Penicillium sp. CB-20의 polygalacturonase 생성을 위한 최적조건은 탄소원으로 펙틴을 사용하여 16 시간 배양시 최대 활성을 나타내었으며, Sephadex G-25, G-75 및 G-150을 사용한 gel filtration과 DEAE-cellulose, DEAE-Sephadex A-50에 의 한 ion exchange chromatography를 통하여 이 효소를 약 30배 가량 정제할 수 있었고, 수율은 2.31%였다. 정제효소는 polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 단일 밴드로 확인 되었으며, 분자량은 SDS PAGE에 의하여 21,000 정도로 측정되었다. 효소의 결정구조는 마름모꼴을 형성하고 있었으며 아미노산 조성은 17종류로써 glutamic acid, glycine, hlstidine의 함량이 비교적 많았다.
$N_3O_3$가 앵커 그룹으로 포함된 이온교환체를 사용하여 $^6Li$와 $^7Li$의 분리인자를 측정하였다. 이온교환체의 이온교환 용량은 2.0 meq/g 이었다. 3M 염화암모늄 수용액을 용리액으로 하였으며, 내경 0.3 cm, 높이 30 cm의 칼럼을 이온교환크로마토그래피에 사용하였다. 가벼운 동위원소 $^6Li$는 유체상에, 무거운 동위원소 $^7Li$는 수지상에 농축되었다. 용리곡선과 동위원소 비를 가지고 Glueckauf의 이론에 따라 분리인자를 구하였으며, 그 값은 1.018이었다.
Chitinase was purified from an antagonistic bacterium Bacillus sp. 7079 by ammonium sulfate precipitation, QAE-Sephadex anion exchange chromatography, Sephadex G-100 gel filtration, and SP-Sephadex cation exchange chromatography. The molecula. weight of purified chitinase (PC-1) was approximately 66.5 kDa on SDS-PACE. PC-1 exhibited optimum pH and temperature of pH 7.5 and $45^{\circ}C$, respectively. More than $80\%$ of PC-1 was stable at pH 5.0 to 9.0, and more than $90\%$ at $40^{\circ}C$. $Fe^2+\;and\;Ca^2+$ inhibited the chitinase activity about $20\%$, and EDTA and p-CMB by about $30\%$, whereas $Ag^+$ inhibited the activity up to $65\%$. The $K_m$ value of PC-1 was 1.215 mg/ml with colloidal chitin as a substrate. We also investigated the effect of PC-1 treated chitin (PCTC) on the pro-inflammatory cytokine gene expression in macrophage RAW 264.7 cells. The expression of IL-$1{\alpha}$ and IL-$1{\beta}$ mRNA gene was investigated using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). IL-$1{\alpha}$ and IL-$1{\beta}$ mRNA were induced by the treatment of PCTC and chitin only in RAW 264.7 cells. These expressions were induced as early as 2 h and sustained up to 24 h in RAW 264.7 cells. IL-$1{\alpha}$ and IL-$1{\beta}$ mRNA were more strongly expressed by the treatment of PCTC than chitin treatment alone in RAW 264.7 cells.
본 연구에서는 반응성이 큰 친수성 단량체인 glycidylmethacrylate (GMA)를 이용하여 현탁중합법으로 bead type의 GMA-DVB 공중합체를 제조하고, 이들 공중합체를 trimethyl-ammonium chloride로 아민화하여 trimethylammonium기를 갖는 거대망상형 음이온 교환수지를 합성하였다. 여기서 지하수에 공존하는 음이온 중 $NO_3^-$ 제거에 가장 방해가 되는 $SO_4^{2-}$ 이 입체적으로 크다는 것에 착안하여 가교제인 divinylbenzene (DVB)의 양을 변화시켜 가교도에 따른 음이온에 대한 선택능을 확인하였고, 각각의 수지에 대한 물성과 $NO_3^-$ 에 대한 흡착능을 고찰하였다. 또한 FT-IR을 통하여 공중합체의 합성여부를 확인하였고, 또한 아민화 수율, 이온교환 용량 및 팽윤율을 평가하여 가교도에 따른 영향을 조사하였다. 여기서 DVB의 함량이 4wt%일 때 아민화 수율은 384.3%, 이온교환용량은 3.25 meq/g, 팽윤율은 77.1%로 가장 최적으로 나타났다.
