군소에서 정제한 GAG는 대식세포주인 RAW 264.7에서 세포독성은 보이지 않았으며 NO 생성량, TNF-$\alpha$, IL-6 생성량을 증가시켜 면역조절 효과가 있음을 확인하였다. 그리고 $100{\mu}g$/mL 농도에서 배양 72시간 후 약 40%에 가까운 위암세포(AGS) 성장 억제 효과가 나타났고, 정상세포 IEC-6에는 독성을 보이지 않았다. 이 같은 결과는 면역조절을 위한 기능성식품 혹은 위암 치료제로서 군소의 당 추출물과 GAG의 활용 가능성을 제시한다.
남해안에서 주로 여름철에 어획하여 부산 및 경남 지역을 위주로 소비하고 있는 군소에서 다당류 추출을 위한 최적 조건을 검토하였다. 군소 다당류 추출을 위한 단백질 가수분해 효소로는 Flavourzyme 500 MG가 가장 효과적이었고, 추출한 다당류의 회수를 위한 가장 효율적인 추출물의 농도와 ethanol 첨가량은 각각 Brix 60과 5배량이었다. DEAE-Sepharose 칼럼 크로마토그래피로 얻은 크로마토그램상의 전기전도도와 전기영동 이동도에 근거하여 0.5~0.75 M NaCl 상에서 용출되는 물질이 GAG임을 확인하였으며, heparan sulfate인 것으로 추정하였다. 다당추출물과 정제 GAG의 uronic acid 함량은 각각 1.0 g/100 g과 6.0 g/100 g이었고, GAG를 구성하는 성분으로 지표물질인 hexosamine의 함량은 당 추출물과 정제물에서 각각 5.6 g/100 g과 25.7 g/100g이었다. 정제물은 agarose 겔 전기영동 상에서 heparan sulfate로 추정되었으며, 분자량은 겔 크로마토그래피에서 29.6 kDa으로 나타났다.
본 연구에서는 군소내장을 각 용매별로 분획하여 암세포 성장 억제 효과와 quinone reductase (QR) 유도 활성증가 효과를 알아보았다. 간암 세포인 HepG2, 유방암 세포주인 MCF-7, 대장암 세포주인 HT-29 그리고 피부암 세포주인 B16-F10 를 이용하여 암세포 성장 억제 효과를 실험한 결과 모든 세포주에서 AKMM층에서 농도 의존적으로 가장 높은 암세포 성장 억제 효과를 나타내었다. 그리고 다음으로 AKMB층, AKMH층 및 AKMA층의 순이었다. 그리고 4종의 암세포주 중에서 B16-F10 세포주가 가장 높은 암세포 성장 억제 효과를 나타내어 특히 피부암에 대한 예방효과가 기대되어진다. 또한 암 예방 효과를 알아보기 위하여 4종의 암세포 중 유일하게 quinone reductase를 가지고 있는 인체 간암세포주인 HepG2를 이용하여 QR 유도 활성 증가 효과를 측정한 결과, 암세포 성장 억제 효과에 있어서 가장 높은 효과를 나타낸 AKMM층에서 가장 높은 QR 유도 활성 증가 효과를 나타내었다. 그러나 다른 분획층에서는 QR 유도 활성 증가 효과를 거의 볼 수 없었다. 이상으로 암세포 성장 억제 효과와 QR 유도 활성 효과에서 모두 methanol 분획층인 AKMM층에서 가장 높게 나타났으므로 이 분획층에 유효한 생리활성 물질이 함유되어 있을 가능성이 추정되어진다. 따라서 폐기되어지는 군소부산물인 내장을 이용한 암 예방 관련 기능성 식품의 개발 가능성이 기대되어지며, 이를 위한 AKMM분획층에 대한 더욱더 심도 높은 집중적인 연구가 요구되어진다.
