The effect of various nutrients for the production of the anti-complementary polysaccha- ride by Flammulina velutipes, was examined and the partial purification of the polysaccharide was carried out. The culture conditions and medium compositions considerably influenced the anti-complementary activity of the polysaccharides. When a culture was carried out at 23$\circ$C and pH 5.5 for 6 days in the synthetic medium supplemented with galactose and NaNO$_{3}$, the production of the anti-complementary polysaccharide was maximized. The crude polysaccharide, FV-1 was isolated from the culture broth and partially purified into two fractions, FV-1-II and FV-1-III by gel filtration using Sephadex G-100. FV-1-II was mainly consisted of xylose, mannose, galactose and glucose, and rhamnose, mannose and galactose, for FV-1-III. Also, the anti-complementary activity of FV-1-III was reduced partially in the absence of the Ca ion. When crossed immunoelect- rophoresis using anti-human C3 serum was carried out after incubation of normal human serum with the FV-1-III in the Ca ion free condition, a cleavage of C3 precipitin line was observed. These results indicate that the mode of complement activation by polysaccharide from Flammulina velutipes is via not only the classical pathway but also the alternative pathway.
Water-soluble crude polysaccharide (TM-1) prepared from the leaves of Teucrium viscidum var. miquelianum was fractionated into three polysaccharide fractions, TM-2, TM-3 and TM-4 by the addition of cetyltrimethylammonium bromide. The major polysaccharide fraction, TM-2, consisted of glucose, galactose, rhamnose, mannose, glucuronic acid and galacturonic acid, and all fractions contained galactose and glutose as the major neutral sugars. TM-4 showed the highest anti-complementary activity. When TM-4 was futher fractionated by anion exchange chromatography, TM4- II a and TM4-II b showed the most Potent anti-complementary activity. TM4- II a was composed mainly of galactose, arabinose and glucose in the molar ratios of 2.13 : 0.94 : 1.00 respectively, and contained a small amount of galacturonic acid and glucuronic acid.
식용버섯으로부터 항보체 활성물질을 탐색하여 새로운 소재화 연구의 일환으로 상황버섯(Phellinus linteus) 균사체로부터 항보체 활성 물질을 분리, 정제를 하였으며 화학적 특성을 검토하였다. 정제는 상황버섯의 열수추출한 후, 열수추출물(PL-0)를 한외여과하여 분자량별로 5개의 획분을 얻었다. 이 중, 300kDa 이상의 획분(PL-5)을 DEAE-Sepharose FF 이온교환 크로마토그래피, Sepharose CL-4B 겔여과 크로마토그래피를 실시하여 PL-5-IIIa 획분을 얻었다. PL-5-IIIa 획분을 HPLC를 행한 결과 단일 피크로 나타났으며 정제다당 PL-5-IIIa의 분자량은 800,000Da으로 측정되었다. 정제다당 PL-5IIIa는 64.2%의 당과 29.6%의 단백질로 구성되었으며 구성당은 galactose가 43.1%, mannose가 40.6%, fucose가 15.8%로 나타났다.
An acidic polysaccharide fraction that had high anti-complementary activity was isolated from the stems of Grey Mangrove in 0.15% yield. The final fractions was designated HAM-3-IIb-II. The polysaccharide fraction appeared to be homogenous by high performance size exclusion chromatography with an estimated molecular weight of 105 kDa. The isolated polysaccharide is more effective than polysaccharide K (PSK) in its anti-complementary activity at 58 ${\mu}g/ml$ of PSK and 23 ${\mu}g/ml$ of HAM-3-IIb-II that inhibit 50% of complement activity in the complement fixation assay. Structural studies indicated that HAM-3-IIb-II was rich in galacturonic acid along with arabinose, galactose and rhamnose, characterizing a pectin-type polysaccharide, which was also confirmed by FT-IR spectrum. The presence of rich neutral sugar side chains of arabinogalactans may have contributed to the expression of high activity. Traditionally, this mangrove plant is used for medicinal purposes and it appears to have some scientific applications.