Sorption of chlorinated pesticides such as 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and atrazine onto natural clays (montmorillonite and zeolite) modified with cationic surfactant, hexadecyltrimethyl-ammonium (HDTMA) and a natural soil was investigated using batch adsorbers. The clays were transformed from hydrophilic to hydrophobic by the cation exchange between clay surface and HDTMA up to 100% of the cation exchange capacity (CEC). Physicochemical characteristics of the sorbents such as pH, PZC (point of zero charge), organic carbon content ($f_{oc}$), fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), differential thermogravimetric analysis (DTGA) and X-ray diffraction (XRD) were analyzed. Sorption isotherm models such as Freundlich and Langmuir were fitted to the experimental data, resulting Langmuir model ($R^2$ > 0.986) was fitted better than Freundlich model ($R^2$ > 0.973). Sorption capacity ($Q^0$) for 2,4-D and atrazine was in the order of HDTMA-montmorillonite > HDTMA-zeolite > natural soil corresponding to the increase in organic carbon content ($f_{oc}$). The sorption of the pesticides was also affected by pH. The sorption of 2,4-D decreased with the increase in pH, whereas that of atrazine was not changed. This indicated that the sorption capacity ($Q^0$) of 2,4-D and atrazine was not affected by the solution pH because they exist as anionic (deprotonated) forms at pH above pKa. The results indicate that organoclay has a promising potential to reduce chlorinated pesticides in the effluent from golf courses.
계면동전위라 불리는 제타전위(zeta potential)란 표면 전하적 특성을 정량화 한 값으로 전기동역학적 현상으로 발생하는 전위차를 말한다. 제타전위는 막오염(fouling)과 표면전하 분석을 통한 개질 확인 및 치환기 확인에 대한 연구가 활발히 진행되어 왔다. 그리고 제타전위를 측정하는 방법으로는 전기영동(electrophoresis), 전기삼투(eletrosmosis), 유동전위(streaming potential)를 기초로 개발되었고, 그중에서도 평막은 유동전위 측정이 적합하다고 알려졌다. 따라서, 본 연구에서는 poly(styrene-ethylene-butylene-styrene) 고분자에 암모늄을 도입하여 아민화된 SEBS 평막 형택의 분리막을 제조하고, 계면동전위 측정기를 이용하여 제조된 분리막들의 유동전위를 측정하여 결과를 분석하였다.
한국미생물생명공학회 2005년도 2005 Annual Meeting & International Symposium
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pp.245-247
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2005
A cellulolytic fungus isolated from Agave plantation in northeastern Thailand was identified as Acrophialophora nainiana. The fungus was capable of growing at pH between 3 - 7 and 25 - 45 $^{\circ}C$, with the optimum conditions at pH 5.0 and 40 $^{\circ}C$. The wild isolate produced cellulases, comprising of exoglucanase (0.019 U/mg protein), endoglucanase (0.366 U/mg protein), and ${\beta}$-glucosidase (0.001 U/mg protein). Mutations with UV and NTG produced the UV 10-2 mutant with cellulases activities including exoglucanase (0.093 U/mg protein), endoglucanase (0.585 U/mg protein), and ${\beta}$-glucosidase (0.013 U/mg protein). Purification of the enzymes with ultrafiltration, ammonium sulfate precipitation, and ion-exchange chromatography yielded the maximal cellulase specific activities of 2.736 U/mg protein (exoglucanase), 0.235 U/mg protein (endoglucanase), and 0.008 U/mg protein (${\beta}$-glucosidase). The mutant's cellulases were the most active at pH 5.0 and 60 $^{\circ}C$. Ion-exchange chromatography revealed that A. nainiana UV 10-2 cellulases were comprised of two peaks with one peak showing the single endoglucanase activity while the other peak showed a mixture of the three enzyme activities. Production of A. nainiana UV 10-2 cellulases using banana leaf stalk as the sole carbon source gave comparable yields to that of the pure ${\alpha}$-cellulose. The enzymes were used in the simultaneous saccharification and fermentation (SSF) of plant residue (Coix aquatica) along with Kluveromyces marxianus to produce ethanol. Moreover, when the enzymes were used in the bioscouring process of fabric, the desiravle traits of textile processing including immediate water absorbency, increased in whiteness and reduction of yellowness of the treated fabric were observed.