Amyloid plaque, also called senile plaque, the product of aggregation of ${\beta}$-amyloid peptides ($A{\beta}$), is observed in brains of the patients with Alzheimer's disease (AD) and is one of the key factors in etiology of the disease. In this study, hydrolysates obtained from the sea hare (Aplysia kurodai) were investigated for ${\beta}$-secretase inhibitory peptide. The sea hare's muscle protein was hydrolyzed using six enzymes in a batch reactor. Trypsin hydrolysate had highest ${\beta}$-secretase inhibitory activity compared to the other hydrolysates. ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was separated using Sephadex G-25 column chromatography and high-performance liquid chromatography on a C18 column. ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was identified as eight amino acid residues of Val-Ala-Ala-Leu-Met-Leu-Phe-Asn by N-terminal amino acid sequence analysis. $IC_{50}$ value of purified ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was $74.25{\mu}M$, and Lineweaver-Burk plots suggested that the peptide purified from sea hare muscle protein acts as a competitive inhibitor against ${\beta}$-secretase. Results of this study suggest that peptides derived from sea hare muscle may be beneficial as anti-dementia compounds in functional foods or as pharmaceuticals.
군소에서 추출한 다당류로부터 DEAE-Sepharose 상에서 glycosaminoglycan(GAG)을 정제하여 기능기의 분포, 구성당의 분포, 이당류의 조성과 당 구조를 조사하였다. 정제한 GAG는 기본 형태를 구성하는 이당류 단위가 전체 구성물 중 55% 이상을 차지하고 있는 다당 복합체였다. 정제한 GAG는 1648 $cm^{-1}$에서 amide I의 특징적인 띠와 1457 $cm^{-1}$에서 C-O stretch, 탄수화물 및 아미노산의 특징, 866 $cm^{-1}$에서 단당류의 특징을 보이는 것으로 나타났다. 정제한 GAG는 fucose, N-acetylgalactosamine, N-acetylglucosamine, glucose, galactose, 미량의 mannose와 xylose로 구성되어 있는 것으로 나타났고, 이중에서 N-acetylgalactosamine, N-acetylglucosamine이 70% 이상을 차지하는 다당 복합체인 heparan sulfate인 것으로 추정되었다. 군소 GAG는 단백질핵의 threonine 잔기에 O-연결된 GlyUA(2S)-GlcNS와 GlyUA-GlcNS(6S) 구조를 가지고 있는 것으로 나타났다.
본 연구는 해양생물 중 페기되어지인 군소내장을 추출하고 각 용매별로 분획하여 항산화 효과 및 항균활성을 측정하였다. DPPH free radical 소거활성을 측정하여 항산화 활성효과를 알아 본 결과 AKMB층이 $286.66\;{\mu}g/mL$에서 50%의 DPPH free radical의 소거활성을 보여 가장 높은 항산화 효과를 나타내었다. ROS 제거활성 측정 결과에서도 AKMB층이 가장 높은 항산화 효과를 나타내었으며 $54.73\;{\mu}g/mL$에서 50%의 ROS 제거 활성을 나타내었고, $ONOO^-$ 제거활성 역시 AKMB층이 가장 높게 나타났으며, $65.64\;{\mu}g/mL$에서 50%의 $ONOO^-$ 제거활성을 나타냈다. 또한 paper disc method를 이용한 항균효과 실험결과, Proteus vulgaris의 경우는 AKMH층과 AKMM층의 두층에서 높은 항균활성을 나타내었고, 그 외 사용한 모든 균주에서는 AKMM층에서 가장 높은 항균활성을 나타냄을 알 수 있었다. 이상의 결과로 항산화효과는 군소내장의 부탄올 분획층인 AKMB층에서 가장 높았으며, 항균효과는 주로 메탄올 분획층인 AKMM층에서 높은 항균활성을 나타내었다. 따라서 군소내장의 AKMB층과 AKMM층에서 항산화 활성과 항균력을 나타내는 효과적인 생리활성물질이 함유되어 있을 것으로 사료되어지며, 앞으로 더욱 심도 있는 연구를 통하여 이러한 물질들의 분리를 위한 연구가 더 필요한 것으로 판단되며 이러한 활성성분을 이용한 식품 저장성과 안전성 향상을 위한 항산화제, 식품첨가제 및 천연 식품 보존제 등의 개발 가능성이 기대되어진다.
