본 연구에서는 고로슬래그의 수화반응을 일으키는 극한미생물(Bacillus halodurans) 알칼리 활성화제를 사용하여 현장 지반을 고결시키는 연구를 수행하였다. 현장 토사를 고결시키기 위해 저가의 미생물 배양액을 대량으로 제조하였으며, 제조된 미생물 배양액에 대한 생장실험을 실시하여 기존 미생물 배양액과의 효율성을 비교하였다. 현장 적용은 고로슬래그와 미생물 배양액을 혼합한 알칼리 활성화제로 고결된 지반(미생물 고결토), 보통 포틀랜드 시멘트로 고결된 지반(시멘트 고결토), 그리고 무처리된 지반(무처리토)으로 나누어 시험 시공하였다. 현장 지반 3곳 모두 동일한 크기인 가로 2.6m, 세로 4m, 깊이 0.2m로 시공하였다. 현장 시공 후 28일에 코어를 채취하여 일축압축시험을 실시하였으며, 무처리토 지반은 토베인시험으로 지반의 강도를 평가하였다. 본 연구에서 개발한 미생물 고결토는 시멘트 고결토에 비해 약 1/5 정도 낮은 강도를 보였으나, 무처리토에 비해서는 약 6배 정도 높은 강도를 발휘하였다. 또한, 미생물 고결토의 pH는 10으로 11 이상인 시멘트 고결토보다 낮아 상대적으로 친환경적인 것으로 판단되었으며, SEM-EDS 분석을 통하여 고결도와 고결 물질인 C-S-H 수화물이 생성됨을 확인할 수 있었다.
본 연구는 황 원소를 이용하여 시설재배지의 일부 토양에서 나타나는 알칼리 반응을 교정하고자 실시하였다. 황 원소의 산화와 토양 pH에 미치는 효과를 살펴보기 위하여 토양 pH 8.3을 6.3으로 낮추는데 소요되는 황 시용량을 완충곡선으로부터 계산하여 황 소요량의 1~10배 수준까지 첨가하고 50% water holding capacity에 해당하는 수분을 가한 다음, $30^{\circ}C$로 유지되는 항온실에서 정치하였다. Incubation 동안 1주 간격으로 토양 pH 및 sulfate-S의 생성량을 조사한 결과, 토양 pH는 최초의 8.3에서 4~6주 사이에는 목표 pH인 6.3 부근으로 감소하였고, 이 때의 sulfat-S의 생성율은 100%를 상회하여 완충곡선법을 이용한 황 시용량 결정법이 적절함을 확인하였다. Pot 재배시험 결과, 중화량에 해당하는 황시용구의 토양 pH는 중성부근에 이르렀으나 상추수량은 무처리구와 차이가 없었으며, 목표 pH로 낮추기 위한 황 소요량의 약 3배 이상 과량 첨가한 처리구의 토양 pH는 4.8 수준으로 급격히 감소하고 토양중 추출성 미량원소의 농도가 증가하여 상추 수량은 현저히 감소하는 한편, 식물체중 N/S비율의 감소가 나타나 과다한 황 시용으로 토양 양분의 불균형화 및 작물의 수량감소를 초래하였다. 따라서 토양 pH 조정을 목적으로 황 원소를 시용할 경우 정확한 시용량을 준수하고, 토양에 존재하는 기존의 sulfate-S 농도가 높을 경우에는 분시를 통하여 토양내 sulfate-S 농도가 일시적으로 크게 증가하지 않도록 관리해야 할 것으로 판단되었다. 또한 liming의 경우 포장에서는 실내나 pot 조건과 다르게 포장의 석회인자(Liming factor)를 구하여 석회시용량을 조절하는 것과 같이 토양의 pH를 낮추는 경우도 포장의 acidifying factor에 관한 별도의 연구가 필요할 것으로 생각된다. 한편 완충곡선법을 이용한 황 시용량 결정법을 보다 단순화하기 위하여 0.1N-HCl을 이용한 완충곡선법을 고안하였으며, 이 방법은 토양산도를 목표 pH까지 저감시키는데 소요되는 0.1N-HCl의 량을 구하여 제안된 계산식에 적용하면 쉽게 황 소요량을 구할 수 있으므로 알칼리성 토양 상토 및 호산성 작물재배토양의 pH조정에 이용 가능할 것이다.
저온에서 높은 세척력을 갖는 호소세제의 개발을 위하여 토양으로부터 alkaline protease의 활성이 높은 균주를 분리, 동정하였으며, 호소의 성질을 조사하였다. 분리균주의 형태적 특징은 Gram 음성균 이고, 간균$(0.6{\sim}0.7{\times}1.3{\sim}2.6\;{\mu}m\;in\;size)$ 형태를 하고 있으며, 운동성을 보였다. 또한 catalase 양성, aesculin, gelatin 및 casein 분해능이 있었다. 분리균주의 세포벽 구성 성분은 meso-DAP를 함유하였으며, G+C mol 함량은 43.3%를 나타내었다. 이러한 형태적, 생리 생화학적 특성의 결과로부터 분리 균주는 Acinetobacter 속으로 동정되었다. 분리 균주를 이용한 alkaline protease의 생산은 초기 pH 10과 $40^{\circ}C$에서 36시간 배양하였을 때 3,300 D.U/mL로 최대 효소 활성을 보였으며, 최적 pH와 온도는 9와 $60^{\circ}C$이었다. 또한 본 균주에 의해 생산된 alkaline protease는 두개의 활성 band를 나타내었다.
