감국에 존재하는 항충치활성 물질 및 glucosyltransferase 저해 효과에 대한 정보를 얻고자 본 연구를 시도하였다. 감국 ethanol 추출물의 항충치활성을 S. mutans 및 구강세균에 대해 검색한 결과, S. mutans와 2종의 구강세균에 대하여 활성이 높게 나타났다. 감국 ethanol 추출물의 농도에 따라 GTase 저해효과는 $78.4{\sim}92.3%$의 범위로 나타나 농도가 증가할 수록 활성도 함께 증가하는 경향을 나타냈다. 감국을 ethanol로 추출, 용매분획하여 얻어진 활성성분을 silica gel adsorption chromatography, Sephadex LH-20 chromatography, TLC 그리고 HPLC 등의 방법으로 분석한 결과, 감국에 존재하는 항충치활성 물질은 약간의 극성을 띠는 중성물질로 분자량이 200-400정도 되는 저분자 물질인 것으로 확인되었다.
솔잎과 소나무 가지의 항충치 효과와 기능성 소재로서의 활용 가능성을 조사하기 위하여 추출물과 용매 분획의 S. mutans에 대한 항균효과, GTase 활성 억제효과 그리고 열과 pH 에 대한 안정성을 측정하였다. 열수추출물 보다는 70% EtOH 추출물이, 솔잎보다는 가지 추출물이 S. mutans에 대한 생육저해 효과가 큰 것으로 나타났으며, 특히 n-hexane 분획의 MIC 는 0.6 mg/mL로서 S. mutans에 대해 가장 높은 항균효과를 나타내었다. 그리고 솔잎과 가지 추출물의 GTase 활성 억제 효과는 S. mutans에 대한 생육억제 효과 결과와 마찬가지로 열수추출물 보다는 70% EtOH 추출물이, 솔잎 보다는 가지 추출물이 GTase 활성 억제 효과가 큰 것으로 나타났다. 한편 솔잎의 n-hexane은 열처리 온도가 증가함에 따라 S. mutans에 대한 항균력이 크게 감소하였고 pH의 변화에도 크게 영향받는 것으로 나타났다.
커피박을 알카리 처리한 후 Viscozyme과 Alcalase로 효소분해하여 추출물을 얻었다. 커피박을 알카리와 효소로 처리하였을때 추출물의 페놀성 화합물 함량이 증가하였고, 이에 따라 양이온라디칼과 유리라디칼에 대한 우수한 소거 활성을 나타내었다. 특히 커피박에 알카리와 Alcalase를 병행 처리하였을 때 페놀성 화합물 함량과 항산화 활성이 가장 높게 나타났고, 농도에 비례하여 Streptococcus mutans 균의 생육을 억제하였다. 결론적으로 알카리 처리된 커피박의 Alcalse 효소분해물은 우수한 항산화 및 항충치균 효과를 나타내었다.
황련 추출물의 충치 예방효과 가능성을 확인하고자 S. mutans JC-2에 대하여 황련 추출물 및 그의 주요 활성성분의 항균효과, 산생성 억제효과, GTase 활성 억제효과, 균체부착 억제효과를 조사하였다. 메탄올 추출물은 물추물에 비하여 S. mutans에 대해 강한 항균효과를 나타내었으며, 이들 추출물의 S. mutans에 대한 최소저지농도(MIC)는 각각 $130\;{\mu}g/mL$, $200\;{\mu}g/mL$이었다. 황련의 주요 활성성분인 berberine과 palmatine의 MIC는 각각 $50\;{\mu}g/mL$, $110\;{\mu}g/mL$로 황련 추출물에 비하여 강한 항균활성을 나타내었다. 메탄올 추출물, berberine, palmatine을 $121^{\circ}C$, 15분간 열처리했을 때 항균효과가 전혀 감소하지 않아, 열에 매우 안정함이 확인되었다. S. mutans의 산생성에 대해서도 MIC 농도에서 메탄올 추출물, berberine, palmatine 모두 배양 24시간째에 산생성을 완전하게 억제하였다. GTase 활성 억제효과는 $300\;{\mu}g/mL$ 농도에서 메탄올 추출물, berberine, palmatine이 각각 23.2, 46.1, 17.1%의 억제율을 보였고, 물 추출물은 억제효과가 없었다. 반면에 S. mutans의 부착에 대해서는 생장 부분저해농도에서 물 추출물과 메탄올 추출물, beberine, palmatine의 경우 저해율이 각각 59.2%, 13.3%. 4.2%, 41.7%로써 물 추출물과 palmatine이 높은 저해율을 나타내었다. 이상의 결과로부터 황련 추출물의 충치억제효과는 주요 활성성분인 berberine과 palmatine의 S. mutans에 대한 항균효과, GTase 활성억제와 균체 부착 억제효과 등에 기인한 것이라 여겨지며, 황련 추출물이 충치예방을 위한 기능성 천연소재로서 매우 우수한 것으로 판단되었다.
