Isolation of Uracil and Tryptophan Auxotrophs of Bacillus subtilis and Regeneration of their Protoplasts

Bacillus subtilis의 $Ura^-$와 $TrP^-$균주(菌株)의 육성(育成)과 Protoplast 조제(調製) 및 Regeneration

To investigate the fusion of bacterial protoplasts, two auxotrophic mutants of Bacillus subtilis were isolated after treatment with nitrosoguanidine. Two auxotrophs were uracil-auxotroph and tryptophan-auxotroph. Back mutation frequencies of $ura^-$ and $trp^-$ -auxotrophs were $2.4{\times}10^{-8}$ and less than $1.0{\times}10^{-8}$, respectively. The optimal pH and temperature of protoplast formation with lysozyme were 6.5 and $30^{\circ}C$. The optimal lysozyme concentration was $200{\mu}g/ml$. The regeneration frequency of protoplast was 3.3%.

세균의 protopalst 융합을 연구하기 위하여 Bacillus subtilis로부터 두 개의 영양 요구성 균주를 NTG처리에 의해서 분리하였다. 두 개의 영양 요구성 균주는 Uracil 요구성 균주와 Tryptophan 요구성 균주였다. $ura^-$균주와 $trp^-$균주의 친주로의 역돌연변이율은 각각 $2.4{\times}10^{-8}$과 $1{\times}10^{-8}$이하였다. Lysozyme 처리에 의하여 protoplast를 만들기 위한 최적 pH와 온도는 6.5와 $30^{\circ}C$였다. Protoplast 생성을 위한 lysozyme의 최적농도는 $200{\mu}g/ml$였다. Protoplast가 본래의 균체로 회복되는 율은 3.3%였다.