한방재료의 하나인 택사(Alismatis Rhizoma, AR)로부터 단백성 trypsin inhibitor(TI)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 정제과정은 0-80.% 포화 황산암모늄을 이용한 염석법, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sep-hadex G-150 chromatography 등을 이용하였다. 정제된 ARTI의 분자량을 gel filtration과 SDS-PAGE 한 결과 모두 약 23,000 Da으로 나타나 monomer로 되어 있는 것으로 나타났다. 온도안정성에 있어 0-6$0^{\circ}C$에서는 안정하였으나 그 이상의 온도에서는 약 35%가지 안정성이 떨어졌다. ARTI와 상품화된 soybean kunitz inhibitor의 저해능을 비교해 본 결과 ARTI 및 soybean inhibitor 각각의 농도가 0.071 $\mu$M, 1.7 $\mu$M일 때 0.025 g/$m\ell$ trypsin활성을 50% 정도 저해하는 것으로 나타났다. ARTI의 trypsin의 가수분해반응에 대한 저해형태는 비경쟁적 저해형인 것으로 나타났으며 km값은 0.81 $\mu$M이었다.
Cydzik-Kwiatkowska, Agnieszka;Zielinska, Magdalena;Bernat, Katarzyna;Kulikowska, Dorota;Wojnowska-Baryla, Irena
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제22권7호
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pp.1005-1014
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2012
The understanding of the relationship between ammonia-oxidizing bacteria (AOB) communities in activated sludge and the operational treatment parameters supports the control of the treatment of ammonia-rich wastewater. The modifications of treatment parameters by alteration of the number and length of aerobic and anaerobic stages in the sequencing batch reactor (SBR) working cycle may influence the efficiency of ammonium oxidation and induce changes in the AOB community. Therefore, in the research, the impact of an SBR cycle mode with alternating aeration/mixing conditions (7 h/1 h vs. 4 h/5.5 h) and volumetric exchange rate (n) on AOB abundance and diversity in activated sludge during the treatment of anaerobic sludge digester supernatant at limited oxygen concentration in the aeration stage (0.7 mg $O_2/l$) was assessed. AOB diversity expressed by the Shannon-Wiener index (H') was determined by the cycle mode. At aeration/mixing stage lengths of 7 h/1 h, H' averaged $2.48{\pm}0.17$, while at 4 h/5.5 h it was $2.35{\pm}0.16$. At the given mode, AOB diversity decreased with increasing n. The cycle mode did not affect AOB abundance; however, a higher AOB abundance in activated sludge was promoted by decreasing the volumetric exchange rate. The sequences clustering with Nitrosospira sp. NpAV revealed the uniqueness of the AOB community and the simultaneously lower ability of adaptation of Nitrosospira sp. to the operational parameters applied in comparison with Nitrosomonas sp.
Amyloid plaque is a product of aggregation of ${\beta}$-amyloid peptide ($A{\beta}$) and is an important factor in the pathogenesis of Alzheimer's Disease (AD). $A{\beta}$ is a major component of amyloid plaque and vascular deposits in the AD brain. The enzyme ${\beta}$-secretase is required for the production of $A{\beta}$; thus, prevention of the formation of $A{\beta}$ through the inhibition of ${\beta}$-secretase is a major focus in the study of the treatment of AD. In this study, we investigated ${\beta}$-secretase inhibitory activity of an Arctoscopus japonicus peptide. An Alcalase hydrolysate had the highest ${\beta}$-secretase inhibitory activity. A ${\beta}$-secretase inhibitory activity peptide was separated using ion exchange column chromatography (carboxy-methyl: CM, quaternary methyl ammonium: QMA) and reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) on a C18 column. The $IC_{50}$ value of the purified peptide was $248.2{\pm}1.73{\mu}g/mL$. The ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was identified as a six amino acid residue of Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Pro (MW: 497.27 Da). In cell viability experiments, the final purified fraction, the carboxy-methyl ion exchange column fraction (CM-F1) showed no significant cytotoxic effect in SH-SY5Y cells at concentrations below $100{\mu}g/mL$ in 24 h. The results of this study suggest that peptides separated from Arctoscopus japonicus may be beneficial as ${\beta}$-secretase inhibitor compounds in functional foods.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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