애사과 polyphenol의 충치예방효과를 확인하고자, S. mutans 4 균주 가운데 GTase 활성이 가장 높은 S. mutans MT 8148 균주에 대하여 애사과 polyphenol의 GTase 활성억제효과, cell adherence 억제효과, 산 생성억제효과를 측정하였다. S. mutans GTase에 대한 활성 억제효과는 애사과 polyphenol 성분 중 (+)-catechin과 tannic acid가 1 mg/ml의 농도에서 60% 이상, 5mg/ml의 농도에서 90% 이상으로 높게 나타났다. S. mutans의 adherence에 대해서는 tannic acid가 약 50% 정도의 억제효과를 나타냈으며, 애사과 추출물도 약 30%정도의 억제효과를 보였다. 그러나 S. mutans의 산 생성에 대해서는 애사과 polyphenol 성분들이 억제효과를 나타내지 못하는 것으로 나타났다. 애사과 polyphenol 성분들의 S. mutans에 대한 항균활성을 확인한 결과, 이들은 항균활성은 갖지 않는 것으로 나타났다. 애사과 polyphenol의 충치억제효과는 주성분중의 하나인 catechin과 tannic acid의 S. mutans GTase 활성억제와 cell adherence 억제효과로부터 기인된 것임을 알 수 있었다. 따라서 애사과 추출물은 충치예방을 위한 기능성 식품소재로 사용 가능할 것으로 생각된다.
Yam, Prunella was stepwise extracted with hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, and water. Anti-microbial activity of each extract was investigated. Hexane extract was tested for anti-microbial effect on Streptocaccus mutans, one of causative factor of dental caries. Methanol extracts of 7 plants were investigated to anti-microbial effects on S. mutans KCTC 5316, P. gingivalis KCTC 5352, S. aureus KCTC 1927 by means of agar diffusion method. Methanol extract of Yam and Prunella revealed anti-microbial activity against S. mutans, P. gingivalis, and S. aureus. Also, hexane fraction of Yam revealed anti-microbial activity against S. mutans. In sequence of hexane, chloroform, ethylacetate, butanol fraction by Prunelia acted as potent anti-microbial agent on P. gingivalis. The measured MIC of hexane fraction of Yam and Prunella on S. mutans KCTC 5316 strain was 0.25 mg/ml and 0.5 mg/ml and the MIC of hexane fraction of Prunella on S. aureus was 0.5 mg/ml. The hexane fraction of Yam and Prunella suppressed viable ceil counts(VCC) of S. mutans, especially after 24 hrs. The Prunella hexane fraction suppressed VCC of S. aureus, after 12 and 24 hrs. Tested concentrations were 0.1, 0.25 and 0.5 mg/ml. the results were compared with control (0 mg/ml). The pH of S. mutans media and GTase activity were determined to evaluate the anticariogenic activity of Yam, Prunella hexane fraction. The pH were increased from 5.6 to 7.0-7.2 in concentration of 2.0 mg/ml. Yam hexane extraction revealed 35% inhibition to GTase activity and Punella inhibited 25% of GTase. These results suggest that the hexane extracts of Yam and prunella have Antibacterial activities against S. mutans, P. gingivalis, S. aureus and have preventive effect on dental caries.
