The effect of various nutrients for the production of the anti-complementary polysaccha- ride by Flammulina velutipes, was examined and the partial purification of the polysaccharide was carried out. The culture conditions and medium compositions considerably influenced the anti-complementary activity of the polysaccharides. When a culture was carried out at 23$\circ$C and pH 5.5 for 6 days in the synthetic medium supplemented with galactose and NaNO$_{3}$, the production of the anti-complementary polysaccharide was maximized. The crude polysaccharide, FV-1 was isolated from the culture broth and partially purified into two fractions, FV-1-II and FV-1-III by gel filtration using Sephadex G-100. FV-1-II was mainly consisted of xylose, mannose, galactose and glucose, and rhamnose, mannose and galactose, for FV-1-III. Also, the anti-complementary activity of FV-1-III was reduced partially in the absence of the Ca ion. When crossed immunoelect- rophoresis using anti-human C3 serum was carried out after incubation of normal human serum with the FV-1-III in the Ca ion free condition, a cleavage of C3 precipitin line was observed. These results indicate that the mode of complement activation by polysaccharide from Flammulina velutipes is via not only the classical pathway but also the alternative pathway.
Water-soluble crude polysaccharide (TM-1) prepared from the leaves of Teucrium viscidum var. miquelianum was fractionated into three polysaccharide fractions, TM-2, TM-3 and TM-4 by the addition of cetyltrimethylammonium bromide. The major polysaccharide fraction, TM-2, consisted of glucose, galactose, rhamnose, mannose, glucuronic acid and galacturonic acid, and all fractions contained galactose and glutose as the major neutral sugars. TM-4 showed the highest anti-complementary activity. When TM-4 was futher fractionated by anion exchange chromatography, TM4- II a and TM4-II b showed the most Potent anti-complementary activity. TM4- II a was composed mainly of galactose, arabinose and glucose in the molar ratios of 2.13 : 0.94 : 1.00 respectively, and contained a small amount of galacturonic acid and glucuronic acid.
We have isolated an anti-complementary polysaccharide from the hot water extracts of Phellinus linteus mycelia. Anti-complementary polysaccharide, PL-5-IIIa, was purified by ultrafiltration, gel permeation chromatography using Sepharose CL-4B. GPC (Sepharose CL-4B) and its homogenicity was demonstrated by HPLC. Using gel permeation chromatography with standard dextrans, its molecular weight was determined as about 800,000 dalton. The purified PL-5-IIIa was identified as a protein bound polysaccharide comprising of 29.6% protein and 64.2% carbohydrate which was composed of fucose(15.8%), galactose(43.1%) and mannose(40.6%).
An acidic polysaccharide fraction that had high anti-complementary activity was isolated from the stems of Grey Mangrove in 0.15% yield. The final fractions was designated HAM-3-IIb-II. The polysaccharide fraction appeared to be homogenous by high performance size exclusion chromatography with an estimated molecular weight of 105 kDa. The isolated polysaccharide is more effective than polysaccharide K (PSK) in its anti-complementary activity at 58 ${\mu}g/ml$ of PSK and 23 ${\mu}g/ml$ of HAM-3-IIb-II that inhibit 50% of complement activity in the complement fixation assay. Structural studies indicated that HAM-3-IIb-II was rich in galacturonic acid along with arabinose, galactose and rhamnose, characterizing a pectin-type polysaccharide, which was also confirmed by FT-IR spectrum. The presence of rich neutral sugar side chains of arabinogalactans may have contributed to the expression of high activity. Traditionally, this mangrove plant is used for medicinal purposes and it appears to have some scientific applications.
The effect of nutritional and cultural conditions for the production of anti-complementary polysaccharide from Pleurotus sajor-caju was studied. Maximum anti-complementary activity from its culture broth and mycelium was obtained by using lactose and maltose as a carbon source, respectively. Ammonium phosphate (monobasic) and serine were chosen for the highest activity among the inorganic nitrogen compounds and amino acids tested. Optimum temperature for the production of the anti-complementary polysaccharide was $25^{\circ}C$.
It was observed that the hot-water extract of the bark of Kalopanax pictus N. had the highest anti-complementary activity among the 11 kinds of forest materials. Methanol-and ethanol-soluble portions had low anti-complementary activities, but crude polysaccharide. HKP-0 had a high activity of 80%. HKP-0 contained 54.8% of total sugar and 27.9% of protein. The neutral sugars of HKP-0 consisted of mainly arabinose, galactose and glucose. HKP-4 fraction obtained by cetavlon treatment of HKP-0 showed the highest anti-complementary activity of 90%. The activity was not changed by pronase digestion bu decreased greatly by periodate oxidation. HKP-4 consisted of mainly arabinose and glucose with molar ratio of 1.0 : 22.4, HKP-4-I, an unabsorbed fraction from HKP-4 on DEAE Sepharose CL-6B column showed higher yield and activity than those of absorbed fractions. HKP-4-I was homogeneous, and its molecular weight was about 25,000. HKP-4-I contained 84.0% of neutral sugar and consisted of arabinose and glucose with molar ratio of 1.0 : 11.2. The anti-complementary activity of HKP-4-I was not decreased by the treatment of polymyxin B, and the polysaccharide activated both classical and alternative pathway in complement system. Void volume fraction obtained from HKP-4-I hydrolyzed with ${\alpha}$-amylase on Sephadex G-25 column only had a high anti-complementary activity.
