• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• v.20 no.4
• /
• pp.789-797
• /
• 2010

The limited information on differential gene expression in the different serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae has significantly hampered the research on the pathogenic mechanisms of this organism and the development of multivalent vaccines against A. pleuropneumoniae infection. To compare the gene expressions in the A. pleuropneumoniae strains CVCC259 (serotype 1) and CVCC261 (serotype 3), we screened the differentially expressed genes in the two strains by performing representational difference analysis (RDA). Northern blot analyses were used to confirm the results of RDA. We identified 22 differentially expressed genes in the CVCC259 strain and 20 differentially expressed genes in the CVCC261 strain, and these genes were classified into 11 groups: (1) genes encoding APX toxins; (2) genes encoding transferrin-binding protein; (3) genes involved in lipopolysaccharide (LPS) biosynthesis; (4) genes encoding autotransporter adhesin; (5) genes involved in metabolism; (6) genes involved in the ATP-binding cassette (ABC) transporter system; (7) genes encoding molecular chaperones; (8) genes involved in bacterial transcription and nucleic acid metabolism; (9) a gene encoding protease; (10) genes encoding lipoprotein/membrane protein; and (11) genes encoding various hypothetical proteins. This is the first report on the systematic application of RDA for the analysis of differential gene expression in A. pleuropneumoniae serotypes 1 and 3. The determination of these differentially expressed genes will serve as an indicator for future research on the pathogenic mechanisms of A. pleuropneumoniae and the development of a multivalent vaccine against A. pleuropneumoniae infection.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• v.25 no.10
• /
• pp.1606-1613
• /
• 2015

Porcine pleuropneumonia is an infectious disease caused by Actinobacillus pleuropneumoniae. The identification of A. pleuropneumoniae genes, specially expressed in vivo, is a useful tool to reveal the mechanism of infection. IVIAT was used in this work to identify antigens expressed in vivo during A. pleuropneumoniae infection, using sera from individuals with chronic porcine pleuropneumonia. Sequencing of DNA inserts from positive clones showed 11 open reading frames with high homology to A. pleuropneumoniae genes. Based on sequence analysis, proteins encoded by these genes were involved in metabolism, replication, transcription regulation, and signal transduction. Moreover, three function-unknown proteins were also indentified in this work. Expression analysis using quantitative real-time PCR showed that most of the genes tested were up-regulated in vivo relative to their expression levels in vitro. IVI (in vivo-induced) genes that were amplified by PCR in different A. pleuropneumoniae strains showed that these genes could be detected in almost all of the strains. It is demonstrated that the identified IVI antigen may have important roles in the infection of A. pleuropneumoniae.

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• v.37 no.sup2
• /
• pp.297-310
• /
• 2007

치조골 흡수는 파골세포와 matrix metalloproteinases (MMPs)에 의한 골의 무기질과 유기질의 파괴로 일어나는 과정이다. 세균성 산물, 주로 내독소는 치은조직 내에서 염증세포의 유주, 사이토카인 생산, 조직파괴 효소 분비 및 파골세포 활성 등의 국소 면역반응을 유도한다. A. actinomycetemcomitans는 급진성 치주염의 원인 균주중 하나로 그 내독소는 치조골의 흡수와 관련된다. MMP-13은 세균성 산물이나 염증성 사이토카인의 자극에 의해 분비되며, 최근의 연구 결과들은 MMP-13이 치주질환의 진행과 골 흡수 과정에서 일정한 역할을 담당하는 것으로 보고하고 있으나, A. actinomycetemcomitans 내독소와 MMP-13과의 관련성에 대한 연구는 미미하다. 이에 이번 연구에서는 A. actinomycetemcomitans 내독소에 의한 MMP-13의 발현과 파골세포 형성을 세포배양을 통하여 관찰하였고, 백서 구개부 치은에 A. actinomycetemcomitans 내독소를 주입하여 흡수가 진행되고 있는 치조골에서 파골세포의 분화와 MMP-13의 발현을 TRAP 염색, 면역조직화학적 방법 등을 통해 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. MMP-13 mPNA의 발현은 A. actinomycetemcomitans 내독소 (1ug/ml)로 24시간 자극한 마우스 치주인대 섬유모세포에서 생리식염수로 자극한 세포에 비하여 약 2.6배 증가하였으며 마우스 대식세포에서는 TRAP 양성 세포가 대조군보다 더 많이 나타났다. A. actinomycetemcomitans 내독소를 주입한 백서 치주조직에서는 대조군보다 더 심한 골소실을 보였다. TRAP-양성 다핵 파골세포 유사세포는 치주염군과 대조군 모두 치조골에서 관찰되었다. TRAP-양성 다핵 파골세포 유사세포는 치주염군에서 대조군보다 유의하게 많은 숫자가 관찰되었으며, 치주염군에서 대조군보다 유의하게 많은 숫자가 관찰되었다. MMP-13 면역양성 반응은 치주염군에서 거친 골연을 갖는 치조골상에 배열된 조골세포와 그 인접한 치주인대에서 관찰되었으며 대조군에서는 MMP-13 면역 양성 반응이 치조골 표면에서만 일부 관찰되었다. 이상의 결과는 A. actinomycetemcomitans 내독속가 MMP-13의 발현을 증가시키며 파골세포의 활성을 통하여 치조골의 흡수를 유도함을 시사한다. 또한 A. actinomycetemcomitans 내독소 투여에 의한 실험적 모델은 백서에서 중등도의 골 소실을 동반한 만성 치주염 모델로 향후 치주질환 치료제의 효과를 평가하는데 유용하게 사용될 수 있으리라 기대된다.

