고 융합주는 xylose를 탄소원으로 하였을 때에는 발효능의 증대는 없었으나 생육도는 약 2배 증가한 반면에 arginine요구성 변이주인 M7은 생육도의 증가는 없었으나 1.6배의 발효능증대를 나타내었다.

• 한국균학회지
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• 제24권2호통권77호
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• pp.135-141
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• 1996

맛과 향이 탁월하며 항암작용을 지닌 표고버섯 Lentinus edodes의 균사체 균질액에 자외선을 조사하여 돌연변이주를 유도, 선발하였다. 자외선 조사시 생존율은 3분 조사시 2.45%, 10분 조사시 0.024%이었다. 자외선 조사에 의한 돌연변이주 선발율은 0.40%이며, ethidium bromide (EtBr) 농화 법에 의해 glycerol 함유 배지에서 자라지 못하는 균주 34종을 선발하였다. 독립영양형으로 되돌아가는 비율은 $4.81{\times}10^{-4}{\sim}8.46{\times}10^{-4}$이었다. 돌연변이 주의 영양요구성을 검정하여 다양한 amino acid, nucleic acid, vitamin 요구성 균주를 선발하였다. 항진균성 약물의 MIC는 cycloheximide 2.0 ug/ml, p-fluorophenylalanine 1000 ug/ml, benomyl 2000 ug/ml이었다. p-fluorophenylalanine 1000 ug/ml에 내성 균주 5종과 benomyl 1000 ug/ml에 내성인 균주 8종을 선발하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제28권1호
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• pp.13-18
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• 1985

세균의 protopalst 융합을 연구하기 위하여 Bacillus subtilis로부터 두 개의 영양 요구성 균주를 NTG처리에 의해서 분리하였다. 두 개의 영양 요구성 균주는 Uracil 요구성 균주와 Tryptophan 요구성 균주였다. $ura^-$균주와 $trp^-$균주의 친주로의 역돌연변이율은 각각 $2.4{\times}10^{-8}$과 $1{\times}10^{-8}$이하였다. Lysozyme 처리에 의하여 protoplast를 만들기 위한 최적 pH와 온도는 6.5와 $30^{\circ}C$였다. Protoplast 생성을 위한 lysozyme의 최적농도는 $200{\mu}g/ml$였다. Protoplast가 본래의 균체로 회복되는 율은 3.3%였다.

• 한국균학회지
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• 제13권3호
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• pp.185-189
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• 1985

식용버섯의 유전 연구와 균주 개발을 위하여 표고버섯의 담자포자에 자외선을 조사하여 영양요구성 균주를 유발하였는바, 자외선을 담자포자에 40초 조사했을때 약 5 %의 포자 생존율을 보였으며 120초 조사에서 완전히 발아력을 상실하였다. 30초에서 100초까지 10초 간격으로 자외선을 조사하여 7088 colonies를 검정한 결과 71개의 auxotrophs를 선발하여 1.0%의 유발율을 얻었으며, 60초 조사에서 1.35 %의 가장 높은 유발 빈도를 나타내었는데 이때의 포자 생존율은 1.3% 이었다. 71개의 auxotrrophs 중에서 29개 균주의 영양요구성을 검정한 결과 nucleic acid-requiring strain이 3, nucleic acid/vitamin-requiring strain이 13, nucleic acid/amino acid-requiring strain이 1, vitamin-requiring strain이 7, 그리고 amino acid-requiring strain이 5이었다.

• 미생물학회지
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• 제21권3호
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• pp.156-162
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• 1983

Conditions for effcient formation and regeneration of protoplasts of Micromonospora rosaria and Micromonospora purpurea were investigated. The state of inoculm, culture stage and growth in a medium containing partially growth-inhibiting concentration of glycing have significant effects on portoplasting. A high frequency of regeneration (up to 30%) was accomplished with a hypertonic regeneration agar medium defined by Okanishi for Strptomyces. Using the optimal conditions for protroplasting and regeneration, protoplast fusion of auxotrophic M.rosaria was carried out. Polyethylene glycol 1,000 was chosen for fusogenic agent. When signgle auxotrophs were used, the recombinant frequency of auxortrophic markers varied from 1.3 to 3.2%. Using two double auxotrophs, the recombinant frequencies of 0.7-4.3% were obtained. Much lower frequencies(three or more orders of magnitude) were observed by the conventional matings.

• Applied Biological Chemistry
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• 제28권2호
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• pp.92-97
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• 1985

Agrobacterium tumefaciens A 136에 자외선은 조사(照射)하여 Ti-plasmid 숙주로 이용할 수 있는 arginine 영양요구주를 선발하고자 하였다. A. tumefaciens의 생육을 600nm에서의 흡광도(吸光度)로 측정할 때 TY배지에서 2% 접종시 7시간 부터 16시간 사이에 대수기를 보였고 generation time은 4.8시간이었다. $800{\mu}w/cm^2$의 자외선 강도로 $30{\sim}50$초 조사(照射)에서 $1{\sim}0.1%$의 생존율을 보였다. 자외선 조사(照射)로 mutation을 유도한 다음 5,000개의 colony에서 15개의 mutants를 얻었으며 그 중 2개는 arginine 영양요구주였고 3개는 asparagine 영양요구주였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권5호
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• pp.407-412
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• 1988

트립토판 생산성을 향상시키기 위해 대장균 변이 주인 SB1007로부터 sulfanilamide 내성 균주를 유도하여 SA 3-39-16출 분리하고 이 균주로부터 tyrosine 영양요구주인 TY-90을 개발하였다. 시험관배양시 TY-90균주는 모균주보다 트립토판 생산량이 우수하였으나 발효조 배양시에는 모균주에 비해 낮은 양의 트립토판이 축적되었다. 발효조에서의 생산성 증대를 인해 또 다른 대장균 변이주인 SB2756으로부터 새로운 변이주의 개발을 모색하였다. 먼저 이중 영양요구성 균주인 SB2756의 revertant를 분리하여 그중 2,000mg/$\ell$ 농도의 $\beta$-thenylalanine에 내성을 갖는 TA-40-10을 분리하였고 이 균주로부터 phenylalanine 영향요구주인 TP-4를 개발하였다. 이 TP-4균주는 발효조에서 71시간 배양시 3.7g/$\ell$의 L-tryptophan을 생산하였다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제23권1호
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• pp.79-86
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• 2000

Heterokaryotic nuclear hybrids overcoming the natural barriers of incompatibility have been studied in basidiomycetes. To produce these nuclear hybrids between incompatible mushrooms, which have several potent pharmacological effects, nuclear transfer was performed between Lentinula edodes and Coriolus versicolor. Nuclei from serine auxotrophs of Lentinula edodes, $LE207(Ser^{-})$ were transferred into the protoplasts of arginine auxotrophs of Coriolus versicolor, $CV17(Ser^{-})$using 30% polyethylene glycol 4000 in 10 mM $Cacl_{2}$-glycine solution (pH 8.0). Nulcear transfer progenies were selected by nutritional complementation on minimal media supplemented with 0.6 M sucrose. The progenies were classified based on colony morphology to L. edodes-like, C, versicolor-like and non-parental type. Most of the progenies grew slower than either parent. The number of nuclei per cell was similar but the DNA content varied between progenies. The isozyme patterns of nuclear hybrids resembled either of the parent porfiles or showed a mixed profile.