Three new copepod species of Anthessius are described as associates of mollusks. Anthessius tuberculatus n. sp. associated with the bivalve Asaphis violascens (Forsskal in Niebuhr, 1775) in Kosrae, Micronesia bears a pair of dorsal tubercles on the fifth pedigerous somite. Anthessius rarus n. sp. is associated with the aplysiid gastropod Dolabella auricularia (Lightfoot, 1786) in Bohol, the Philippines and has elongate caudal rami which are about 5.2 times as long as wide. Anthessius cucullatus n. sp. associated with the aplysiid gastropod Aplysia kurodai Baba, 1937 in Korea has a hood-like dorsal expansion on genital double-somite of the female.
군소의 중추신경계로부터 myomodulin A (MMA)과 myomodlin E (MME)의 정제에 대해 보고하고자 한다. 500마리 군소의 중추신경계를 산조건으로 추출한 후 4종류의 HPLC column system에 적용하여 두가지 신경성 펩타이드를 정제하였다. HPLC 분리과정에서 얻어진 모든 분획의 활성을 조사하기 위하여 bioassay system으로 진주담치 (Mytilis edulis)의 ABRM을 이용하였다. 최종 정제된 신경성 펩타이드는 Edman 분해법을 이용한 아미노산 서열 분석기, 질량분석기와 화학합성을 통해 완전한 일차구조를 밝힐 수 있었다. 정제한 MMA와 MME의 일차구조는 각각 Pro-Met-Ser-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$, (847.41 Da) 과 Gly-Leu-Gln-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$, (830.50Da) 이었다. 또한 이들 합성 펩타이드는 진주담치의 ABRM에 대해 phasic contration의 조절활성을 나타내었다.
군소인 Aplysia kurodai의 중추신경절로부터 정제된 myomodulin A (MMA)가 정제되었다. MMA의 일차구조는 Pro-Met-Ser-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$이며, 이 펩타이드는 다른 연체동물에서 발견된 myomodulin 계열의 펩타이드와 같은 구조를 지닌다. 정제된 MMA는 Mytilus edulis의 anterior byssus retractor muscle (ABRM)에서 phasic contraction을 조절하는 것으로 나타났다. MMA의 구조와 활성간의 상관관계를 알아보기 위해서 MMA, Des[$Pro^1$]-MMA, Des[$Pro^1,Met^2$]-MMA, Des[$Pro^1,Met^2,Ser^3$]-MMA 및 MME를 합성하였다. Des[$Pro^1$]-MMA, Des[$Pro^1,Met^2$]-MMA 및 Des[$Pro^1,Met^2,Ser^3$]-MMA의 일차구조는 각각 Met-Ser-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$, Ser-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$ 및 Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$이다. MMA 및 합성 물질들을 사용하여 ABRM 및 Achatinafulica의 소낭과 penial retractor muscle에 대해 활성을 측정하였다. MMA는 $1{\times}10^{-8}$ M 또는 더 낮은 농도에서 ABRM의 수축활성을 증가시키는 것으로 나타났지만, $1{\times}10^{-8}$ M 또는 고농도에서는 phasic contraction을 억제하였다. MMA와 유도체들은 소낭에 대해서는 수축반응을 보였지만, penial retractor muscle에 대해서는 이완 활성을 나타내었다. 이러한 결과들은 MMA의 C-말단부위에 있는 Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$가 ABRM의 수축반응뿐만 아니라 연체동물의 생식기능 및 소화 활성을 조절하기 필요한 최소한의 구조라는 것을 나타낸다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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