Pleurotus sajor-caju를 각각 다른 영양원과 배양조건에 따라 배양했을 때 항보체 활성 다당 생산에 미치는 영향을 검토하였다. 그 결과 탄소원으로는 배양액에서는 lactose를 탄소원으로, 균사체로 부터의 열수 추출시에는 탄소원을 maltose로 사용했을 때 가장 높은 항보체 활성 다당을 얻을 수 있었다. 질소원으로는 ammonium phosphate(monobasic), amino acid로는 serine을 배양원으로 하였을 때 활성이 최대치를 나타내었다. 온도조건에서는 $25^{\circ}C$에서 최대활성을 나타내었으며 생산된 다당의 조성을 분석한 결과 Pleurotus sajor-caju의 배양액에서 분리한 다당은 peptidoglycan으로 나타났다.
It was observed that the hot-water extract of the bark of Kalopanax pictus N. had the highest anti-complementary activity among the 11 kinds of forest materials. Methanol-and ethanol-soluble portions had low anti-complementary activities, but crude polysaccharide. HKP-0 had a high activity of 80%. HKP-0 contained 54.8% of total sugar and 27.9% of protein. The neutral sugars of HKP-0 consisted of mainly arabinose, galactose and glucose. HKP-4 fraction obtained by cetavlon treatment of HKP-0 showed the highest anti-complementary activity of 90%. The activity was not changed by pronase digestion bu decreased greatly by periodate oxidation. HKP-4 consisted of mainly arabinose and glucose with molar ratio of 1.0 : 22.4, HKP-4-I, an unabsorbed fraction from HKP-4 on DEAE Sepharose CL-6B column showed higher yield and activity than those of absorbed fractions. HKP-4-I was homogeneous, and its molecular weight was about 25,000. HKP-4-I contained 84.0% of neutral sugar and consisted of arabinose and glucose with molar ratio of 1.0 : 11.2. The anti-complementary activity of HKP-4-I was not decreased by the treatment of polymyxin B, and the polysaccharide activated both classical and alternative pathway in complement system. Void volume fraction obtained from HKP-4-I hydrolyzed with ${\alpha}$-amylase on Sephadex G-25 column only had a high anti-complementary activity.
고추에서 추출한 수용성 조다당(CAP-0)에 높은 항보체 활성이 존재함을 발견하였으며, 활성은 pronase 처리에 의해 변하지 않았으나 periodate 산화에 의해 활성이 현저히 감소하였다. CAP-0는 cetyltrimethylammonium bromide 처리에 의해 4획분(CAP-1,2,3,4)으로 분리되었으며, CAP-1에서 가장 높은 황보체 활성이 나타났다. CAP-1은 음이온 교환 chromatography에 의해 활성과 수율이 높은 CAP-1-IV와 V로 분리되었으며, III은 수율은 높았으나 활성이 매우 낮았다. CAP-1-III와 IV는 gel 여과에 의해 고분자량 획분$(M.W.\;III_a\;70,000,\;IV_a\;195,000,\;V\;140,000)$과 저분자량 획분 $III_a,\;IV_b$으로 나뉘어졌다. 이 4획분과 V는 gel 여과와 전기영동상에서 순수하였으며 고분자량 획분에서 항보체 활성이 높았다.
