This study was conducted to investigate the rheological properties of protein-bound polysaccharide powders (SD-1, 2, 3) using ultrafiltration (UF) and spray drying (SD) process from Agaricus blazei Murill. The calculated weight-average molar mass (Mw) in the positions at 29.7 mL (for SD-1), and at 27.8 mL (for SD-2), and at 18.7 mL (for SD-3) was $8.2{\times}10^3,\;9.6{\times}10^4$, and $5.9{\times}10^6g/mol$, respectively. As concentration increased the solution showed higher pseudoplasticity where the pseudoplasticity decreased as temperature increased. The flow behaviors of spray dried powder solutions were more fitted to Herschel-Bulkley equation than Power law equation. Apparent viscosity of SD-2 was more temperature-dependent than that of SD-1 and 3. However, the SD-3 tended to be more concentration-dependent than SD-1 and 2 as temperature increasing.
Two ${\beta}$-1,4-glucanases (DI and DIII fractions) were purified to homogeneity from the culture filtrate of a cellulolytic bacteria, Cellulomonas sp. CS 1-1, which was classified as a novel species belonging to Cellulomonas uda based on chemotaxanomic and phylogenetic analyses. The molecular mass was estimated as 50,000 Da and 52,000 Da for DI and DIII, respectively. Moreover, DIII was identified as a glycoprotein with a pI of 3.8, and DI was identified as a non-glycoprotein with a pI of 5.3. When comparing the ratio of the CMC-saccharifying activity and CMC-liquefying activity, DI exhibited a steep slope, characteristic of an endoglucanase, whereas DIII exhibited a low slope, characteristic of an exoglucanase. The substrate specificity of the purified enzymes revealed that DI efficiently hydrolyzed CMC as well as xylan, whereas DIII exhibited a high activity on microcrystalline celluloses, such as Sigmacells. A comparison of the hydrolysis patterns for pNP-glucosides (DP 2-5) using an HPLC analysis demonstrated that the halosidic bond 3 from the nonreducing end was the preferential cleavage site for DI, whereas bond 2, from which the cellobiose unit is split off, was the preferential cleavage site for DIII. The partial N-terminal amino acid sequences for the purified enzymes were $^1Ala-Gly-Ser-Thr-Leu-Gln-Ala-Ala-Ala-Ser-Glu-Ser-Gly-Arg-Tyr^{15}$-for DI and $^1Ala-Asp-Ser-Asp-Phe-Asn-Leu-Tyr-Val-Ala-Glu-Asn-Ala-Met-Lys^{15}$-for DIII. The apparent sequences exhibited high sequence similarities with other bacterial ${\beta}$-1,4-glucanases as well as ${\beta}$-1,4-xylanases.
Chattopadhyay, S.;Institute, Traning;Majil, M.D.;Pratheesshkumar;Das, K.K.;Saratchandra, B.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.5
no.2
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pp.183-188
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2002
Anti-fungal potential of 5 plant extracts viz., Eucalyptus citriodora, Allium sativum, Cassia sophera, Chromolaena odorata and Datura metel on the growth of mulberry brown leaf spot pathogen Myrothecium roridum were examined. Except fur the aqueous extract of Allium bulb, ethanolic leaf extract of all other plants more efficiently reduced the colony growth of the fungus on potato-dextrose-agar, Of which, Allium and Eucalyptus extracts were more effective. Initiation of radial growth of M. roridum on solid media was deferred maximum 6 days by ethanolic Eucalyptus extract and 4 days by aqueous Allium extract at $0.4 mg.ml^{-1}$. In the liquid media amended with Eucalyptus extract ($0.4 mg.ml^{-1}$) complete inhibition of sporulation was noticed upto 8 days, and initial inhibition of mycelial bio-mass generation was considerably diminished with time and reduction was 1.3 fold 14 days after application. While, complete inhibition of mycelial growth for 6-14 days was recorded with $\geq$0.1 mg.ml$^{-1}$ commercial eucalyptus oil. However, rejuvenation of growth appeared when fungus was re-inoculated in fresh media. Post-inoculate application of different doses Of Eucalyptus and Allium extracts significantly (p < 0.05) reduced the disease severity in pot-ted mulberry. However, persistence of the effect up to 28 days was apparent at $\geq$ 1.0 mg.ml$^{-1}$ and effectively was on par with carbendazim (1 mg.ml$^{-1}$ ). Almost equal control ability of 1.0 mg.ml$^{-1}$ Eucalyptus extracts can be achieved by ca. 10 times lowered dose of commercial eucalyptus oil. It seems, the toxic principle of E. citrodora to M. roridum is fungistatic in nature and may have essential oil based origin.