정상법랑질과 인공우식법랑질에서 불소바니쉬 도포 후의 항우식 효과를 알아보기 위하여 건전한 소의 전치를 사용하였고, 네 군으로 분류하여 실험하였다. 법랑질 표면의 재광화 및 탈회 후 결정구조의 변화를 FE-SEM으로 관찰하였고, Ca과 P의 정량적 분석은 EDS를 사용하여 측정하였다. 그 결과 불소바니쉬 도포한 경우, 재석회화로 인하여 불규칙하고 매우 거친 표면과 다공성의 구조물이 평활하고 균일한 양상으로 나타났으며, Ca 및 P의 함량이 증가되어 정상법랑질과 인공우식법랑질의 항우식 효과를 크게 증진시키는 것으로 확인되었다.
충치원인균인 Streptococcus mutans에 대한 페놀성 화합물(14종)의 항미생물활성은 hydroxybenzoic acid group에서는 syringic acid를 제외한 모든 화합물이 5와 10 mg/disc 함유량에서 $8.5{\sim}18mm$까지의 생육저해환을 나타내었다. 기타 phenolics 화합물에서는 catechol과 L-ascorbic acid가 저해능을 나타냈는데, 특히 catechol은 10 mg/disc 함유량은 $18.5{\sim}19.5mm$로 강한 항미생물활성을 나타냈다. Phenolic compounds의 최소저해농도는 S. mutans, M1 및 M2 균 모두에서 2,000 ppm의 농도에서 MIC 값을 나타내어 큰 차이를 보이지 않았으며, catechol만 1,000 ppm의 농도에서 높은 MIC 값을 나타내었다. 충치 관련 미생물인 S. mutans에 대해 항미생물활성이 인정된 7종의 페놀성 화합물을 대상으로 S. mutans가 생산하는 glucosyltransferase(GTase)의 활성저해능은 benzoic acid와 p-hydroxybenzoic acid 처리구에서는 100과 500 ppm 농도에서 약하게나마 GTase활성을 저해하는 경향을 나타냈으며, gallic acid 처리구는 10 ppm부터 활성을 나타내기 시작해서 100 ppm과 500 ppm에서 약 50%의 저해 활성을 나타냈다. 한편 catechol 처리구에서는 10 ppm에서 58.7%의 저해활성을 나타내었고, 50 ppm에서 60.7%, 100 ppm에서 88.4%, 그리고 500 ppm에서 89.6%의 높은 활성을 나타내어 catechol의 S. mutans에 대한 생육저해능 측정에서 높은 항미생물활성을 나타낸 결과와 동일한 경향을 나타냈다.
Xylitol 껌의 mutans streptococci(MS)에 대한 항균효과를 평가하기 위하여 6세${\sim}$11세 사이의 혼합치열기 어린이 62명을 선정하였다. 4개월 동안 1개의 xylitol 껌을 하루 3회 씹는군, 2개의 xylitol 껌을 하루 3회 씹는 군과 xylitol 껌을 씹지 않는 대조군으로 나누어 하루 3번 식후 최소 5분간 껌을 씹게 한 후 1개월 간격으로 자극성타액을 채취하여 선택배지(mitis salivarius kanamicin bacitracin agar)에 배양한 후 MS 군락 수의 감소를 평가하였다. 1회 1개의 xylitol 껌을 씹는 군에서는 MS의 감소를 보이지 않았고, 1회 2개의 xylitol 껌을 씹는 군에서 4개월째 MS의 유의한 감소를 보였다(P < 0.05). 따라서 혼합치열기 어린이의 경우 하루 3회, 총 10g 정도의 xylitol을 4개월 이상 꾸준히 사용하였을 경우 치아우식증에 대한 예방효과가 있을 것으로 사료된다.
The occurrence of dental caries is mainly associated with oral pathogens, especially cariogenic Streptococcus mutans. The aim of this study was to isolate and characterize lactic acid bacterium showing inhibitory activity against cariogenic Streptococcus mutans. As results, an isolate with strong inhibitory activity was obtained from Kimchi and it was identified as Lactobacillus sakei by API and 16S rRNA gene analyses. This strain secreted an inhibitory compound in cell growth medium and the activity of the compound was completely disappeared by proteinase K revealing the fact that the compound is proteinous substance, bacteriocin. Optimal culture condition for bacteriocin production by Lb. sakei K-7 was at pH 7.5 and $37^{\circ}C$ for 18 h. Oral administration of this isolate may give anticariogenic and probiotic effects on hosts.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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