• The Journal of the Korean dental association
• /
• v.22 no.1 s.176
• /
• pp.57-66
• /
• 1984

Twelve patients of localized juvenile periodontitis were evaluated to detection of serum IgG and IgM antibodies to Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4 strain. Sera were isolated from those patients. Antibody titer of patients sera to Aa stran Y4 strain. Sera were isolated from those patients. Antibody titer of patients sera to Aa stran Y4 were determined by modified enzyme-linked immunosorbent assey (ELISA) using sonicated and formalin-fixed whole Aa y4 strain for detection of serum IgG and IgM antibody titers. To compare with health control and L.J.P., we used 12 healthy dental student who did not exhibited any gingivits. Results were determined by using ELISA reader at 400mm absorbance value. Data analysis were performed with comparison of the regression functions relating absorbance to dilution and Dunnett t-test. Significant high antibody titer to As Y4 in L.J.P. sera were shown in this examination(281. 4 Eu-G to 162.80 Eu-G, 106.0 Eu-M to 40.0 Eu-M for sonicated As Y4 antigen and 653.960. to 138.117 Eu-M for intact As Y4) and this data were also statistically significant (P<0.05). This work was supported in part from Seoul national University Hospital Grant and Korean Science Foundation.

• Journal of Veterinary Science
• /
• v.21 no.2
• /
• pp.20.1-20.13
• /
• 2020

Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes a form of porcine pleuropneumonia that leads to significant economic losses in the swine industry worldwide. The apxIBD gene is responsible for the secretion of the ApxI and ApxII toxins and the pnp gene is responsible for the adaptation of bacteria to cold temperature and a virulence factor. The apxIBD and pnp genes were deleted successfully from APP serotype 1 and 5 by transconjugation and sucrose counter-selection. The APP1ΔapxIBDΔpnp and APP5ΔapxIBDΔpnp mutants lost hemolytic activity and could not secrete ApxI and ApxII toxins outside the bacteria because both mutants lost the ApxI- and ApxII-secreting proteins by deletion of the apxIBD gene. Besides, the growth of these mutants was defective at low temperatures resulting from the deletion of pnp. The APP1ΔapxIBDΔpnp and APP5ΔapxIBDΔpnp mutants were significantly attenuated compared with wild-type ones. However, mice vaccinated intraperitoneally with APP5ΔapxIBDΔpnp did not provide any protection when challenged with a 10-times 50% lethal dose of virulent homologous (APP5) and heterologous (APP1) bacterial strains, while mice vaccinated with APP1ΔapxIBDΔpnp offered 75% protection against a homologous challenge. The ΔapxIBDΔpnp mutants were significantly attenuated and gave different protection rate against homologous virulent wild-type APP challenging.

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• v.37 no.sup2
• /
• pp.409-426
• /
• 2007