Extracellular protease, from Aeromonas hydrophila Ni 39, was purified 16.7-fold to electrophoretic homogeneity with an overall yield of 19.9%, through a purification procedure of acetone precipitation, and Q Sepharose and Sephacryl S-200 chromatographies. The isoelectric point of the enzyme was 6.0 and the molecular mass, as determined by Sephacryl S-200 HR chromatography, was found to be about 102 kDa. SDS/PAGE revealed that the enzyme consisted of two subunits, with molecular masses of 65.9 kDa. Under standard assay conditions, the apparent $K_{m}$ value of the enzyme toward casein was 0.32 mg/ml. About 90% of the proteolytic activity remained after heating at 60$^{\circ}C$ for 30 min. The highest rate of azocasein hydrolysis for the enzyme was reached at 60$^{\circ}C$, and the optimum pH of the enzyme was 9.0. The enzyme was inhibited by the serine protease inhibitor, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), by about 87.9%, but not by E64, EDTA, pepstatin or 1,10-phenanthroline. The enzyme activity was inhibited slightly by Ca$\^$2+/, Mg$\^$2+/ and Zn/supb 2+/ ions.
Kim, Sung-Min;Lee, Jung-Sun;Lee, Yoon-Hee;Kim, Woo-Jung;Do, Su-Il;Choo, Young-Kug;Park, Yong-Il
Molecules and Cells
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v.24
no.3
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pp.416-423
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2007
Alterations in the glycan chains of cell surface glycoconjugates are frequently involved biological processes such as cell-cell interaction, cell migration, differentiation and development. Cultured embryonic (E18) rat cortical neurons underwent apoptosis in response to camptothecin, and lectin histochemistry showed that binding to apoptotic neurons of FITC-conjugated Maackia amurensis agglutinin (MAA), which is specific for terminal ${\alpha}2,3$-sialic acid residues, increased progressively with increasing concentrations of camptothecin. Analysis of the total proteins of apoptotic neurons by SDS-PAGE, and lectin blotting using HRP-labeled MAA, revealed that the expression of terminal ${\alpha}2,3$-sialic acid residues on an unknown protein with an apparent molecular mass of 25.6 kDa also increased in apoptotic neurons. NP-HPLC analysis of the total cellular N-glycans of normal and apoptotic neurons demonstrated that the expression of structurally simpler biantennary types of N-glycans fell by 49% during apoptosis whereas the more branched triantennary types of N-glycans with terminal sialic acid residues increased by up to 59%. These results suggest that increased surface expression of ${\alpha}2,3$-sialic acid residues and hyperglycosylation of N-glycans is a common feature of cellular responses to changes in cell physiology such as tumorigenesis and apoptosis.
Veeranagouda, Y.;Benndorf, Dirk;Heipieper, Hermann J.;Karegoudar, T.B.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.18
no.4
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pp.663-669
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2008
The solvent-tolerant bacterium Enterobacter sp. VKGH12 is capable of utilizing n-butanol and contains an $NAD^+$-dependent n-butanol dehydrogenase (BDH). The BDH from n-butanol-grown Enterobacter sp. was purified from a cell-free extract (soluble fraction) to near homogeneity using a 3-step procedure. The BDH was purified 15.37-fold with a recovery of only 10.51, and the molecular mass estimated to be 38 kDa. The apparent Michaelis-Menten constant ($K_m$) for the BDH was found to be 4 mM with respect to n-butanol. The BDH also had a broad range of substrate specificity, including primary alcohols, secondary alcohols, and aromatic alcohols, and exhibited an optimal activity at pH 9.0 and $40^{\circ}C$. Among the metal ions studied, $Mg^{2+}$ and $Mn^{2+}$ had no effect, whereas $Cu^{2+},\;Zn^{2+}$, and $Fe^{2+}$ at 1 mM completely inhibited the BDH activity. The BDH activity was not inhibited by PMSF, suggesting that serine is not involved in the catalytic site. The known metal ion chelator EDTA had no effect on the BDH activity. Thus, in addition to its physiological significance, some features of the enzyme, such as its activity at an alkaline pH and broad range of substrate specificity, including primary and secondary alcohols, are attractive for application to the enzymatic conversion of alcohols.