An alkalophilic bacterium producing alkaline protease(s) was isolated from soil. It was a Gram-positive, non-sporulating, immotile, irregular rod, strictly aerobic, and weak acid-forming bacterium. The morphological, physiological, and biochemical characteristics of the isolate resembled those of the Coryneform bacteria. However, there was not any species within this genera to which this microorganism can be closely matched. Therefore, it is provisionally identified as a Coryneform bacterium TU-19.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.331.1-331.1
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2002
Actinomycetes CS0703 has been isolated in soil sample from location in the Jeju province. Korea. and produces alkaline extracellular proteases. To maximize protease production, initial pH of the culture medium was adjusted to 12.0 with NaOH and incubated at $48^{\circ}C$ on a rotary shaking incubator(180rpm). Actinomycetes CS0703 produced high level of protease at late exponential phase when grown in OSYM medium (oatmeal 2.0%. soybean meal 1%. dried yeast 1%. mannitol 1%). (omitted)
1. The effects of saline and alkaline salts on the content of phosphorus in the leaves of selected vegetable plants under soil and sand culture was investigated. 2. The reduction of growth was associated with increasing intensity of salts, although no significant differences was evident. 3. Phosphorus content in the leaves of two plants was depressed with increasing concentration of two typs of salts. 4. It was noticed that the phosphorus content increased with treated salts. That is, phosphorus content was higher in the leaves of treated salt plots than that of control plots and the difference was significant in the soil culture. 5. The values of the phosphorus content were higher in the leaves of two crops of NaCl plots than that of $Na_2CO_3$ plots and the difference was significant in Radish.
An alkaline lipase producing bacteria was isolated from soil and identified as Serratia liquefaciens AL-11. from the results of analysis of its morphological, biochemical and physiological properties. This strain showed the highest productivity of alkaline lipase when grown at pH 9.0 and 30$\circ$C for 42 hours in the medium of 1% peptone, 0.5% tryptone, 0.9% yeast extract, 1% starch, 1% tween 80, 0.05% CaCl$_{2}$ and 0.05% NaCl. The enzyme was purified by ammonium sulfate treatment, Sephadex G-100 gel filtration and DEAE-Sephadex A-50 column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 27 unit/mg protein and the yield of enzyme activity was 61.3%. The homogeneity of the purified enzyme was verified by polyacrylamide gel disc electrophoresis. Molecular weight of the purified enzyme was estimated about 53,000 by sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis. This enzyme is composed of 17 amino acids of which glycine, proline and glutamic acid were three miajor acids.
계명활성제 내성이 있으면서 호알카리성인 protease를 생산하는 미생물을 토양에서 분리하였다. 분리된 미생물을 형태적, 생리학적, 화학분류학적 및 5S RNA 분석으로 동정한 결과 Bacillus sp.인 것으로 판명되었다. 호알카리성 protease는 황산암모늄 분획, DEAE-Cellulose, CM-Cellulose, Sephadex G-100 column chromatogrphy로 분리, 정제하였다. 정제된 호알카리성 protease는 casein에 대하여 pH6.0에서 11.0 사이에서 안정성을 나타내었다. 분리된 효소의 작용 최적 온도는 $55^{\circ}C$이었다. 이 효소는 diisopropyl fluorophosphate(DFP)로 완전히 불활성화되는 것으로 보아 serine protease로 추정되며 계면활성제의 존재하에서도 안정하였다.
일반 토양과 부엽토, 퇴비로부터 alkaline cellulase 생성이 우수한 균주를 분리한 후 형태적, 배양학적 및 생화학적 동정을 실시한 결과 호알칼리성 Bacillus sp. HSH-810 균주인 것으로 판명되었다. 분리균 Bacillus sp. HSH-810의 생육과 효소 활성은 $30^{\circ}C$와 pH 10.0에서 가장 높은 것으로 나타났다. 본 균주는 배지 중에 탄소원과 질소원, 무기염으로 1.0%의 CMC와 0.5%의 peptone, 0.02%의 $CaC1_2$, $CoC1_2$를 사용하였을 경우 최대의 alkaline cellulase생산성을 나타내었다. 효소의 최적 활성 pH와 온도는 각각 10.5와 $50^{\circ}C$였다. 이 효소는 pH 6.0-13.0과 $50^{\circ}C$의 온도에서 매우 안정하였다. 효소액에 계면활성제를 첨가하여 효소 활성을 측정한 결과, 효소액은 sodium-$\alpha$-olefin sulfonate (AOS)와 sodium dodecyl sulfonate (SDS), Tween 20, Tween 80에 대하여 안정성 이 높은 특징을 보였으나 0.1%의 linear alkyl-benzene sulfonate (LAS)를 첨가한 경우에는 효소 활성이 심하게 저해되었다.
토양에서 분리된 Alkaline Protease생산균주는 Bacills subtilis로 동정되었다. 본 균주의 최적배양온도는 최적 배지조건에서 $35^{\circ}C$이며, 초기 배지 pH는 10.5였다. 효소역가는 Casein-Folin법으로 약 2,300 Unit/ml로 나타났다. 배양액에 일련의 정제과정을 실시한 결과 정제배수 9.2, 회수율 14%의 정제효소를 얻었으며, 분자량은 19,000이었다. 정제효소의 반응최적온도는 $70^{\circ}C$, 최적 PH는 12였다. $Fe^{++}$에 의해 활성이 저하되었으며, 또한 serine protease inhibitor인 PMSF에 의해 활성이 저해되었다. 이것으로 부터 본 효소는 활성부위에 serine을 갖는 serine protease의 일종임을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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