세균성 치태는 치은의 염증과 치주 조직 파괴를 동반하는 치주염의 주요한 인자로서 치주 조직 건강을 유지하기 위하여 적절한 치태 조절이 필요하다. 본 논문의 목적은 12주 동안 만성 초기 및 중등도 치주염 환자에서 치은염에 대한 임상 지수의 감소, interleukin-6 (IL-6) 농도와 치주질환 원인균인 Prevotella intermedia (P. intermedia), Actinobacillus actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans)에 대한 소니케어 전동 칫솔의 효과를 일반 칫솔과 비교해 보고자 하는 데 있다. 총 82명의 환자를 선택하였으며, 30명은 일반 칫솔, 52명은 소니케어 전동 칫솔 군으로 분류하여 칫솔질 교육을 실시하였다. 전악을 전치부와 구치부로 나누어 초진, 1, 4, 12주에서의 치태, 치은 지수 및 탐침 시 출혈 여부를 조사하였으며, 가장 깊은 치주낭 탐침을 보이는 치아 3개를 선택하여 탐침 깊이와 부착 정도를 측정하였고, 선택된 치아에서 초진, 1, 12주에 채취된 샘플을 통해 치은열구액 내의 IL-6 농도와 P. intermedia, A. actinomycetemcomitans의 CT값을 추가적으로 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1 소니케어 전동 칫솔과 일반 칫솔군 모두 치은 염증을 나타내는 임상 지수 (치태지수, 치은지수, 탐침 시 출혈)는 12주 기간 동안 유의한 감소 (p<0.05)를 보였으나, 전동 칫솔 군에서 통계학적으로 더욱 유의하게 (p<0.05) 나타났다. 2. 전치부를 제외한 구치부 치아에서 소니케어 전동 칫솔군은 12주 기간 동안 탐침 시 출혈의 감소가 통계학적으로 유의하게 (p<0.05) 나타났다. 3. 가장 깊은 치주낭 탐침 깊이를 보이는 3개의 선택된 치아에서 치주낭 탐침 깊이와 부착 정도는 두 군 모두 초진에 비해 유의한 감소 (p<0.05)를 보였다. 퍼센트 변화 비교에서 치주낭 탐침 깊이는 소니케어 전동 칫솔군이 $18.47{\pm}10.05%$, 일반 칫솔군이 $14.19{\pm}8.16%$로, 부착 정도는 소니케어 전동 칫솔군이 $24.26{\pm}12.51%$, 일반 칫솔군이 $15.65{\pm}9.92%$로 각각 나타났으나, 군 간 통계적 유의차는 보이지 않았다. 4. 치은열구액의 IL-6 농도는 두 군 모두 12주 기간 동안 통계적으로 유의한 감소 (p<0.05)를 나타내었다. 퍼센트 변화 비교에서 전동 칫솔군은 51%, 일반 칫솔군은 37%로 각각 나타났으나, 군 간 통계적 유의차는 보이지 않았다. 5. Prevotella intermedia, Actinobacillus actinomycetemcomitans의 관찰에서 두 군 모두 유의한 차이는 없었다. 위 결과를 통해 본 연구에서는 소니케어 전동 칫솔의 사용이 일반 칫솔에 비하여 만성 초기 및 중등도 치주염 환자에서 치태의 제거, 치은 염증 및 임상 지수의 감소에 유의한 효과가 있으며 IL-6의 감소 경향에도 효과가 있음을 관찰하였다.

• Korean Journal of Veterinary Service
• /
• v.17 no.2
• /
• pp.95-113
• /
• 1994

To establish an effective diagnostic measure for detection of the antibodies against Actinobacillus pleuropneumoniae, the methods for tube agglutination test (TAT), plate agglutination test (PAT), micro-agglutination test(MAT) and agar-gel immunodiffusion test(ID) were improved and standarized, and the comparative studies were carried out. The results obtained through the experiments were summarized as follows. 1. The rabbit hyperimmune sera to reference serotypes 1 to 6 were cross-tested with TAT, PAT, MAT and ID. In the homologous systems, the range of antibody titers in TAT was 80 to 640, showing the cross-reaction in serotypes 3, 4, 5 and 6. The range of antibody titers in PAT was 4 to 64, showing the cross-reaction in serotypes 3, 4, 5 and 6. In ID, the range of antigen titers was 8 to 32, and cross-reaction was observed in serotype 5. 2. The optimal concentration of antigen in PAT and MAT were 100mg /ml and 1.25mg /ml respectively. The most sensitive reaction in MAT was observed in 52$^{\circ}C$ for 18hrs. 3. In ID, the most promising antigen and the buffer for agar-gel were EDTA-treated antigen and 0.05M tris buffer (pH 7.2), respectively. 4. By the tests for 200 swine sera, it was found that the frequency of positive reaction were 203 in TAT, 240 in PAT and 163 in ID. 5. When compared the titers of TAT with those of MAT for 200 swine sera, MAT showed the higher titer than TAT being increased by relative correlation. Int was found that the titer for positive readings were 20 in TAT and 40 in MAT. 6. when compared the results of ID with those of TAT for 200 swine sera, all sera with TAT titer under 10 were negative in ID. Of the sera with TAT titer 20 and 40, 55.1% nd 91.8% were positive in ID, respectively. All sera with TAT titer above 80 were positive in ID. In comparison of ID and MAT, all sera with MAT titer under 20 were negative in ID. Of the sera with MAT titer 40 and 80, 24.7% and 93.9% were positive in ID, respectively. All sera with MAT titer over 160 showed positive in ID. 7. In conclusion, the established MAT showed high sensitivity but low specificity, wherease ID revealed low sensitivity but high specificity.

• The Journal of the Korean dental association
• /
• v.24 no.11 s.210
• /
• pp.961-968
• /
• 1986

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• v.17 no.1
• /
• pp.102-102
• /
• 1987

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• v.17 no.1
• /
• pp.107-107
• /
• 1987