Chang, Hyun-You;Lee, Chan;Choi, Sung-Woo;Yun, Jong Won
Journal of Mushroom
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v.6
no.1
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pp.27-31
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2008
The optimization of submerged culture conditions for mycelial growth and exopolysaccharide (EPS) production in an edible mushroom Tremella fuciformis were studied in shake flasks and bioreactors. The temperature of $28^{\circ}C$ and pH 8 in the beginning of fermentation in agitated flasks was the most efficient condition to obtain maximum mycelial biomass and EPS. The optimal medium constituents were as follows (g l-1): glucose 20, tryptone 2, $KH_2PO_4$ 0.46, $K_2HPO_4$ 1 and $MgSO_4H_2O$ 0.5. The fungus was cultivated under various agitation and aeration conditions in a 5L stirred-tank bioreactor. The maximum cell mass and EPS production were obtained at a relatively high agitation speed of 200 rpm and at an aeration rate of 2 vvm. The flow behavior of the fermentation broth was Newtonian and the maximum apparent viscosity (35 cP) was observed at a highly aerated condition (2 vvm). The EPS productivity in an airlift reactor was higher than that in the stirred-tank reactor. The EPS was protein-bound polysaccharides consisted of mainly mannose, xylose, and fructose. The molecular weights of EPS were determined to be $1.3{\sim}1.5{\times}10^6$.
Mattioli, Stefano;Curti, Stefania;De Fazio, Rocco;Mt Cooke, Robin;Zanardi, Francesca;Bonfiglioli, Roberta;Farioli, Andrea;Violante, Francesco S.
Safety and Health at Work
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v.3
no.1
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pp.52-57
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2012
Objectives: Lifting heavy weights involves the Valsalva manoeuvre, which leads to intraocular pressure spikes. We used data from a case-control study to further investigate the hypothesis that occupational lifting is a risk factor for retinal detachment. Methods: The study population included 48 cases (patients operated for retinal detachment) and 84 controls (outpatients attending an eye clinic). The odds ratios (OR) of idiopathic retinal detachment were estimated with a logistic regression model (adjusted for age, sex and body mass index). Three indexes were used to examine exposure to lifting; 1) maximum load lifted, 2) average weekly lifting, 3) lifelong cumulative lifting. Results: For all indexes, the most exposed subjects showed an increased risk of retinal detachment compared with the unexposed (index 1: OR 3.57, 95% confidence interval [CI] 1.21-10.48; index 2: OR 3.24, 95% CI 1.32-7.97; index 3: OR 2.23, 95% CI 1.27-8.74) and dose-response relationships were apparent. Conclusion: These results reinforce the hypothesis that heavy occupational lifting may be a relevant risk factor for retinal detachment.
To isolate a novel gene for antibacterial peptide, an inducible clone(BmInc8) was selected by differential screening strategy from Bombyx mori cDNA library prepared from lavae injected with Escherichia coli. This clone contained a cDNA insert of 564 nucleotides and encoded 59 amino acids with an apparent molecular mass of 6.3 kDa. The cDNA sequence of BmInc8 had 61.2% identity compared to that of the bactericidin from Manduca sexta and also the deduced amino acids sequences from this insert had 65% identity compared to that of the cecropin D peptide Hyalophora cecropia. The transient expression assay of this insert using prokaryotic expression vector system revealed that the expressed peptide displayed the antibacterial activity. The cDNA sequence was deposited in GenBank under the accession number U30289.
Kim, Ju-Hyeon;Oh, Jung-Mi;Chun, Sungkun;Park, Hye Yoon;Im, Wan Taek
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.30
no.3
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pp.391-397
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2020
In this study, we used a novel α-L-arabinopyranosidase (AbpBs) obtained from ginsenoside-converting Blastococcus saxobsidens that was cloned and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3), and then applied it in the biotransformation of ginsenoside Rb2 into Rd. The gene, termed AbpBs, consisting of 2,406 nucleotides (801 amino acid residues), and with a predicted translated protein molecular mass of 86.4 kDa, was cloned into a pGEX4T-1 vector. A BLAST search using the AbpBs amino acid sequence revealed significant homology with a family 2 glycoside hydrolase (GH2). The over-expressed recombinant AbpBs in Escherichia coli BL21 (DE3) catalyzed the hydrolysis of the arabinopyranose moiety attached to the C-20 position of ginsenoside Rb2 under optimal conditions (pH 7.0 and 40℃). Kinetic parameters for α-L-arabinopyranosidase showed apparent Km and Vmax values of 0.078 ± 0.0002 μM and 1.4 ± 0.1 μmol/min/mg of protein against p-nitrophenyl-α-L-arabinopyranoside. Using a purified AbpBs (1 ㎍/ml), 0.1% of ginsenoside Rb2 was completely converted to ginsenoside Rd within 1 h. The recombinant AbpBs could be useful for high-yield, rapid, and low-cost preparation of ginsenoside Rd from Rb2.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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