• 미생물학회지
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• 제32권2호
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• pp.102-108
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• 1994

ABF1(Autonomously replicating sequence Binding Factor 1)은 효모 genome에서 $RTCRYN_5ACG$의 염기 서열을 가지고 있는 promoter, mating-type silencer, ARS에 결합하는 DNA binding 단백질이다. E. coli 에서 ABF1 유전자를 발현하기 위하여, ABF1 유전자를 pMAL-c2 벡터에 cloning하였다.(pMAHW). pMAHW를 E. coli에 형질전환하여, ABF1 융합단백질을 발현시키고, amylose resin affinity chromatography에 의하여 분리하였다. Factor Xa protease를 이용하여 분리된 융합단백질로부터 maltose binding protein을 잘라낸 후에 gel retardation analysis 방법으로 분리된 ABF1이 ARS1에 결합하는 능력을 지니고 있음을 확인하였다. DNA 결합에 관련된 부위를 찾기 위하여, 비전형적인 zinc finger motif가 위치하는 자리에서 pMAHW의 ABF1 유전자에 His-61을 다른 아미노산으로 치환하였다. DNA binding 부위로 추정되는 ABF1 단백질의 중간지역에 Leu-353, Leu-360를 다른 아미노산으로 치환하였다. Site-specific mutagenesis 를 통해 만들어진 mutant를 gel retardation analysis와 complementation test를 통해서 비전형적인 zinc finger motif이외에 다른 DNA binding motif가 있는 것을 알 수 있었다.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제55권3호
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• pp.369-378
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• 2017

혈관 내피세포 성장인자(Vascular endotherial growth factor, VEGF)는 혈관 투과율 조절이나 혈관 생성에 관련된 단백질로 임상용으로 쓰일 가능성이 높다. 이 단백질은 고순도와 고효율로 상업적으로 대량생산이 필요하다. 유비퀴틴 융합 단백질로 온화한 조건에서 용해시키기 위해 다양한 조건을 연구하였고, pH와 변성제 변화를 시도하였다. BL21 (DE3) 대장균 숙주세포에서 pET28-a 벡터를 사용하여 재조합 대장균을 제조하여, 20 L의 회분식 배양으로 14 g/L농도의 세포배양을 하였다. 발효 후UBP1 효소 분해와 재접힘 단계를 포함한 4단계의 크로마토그래피 공정으로 구성된 정제공정으로 VEGF를 정제하였다. 유비퀴틴 융합단백질로 2 M 요소와 pH10 온화한 조건에서 VEGF의 정제가 가능하였다. 2번의 Ni-affinity 크로마토그래피컬럼을 이용하여 고효율의 재접힘과 이합체화 공정을 수행하였다. DEAE (Diethyl Amino Ethyl) 음이온 교환 컬럼을 통하여 변형체(multimeric, misfolded)단백질과 endotoxin을 제거 할 수 있었다. 젤 여과 크로마토그래피를 이용하여 dimer와 monomer를 분리 하여 이합체화 VEGF를 제조하였다. 최종 VEGF의 특성분석을 SDS-PAGE (Soidum Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 전기영동, RP-HPLC (Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography)으로 하여 순도 97% (RP-HPLC기준)를 얻었다.

• 약학회지
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• 제30권5호
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• pp.220-227
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• 1986

Polyphenol oxidase was purified from an extract of tea leaf by ammonium sulfate fractionation followed by Sephadex G-150 column chromatography, which resulted in a 67-fold increase in specific activity. The enzyme had optimum pH 6.5 and was relatively heat stable. The substrate specificity of the tea leaf PPO showed high affinity toward pyrogallol and catechol. Potassium cyanide, sodium diethyldithiocarbamate, L-cysteine, 2-mercaptoethanol and ascorbic acid were potent inhibitors.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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• pp.612-612
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• 2003

• BMB Reports
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• 제32권3호
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• pp.306-310
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• 1999

The partial cDNA of the MT-c clone encoding snake venom metalloprotease was subcloned and expressed in E. coli. The expressed metalloprotease was purified by affinity chromatography in the presence of urea, and then successfully refolded into its functional form, retaining metalloprotease activity that hydrolyzes fibrinogen. The simple and convenient refolding strategy established in this work was highly efficient in recovering the recombinant enzyme activity. Experimental evidence suggests that the C-terminal amino acid stretch of 16 residues is a critical sequence for proper folding of the metalloprotease domain.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 2000년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.286.2-286
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• 2000

No Abstract, See Full Text

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 2000년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.239.1-239
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• 2000

No Abstract, See Full Text

• 한국막학회:학술대회논문집
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• 한국막학회 1998년도 춘계 총회 및 학술발표회
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• pp.120-123
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• 1998

1. 서론 : 생물기술이 급속히 발전함에 따라 다양한 생물제품들(예, 단백질, 효소, 항생제 등)이 생산되고 있으나, 그 생산량은 극단적으로는 기질용액 1g당 10$^{-8}$g 정도로까지 낮아, 이를 고순도로 정제하기 위해서는 다단계의 공정이 필요하여 분리정제의 비용이 크다. 따라서 생물제품의 산업적 생산이 경제성을 갖기 위해서는 생물제품을 보다 경제적으로 분리정제할 수 있는 효율적인 공정개발이 필수적이다. (생략)

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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• pp.317.1-317.1
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• 2003

Carbohydrate-binding proteins have been isolated from various sources, including plants, animals, fungi, and bacteria, and they have been used extensively in the detection, localization, and isolation of glycoconjugates. Many carbohydrate-binding proteins are purified from mushrooms, however, only a few proteins with sialic acid-binding specificity have been reported. In the present study, a novel sialic acid-binding protein, designated PJA, has been purified from the mushroom Paecilomyces japonica. followed by extraction and affinity chromatography. (omitted)

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제8권2호
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• pp.64-75
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• 2003

Aptamers are functional nucleic acids that can specially bind to proteins, peptides, amino acids. nucleotides, drugs, vitamins and other organic and inorganic compounds. The aptamers are identified from random DNA or RNA libraries by a SELEX (systematic evolution of ligands by exponential amplification) process. As aptamers have the advantage, and potential ability to be released from the limitations of antibodies, they are attractive to a wide range of therapeutic and diagnostic applications. Aptamers, with a high-affinity and specificity, could fulfil molecular the recognition needs of various fields in biotechnology. In this work, we reviewed some aptamer Selection techniques, properties, medical applications of their molecules and their biotechnological applications, such as ELONA (enzyme linked oligonucleotide assay), flow cytometry, biosensors, electrophoresis, chromatography and microarrays.