Water-soluble crude polysaccharide (CAP-0) obtained from the Capsici Fructus(the fruits of Capsium annuum L.) showed a potent anti-complementary activity. The anti-complementary activity did not change by pronase digestion of CAP-0, but decreased by the periodate oxidation. CAP-0 was fractionated into four polysaccharide fractions, CAP-1,2,3 and 4, by the addition of cetyltrimethylammonium bromide. CAP-1, showing the highest anti-complementary activity, was refractioned by anion-exchange chromatography to give three major fractions(CAP-1-III, IV and V). CAP-1-III was shown to have low anti-complementary activity, but CAP-1-IV and V had high activity. CAP-1-III and IV were purified on Sephadex G-100 to give each two fractions(CAP-1-IIIa and IIIb, CAP-1-IVa and IVb), respectively. From the results of gel filtration and electrophoresis, these four fractions and CAP-1-V were found to be homogeneous polysaccharides. High molecular polysaccharies(M.W. CAP-1-IIIa 70,000, IVa 195,000, V 140,000) showed relatively higher anti-complementary activity than low molecular polysaccharides(CAP-1-IIIb and IVb).
During the screening for anti-complementary activity from 10 kinds of edible mushrooms, an alkali extract of Agaricus bisporus showed the highest activity through the complement fixation test. The crude anti-complementary material(AB-0) from Agaricus bisporus was obtained by the alkali extraction using 1 N NaOH containing 5% urea$(65^{\circ}C)$, followed by methanol reflux, dialysis and lyophilization. The fraction AB-O showed potent anit-complementary and anti-tumor activity against sarcoma-180 injected mice. The fraction AB-0 was divided into 5 fractions(AB-20, AB-40, AB-60, AB-80, AB-A) by gradual acetone precipitation. Among them fraction AB-20 having the highest activity and yield was found to contain 39% carbohydrate and 46% protein. The anti-complementary protein-bound polysaccharide AB-20 consisted of glucose, arabinose, xylose, galactose and mannose in a molar ratio of 6.49 : 1.98 : 1.24 : 1.00 : 0.71, respectively and its main component amino acids were alanine(20.59%), isoleucine(16.85%), glutamine+glutamic acid(14.12%) and leucine (13.83%). The anti-complementary activity of AB-20 was decreased greatly by periodate oxidation, but decreased slightly by pronase digestion. This indicates that polysaccharide moiety is corelated with the anti-complementary activity and that protein is also involved in the activity.
We conducted screening on Chinese medicinal herbs to examine their anti-complementary activity by hemolytic complementary assay $(TCH_{50})$. Among 55 kinds of herbs, several herbs showed relatively potent anti-complementary activity which decreased $TCH_{50}$, more than 70% in comparison with control. Then, hot water extracts of the following herbs, Curcuma aromatica, Areca catechu, Gleditsiae spina, Euonymus alata, Acanthopanax senticous. Lonicera japonica, Aconitum carmichaeli, Curcuma zedoaria and Cinnamoum cassia, which were shown relatively potent anti-complementary activity were partially purified and analyzed their chemical properties. These activities were resistant to digestion with pronase but decreased by treatment with $NaIO_4$. These results may indicate that the complement activating ability in their herbs is due to polysaccharide. Furthermore, the anti-complementary activity of Areca catechu which was showed the most potent activity, was reduced partially in the absence of the $Ca^{++}\;ion$. After incubation of the normal human serum with partially purified polysaccharide of A. catechu in the absence of $Ca^{++}\;ion$, a cleavage of C3 in the serum was found to have occurred through immunoelectrophoresis using rabbit anti-human C3 serum. These results indicate that the mode of complement activation by polysaccharide of A. catechu is via both the alternative and classical pathway.
Screenings were performed on edible plants to examine their complement-system activating ability (anti-complementary activity) by hemolytic complement assay $(TCH_{50})$. Among 38 kinds of plant extracts, 5 kinds showed relatively strong anti-complementary activity which decreased $TCH_{50}$ more than 60% comparison with control and the order of activity was Zingiber officinale>Colocasia antiquorum>Capsella bursapastoris>Ginkgo biloba>Alium monanthum in $1000{\mu}g/ml$. The anti-complementary activity of ZR-1 prepared from the root of Zingiber officinale which was showed the most potent activity, did not change by pronase treatment, but decreased greatly by periodate oxidation. These results indicate that not protein moiety but carbohydrate moiety in ZR-1 fraction may also contribute to the anti-complementary activity. Also, the anti-complementary activity of ZR-1 was reduced partially in the absence of the $Ca^{2+}$ ion. When crossed immunoelectrophoresis using anti-human C3 serum was carried out after incubation of normal human serum with the ZR-1 in $Ca^{2+}$ free condition, a cleavage of C3 precipitin line was observed. Furthermore this polysaccharide fraction considerably inhibited $ACH_{50}$. These results also indicate that the mode of complement activation by polysaccharide from Zingiber officinale is via not only the classical pathway but also the alternative pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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