10종의 식용 버섯 자실체에 대한 항보체 활성 검색에서 가장 높은 활성을 나타낸 양송이버섯 자실체를 대상으로 항보체 활성물질의 추출조건을 조사하였다. 최적조건으로서 5% urea가 함유된 0.1 N NaOH 용액으로 $65^{\circ}C$에서 2시간동안 양송이버섯 자실체를 추출한 후 methanol 가용획분이 제거된 조다당 획분 AB-0를 얻었다. AB-0는 1 mg/ml에서 90% 이상의 높은 항보체활성을 나타내었으며 마우스에 이식된 sarcoma-180에 대하여 74%의 저지효과를 보였다. AB-0를 acetone 농도에 따른 침전 분획을 실시하여 AB-20, AB-40, AB-60, AB-80, AB-A의 5개의 획분을 얻었다. 이중 가장 높은 항보체활성과 수율을 나타낸 AB-20 획분은 탄수화물 39%, 단백질 46%를 함유하였으며, 구성당은 glucose, arabinose, xylose, galactose, mannose가 6.49 : 1.98 : 1.24 : 1.00 : 0.71의 비율로 존재하였고 구성아미노산은 isoleucine(12.60%), glutamic acid+glutamine(12.45%), valine(11.79%), alanine(11.46%), leucine(10.19%)와 aspartic acid, asparagine(10.56%) 등 이었다. Pronase 처리한 AB-20에서는 78.5%의 항보체활성을 나타내고 대조군에 비해 14.5% 감소하였으나, AB-20의 periodate 산화물에서는 활성이 42.6%로 50% 이상 크게 감소하였다. 따라서 양송이 버섯의 알칼리 추출물중 가장 강한 활성을 보인 AB-20의 주요 활성부위는 다당류이며 단백질도 일부 관여하는 것으로 생각되었다.
한약재를 대상으로 용철 보체 분석법$(TCH_{50})$을 이용, 항보체 활성물질에 대한 전반적인 검색을 실시하였다. 총 55종의 시료의 열수 추출물을 대상으로 동 활성을 측정한 결과, 대조구에 비해 70%이상의 $TCH_{50}(total\;complement\;hemolysis\;of\;50%)$의 감소를 일으키는 비교적 강력한 항보체 활성을 소유한 울금, 대복피, 조각자, 화살나무, 가시오갈피, 인동, 부자, 계피 등 9종의 시료를 선택할 수 있었다. 이들은 pronase 소화 후 활성을 유지한 반면, $NaIO_4$ 산화에 의해 급격한 활성의 감소를 나타냄으로써, 그 활성의 본체가 다당에 기인함을 알 수 있었다. 또한 가장 높은 활성을 보였던 대복피(Areca catchu) 다당의 경우 $Ca^{++}$ 이온 부재시 부분적으로 활성의 감소를 보였으며, 정상인의 혈청과 반응시 C3의 분해산물을 면역 전기 영동법에 의해 확인할 수 있었는 바, 동 사실로부터 대복피의 보체 활성화 기구는 classical pathway뿐만 아니라 alternative pathway도 경유함을 알 수 있었다.
식물성 식품재료를 대상으로 보체 용혈분석법$(TCH_{50})$ 을 이용하여 보체 활성화능(항보체 활성)에 대한 검색을 실시하였다. 총 38종의 식용 식물추출물 중 5종의 시료에서 대조구에 비해 60% 이상의 $TCH_{50}$ 감소를 일으키는 비교적 높은 활성을 나타냈으며 그 활성의 순서는 $1000{\mu}g/ml$ 시료 농도에서 생강>토란대>냉이>은행잎>달래이었다. 한편 가장 높은 활성을 보였던 생강에서 조제된 ZR-1의 경우 pronase 소화 후에는 활성의 변화가 없는 반면에 과요오드산 산화에 의해서는 급격한 활성의 감소를 나타냄으로써 ZR-1의 단백질 부위가 아닌 다당 부위가 활성에 기여함을 알 수 있었다. 또한 ZR-1의 항보체 활성은 $Ca^{2+}$ 이온 부재시 부분적인 감소현상을 보였으며, ZR-1을 정상인의 혈청과 반응 후 anti-humanC3를 이용하여 2차원 면역 전기영동을 행한 결과 C3의 분해산물을 관찰할 수 있었다. 또한 이들 획분은 $ACH_{50}$의 저해를 일으켰다. 동 결과로부터 ZR-1의 보체 활성화 양식은 classical pathway 뿐만 아니라 alternative pathway도 경유함을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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